本文關(guān)鍵詞：中藥腎絡通對UUO大鼠腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型大鼠腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化標志物α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表達,檢測與其調(diào)控相關(guān)的信號通路因子腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)的改變,探討益氣活血通絡中藥腎絡通抑制UUO大鼠腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化的作用及機制,為該方的臨床應用提供實驗依據(jù)。方法:選用健康雌性清潔級Wistar大鼠48只,體重180±20克,實驗動物自由進食和飲水,溫度條件控制在(22±2)℃。適應性飼養(yǎng)1周后,48只大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham group)、UUO組(UUO group)、依普利酮組(EPL group)、腎絡通組(SLT group),每組12只。各組大鼠UUO造模方式如下:10%水合氯醛注射麻醉后,于左側(cè)中腹部切開皮膚,游離左側(cè)輸尿管,分別在輸尿管上1/3處和中1/3處用絲線結(jié)扎,隨后切斷輸尿管,逐層縫合皮膚。假手術(shù)組僅將輸尿管游離但不結(jié)扎離斷。術(shù)后開始給藥,依普利酮組以100 mg/(kg.d)依普利酮藥物加入飼料中;腎絡通組以腎絡通煎劑26g/(kg.d)入水瓶飲用,假手術(shù)組及UUO組給予等容量生理鹽水飲用,均每天1次。連續(xù)干預10天。10天后,各組大鼠稱重后斷頭處死,留取血液標本,備檢;切取梗阻側(cè)腎臟,除去被膜后稱重,部分腎組織置于4%多聚甲醛固定,部分腎組織-70℃保存用于提取RNA及蛋白。免疫組化及Western Blot方法檢測TNF-α、NF-кB、α-SMA的表達。結(jié)果:1各組大鼠一般情況比較假手術(shù)組大鼠一般情況良好:每日飲食、飲水量穩(wěn)定,體重逐步增長,毛發(fā)有光澤,活動敏捷,對外界刺激反應靈敏。UUO組動物的進食量、飲水量、體重均有所下降,與UUO組相比,依普利酮組及腎絡通組大鼠梗阻側(cè)腎重、腎重/體重明顯下降(P0.01,P0.05)。2各組大鼠腎組織病理形態(tài)學改變HE染色顯示,假手術(shù)組結(jié)構(gòu)正常,腎小管上皮細胞排列整齊,腎間質(zhì)有少量炎性細胞浸潤;UUO組腎小管明顯擴張,腎間質(zhì)大量炎性細胞浸潤,上皮細胞變性、濁腫、壞死、脫落;腎絡通組及依普利酮組亦可見腎小管擴張及上皮細胞變性壞死等,但炎性細胞浸潤明顯減少。Masson染色顯示,假手術(shù)組可見少量膠原成分表達,主要位于腎小球、腎間質(zhì)及腎小管基底膜;UUO組腎臟結(jié)構(gòu)紊亂,腎間質(zhì)膠原成分明顯增多;腎絡通組及依普利酮組與假手術(shù)組相比膠原纖維顯著增多,但較UUO組顯著減少。3免疫組化檢測各組大鼠TNF-α、NF-кB、α-SMA表達檢測TNF-α、NF-κB表達,結(jié)果顯示假手術(shù)組TNF-α、NF-κB呈弱表達,主要見于腎小管上皮細胞;UUO組表達明顯增強;依普利酮組及腎絡通組表達范圍及強度較UUO組均明顯減弱。假手術(shù)組檢測α-SMA顯示假手術(shù)組僅在血管有陽性表達;UUO組表達明顯增強,見于腎小管上皮細胞及腎間質(zhì);依普利酮組及腎絡通組表達較假手術(shù)組增強但明顯弱于UUO組。4腎組織TNF-α的m RNA表達Real time-PCR測定TNF-αm RNA表達結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,UUO組中TNF-αm RNA表達明顯增強;與UUO組相比,依普利酮組與腎絡通組均明顯下調(diào)。5 Western Blot檢測各組大鼠TNF-α、NF-кB、α-SMA表達采用Western Blot方法檢測TNF-α、NF-кB信號通路,結(jié)果顯示UUO組TNF-α、NF-кB蛋白表達明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);與UUO組比較,依普利酮組及腎絡通組表達均下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。檢測α-SMA的表達,結(jié)果顯示UUO組表達顯著上調(diào),與假手術(shù)組比較,有顯著差異(P0.01);依普利酮組及腎絡通組α-SMA表達較假手術(shù)組增強但明顯弱于UUO組。結(jié)論:1梗阻性腎病可誘導炎性介質(zhì)的分泌,刺激腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化,參與腎間質(zhì)纖維化的形成。2依普利酮通過阻斷醛固酮的作用,可減輕梗阻性腎病導致的腎臟損傷。3腎絡通抑制腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化減緩腎間質(zhì)纖維化的進展,其機制與下調(diào)TNF-α、NF-κB的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：中藥 腎間質(zhì)纖維化 腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化 炎性介質(zhì) 腫瘤壞死因子-α 核因子-κB α-平滑肌肌動蛋白
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-15
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 結(jié)果15-18
• 1 各組大鼠一般情況比較15-16
• 2 各組大鼠腎組織病理形態(tài)學改變16
• 3 免疫組化檢測各組大鼠 α-SMA、TNF-α、NF-κB(p65)表達16
• 4 Real time -PCR 測定 TNF-α m RNA 表達16
• 5 Western Blot 檢測各組大鼠 TNF-α、NF-кB、α-SMA 表達16-18
• 附圖18-24
• 附表24-25
• 討論25-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻33-39
• 綜述 腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化的研究進展39-53
• 參考文獻45-53
• 致謝53-55
• 個人簡歷55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許慶友;韓琳;秦建國;丁英鈞;蓋銀玲;王月華;潘莉;谷艷麗;張磊磊;王箏;;趙玉庸“腎絡瘀阻”病機學說及臨床應用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2010年05期

2 閆U

本文編號：310855