發(fā)布時(shí)間：2017-04-18 13:02

  本文關(guān)鍵詞：復(fù)方新斯的明山莨菪堿對(duì)缺血性腦卒中的治療作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：腦卒中又稱腦中風(fēng),具有高致殘率、高致死率、高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn),是人類致死率排名第二高的疾病,嚴(yán)重威脅著人類健康和生命。在我國(guó),隨著人口老齡化的發(fā)展及人們生活方式的改變,腦卒中發(fā)病率有逐年增多的趨勢(shì),腦卒中預(yù)后極差,給病人、家庭和社會(huì)造成嚴(yán)重精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。腦卒中主要分為缺血性卒中和出血性卒中,多數(shù)腦卒中病人為缺血性腦卒中。目前對(duì)缺血性腦卒中的治療方法主要是：溶栓和抗血小板聚集,治療時(shí)間窗窄且有出血風(fēng)險(xiǎn),所以對(duì)腦卒中的預(yù)防和治療是擺在人類面前很棘手的課題,研發(fā)出安全有效的抗腦卒中藥物尤為迫切。我們課題組前期研究表明：膽堿酯酶抑制劑甲硫酸新斯的明,可以增加內(nèi)源性乙酰膽堿含量,進(jìn)而發(fā)揮腦保護(hù)作用,新斯的明發(fā)揮腦保護(hù)作用是通過乙酰膽堿煙堿型受體(nAChR)而非乙酰膽堿毒蕈堿型受體(mAChR),然而單用新斯的明治療腦卒中會(huì)發(fā)生很多副反應(yīng),包括：心動(dòng)過緩、腹痛、流涎、支氣管痙攣等。作為非選擇性M受體阻斷劑的山莨菪堿,研究表明其具有抗炎抗感染性休克的作用。分別結(jié)合新斯的明和山莨菪堿單藥的作用,我們考慮將其組成復(fù)方用于治療缺血性腦卒中,找出最佳復(fù)方配比并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法：實(shí)驗(yàn)一：新斯的明和山莨若堿聯(lián)合給藥,篩選出治療缺血性腦卒中最佳復(fù)方比例。雄性SD大鼠(240-270 g)70只,2%異氟烷氣體麻醉,大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)制作急性缺血性腦卒中模型,術(shù)后立即舌下靜脈給予藥物,新斯的明10、20、40μg/kg,山莨菪堿10、20、40 mg/kg,對(duì)照組給予生理鹽水,激光多普勒檢測(cè)手術(shù)前后腦血流(CBF)的變化情況。24 h后神經(jīng)學(xué)評(píng)分,然后脫臼處死動(dòng)物,取腦切片進(jìn)行1% TTC染色,數(shù)碼相機(jī)拍照統(tǒng)計(jì)腦梗死面積。根據(jù)單藥結(jié)果用山莨菪堿20 mg/kg與新斯的明10、20、40、80 gg/kg組成復(fù)方,找出最佳復(fù)方比例。實(shí)驗(yàn)二：根據(jù)最佳復(fù)方比例觀察該復(fù)方的量效關(guān)系,確定最佳復(fù)方配伍,然后根據(jù)最佳復(fù)方配伍完成時(shí)效關(guān)系實(shí)驗(yàn),確定最佳治療時(shí)間窗。根據(jù)復(fù)方新斯的明山莨菪堿最佳復(fù)方比例(1：500),設(shè)定三個(gè)復(fù)方配比劑量,分別為：新斯的明+山莨菪堿10μg/kg+5 mg/kg,20μg/kg+10 mg/kg,40μg/kg+20 mg/kg,篩選出最佳配比,根據(jù)該配比分別做了MCAO后1、1.5和2h后給藥的時(shí)效實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)三：觀察該復(fù)方藥物與α7nAChR的作用關(guān)系。體外實(shí)驗(yàn)選用小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7,給藥組給予復(fù)方藥物(新斯的明0.2μg/ml+山莨菪堿100μg/ml)或者750μM的ACh進(jìn)行處理,對(duì)照組給予生理鹽水,20 min后用含熒光標(biāo)記的a-Bgt著色,多聚甲醛固定后用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)四：進(jìn)一步驗(yàn)證該復(fù)方藥物通過a7nAChR發(fā)揮治療急性缺血性腦卒中的作用。用a7nAChR基因敲除和同窩野生型小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察藥物對(duì)a7nAChR敲除小鼠和野生型小鼠MCAO后腦梗死面積及神經(jīng)學(xué)評(píng)分的影響。實(shí)驗(yàn)五：觀察該復(fù)方通過a7nAChR發(fā)揮腦保護(hù)作用的下游機(jī)制。根據(jù)a7nAChR敲除與否和給藥與否將實(shí)驗(yàn)分成四組,n=6。ELISA測(cè)定動(dòng)物血清炎性細(xì)胞因子如：(TNF-α, IL-1α和IL-6)等的含量,對(duì)比野生型和基因敲除動(dòng)物給藥與否對(duì)炎性因子含量差異的影響。采用Western Blot檢測(cè)該復(fù)方藥物對(duì)野生型小鼠MCAO后梗死半暗帶細(xì)胞凋亡因子(caspase-8, cleaved caspase-8, caspase-12, Bad, Bax, Bcl-2, Bcl-xl)等的影響,找出有差異的凋亡因子,用a7nAChR基因敲除小鼠進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞凋亡通路作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：一、新斯的明和山莨菪堿分別單獨(dú)給藥都可以明顯減少腦梗死面積,新斯的明20和40 μg/kg劑量下腦梗死面積明顯變小,山莨菪堿20和40 mg/kg劑量下腦梗死面積明顯變小。新斯的明40 μg/kg+山莨菪堿20 mg/kg的復(fù)方組合腦梗死面積最小,腦保護(hù)作用最強(qiáng)。確定該復(fù)方的最佳比例為：1：500。二、新斯的明和山莨菪堿最佳復(fù)方比例為：1：500,該復(fù)方比例呈一定的量效關(guān)系。復(fù)方新斯的明山莨菪堿最佳配伍為：新斯的明40μg/kg+山莨菪堿20 mg/kg o時(shí)效實(shí)驗(yàn)證明該復(fù)方的最佳治療時(shí)間窗為梗死后2h內(nèi)。三、激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果證明：該復(fù)方藥物能夠減弱a-Bgt與RAW264.7細(xì)胞表面的a7nAChR結(jié)合,且該復(fù)方可以促進(jìn)ACh與a7nAChR的結(jié)合。四、與野生型動(dòng)物相比,a7nAChR基因敲除動(dòng)物MCAO后腦梗死比例顯著增加,且給予復(fù)方藥物后梗死面積未明顯減小,神經(jīng)學(xué)評(píng)分亦未見改善。五、野生型小鼠給予復(fù)方藥物后死亡通路凋亡因子(caspase-8, cleaved caspase-8)未變化,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路凋亡因子(caspase-12)也沒有變化,線粒體凋亡通路促凋亡因子(Bad, Bax)表達(dá)量降低,抗凋亡因子(Bcl-2, Bcl-xl)表達(dá)量有所增加。但是在a7nAChR基因敲除小鼠上,藥物不能改變線粒體凋亡通路凋亡因子(Bad, Bax, Bcl-2, Bcl-xl)含量。結(jié)論：1.復(fù)方新斯的明山莨菪堿對(duì)大鼠急性缺血性腦卒中具有治療作用,且最佳復(fù)方配伍為：新斯的明+山莨菪堿(40μg/kg+20mg/kg),最佳治療時(shí)間在2h內(nèi)。2.該復(fù)方藥物通過α7nAChR發(fā)揮對(duì)缺血性腦卒中的治療作用。3.該復(fù)方通過α7nAChR下游抗炎通路和線粒體抗凋亡通路發(fā)揮腦保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：新斯的明 山莨菪堿 復(fù)方 MCAO α7nAChR 缺血性腦卒中
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮寫詞11-12
• 前言12-13
• 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法13-32
• 一、實(shí)驗(yàn)材料13-19
• 二、實(shí)驗(yàn)方法19-32
• 實(shí)驗(yàn)流程32-34
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-43
• 一、篩選新斯的明與山莨菪堿治療缺血性腦卒中最佳復(fù)方比例34-36
• 二、確定復(fù)方新斯的明山莨菪堿最佳配伍劑量36-37
• 三、觀察復(fù)方藥物對(duì)缺血性腦卒中的最佳治療時(shí)間窗37-38
• 四、復(fù)方新斯的明山莨菪堿促進(jìn)ACh與α7nAChR結(jié)合38-39
• 五、復(fù)方藥物通過α7nAChR發(fā)揮治療缺血性腦卒中作用39-40
• 六、復(fù)方藥物通過α7nAChR發(fā)揮下游抗炎作用40-41
• 七、復(fù)方藥物通過α7nAChR下游線粒體通路發(fā)揮抗凋亡作用41-43
• 討論43-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述49-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說明59-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 孔莉;孫中安;趙宏圖;;酮色林敷料對(duì)糖尿病足創(chuàng)面愈合的效果及其護(hù)理[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2011年07期

2 ;中國(guó)缺血性腦卒中和短暫性腦缺血發(fā)作二級(jí)預(yù)防指南2010[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2011年03期

  本文關(guān)鍵詞：復(fù)方新斯的明山莨菪堿對(duì)缺血性腦卒中的治療作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：314910