益氣養(yǎng)陰清熱利濕方對(duì)IgA腎病大鼠腎臟組織NF-κB和MCP-1的影響
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【摘要】:目的:通過(guò)構(gòu)建Ig A腎病大鼠模型,予以益氣養(yǎng)陰清熱利濕方進(jìn)行干預(yù),觀察Ig A腎病大鼠病理組織的變化,檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、腎功能,用免疫組化法、RT-PCR法測(cè)定核因子-κB(NF-κB)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在大鼠腎臟組織中的表達(dá),探求益氣養(yǎng)陰清熱利濕方治療Ig A腎病的作用機(jī)制,為臨床治療Ig A腎病提供新的思路和方法。方法:雄性6周齡SD大鼠,40只,健康、清潔,重量在140~160g左右,在溫度:20℃~24℃,相對(duì)濕度:40%-60%的環(huán)境中,適應(yīng)性飼養(yǎng)7天,第7天末檢測(cè)尿蛋白陰性、潛血陰性者,依據(jù)體重隨機(jī)分為4組:正常組:10只、模型組10只、貝那普利組10只、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組10只。正常組予蒸餾水灌胃,以4ml/kg計(jì)算,隔日1次,連用6周;皮下注射蓖麻油0.6 ml,1次/周,連用9周;于第6、8周末Na Cl注射液注入尾靜脈,每只用量0.2ml。模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組均用濃度為100 g/L免疫原BSA灌胃,每只大鼠用量以400mg/kg(4ml/kg)計(jì)算,連用6周;0.1ml CCl4+0.5ml蓖麻油皮下注射,1次/周,連用9周;于第6、8周末用濃度為0.25g/L脂多糖注射液注入尾靜脈,每只注射0.05mg(0.2ml)。第10周起開(kāi)始給藥,益氣養(yǎng)陰清熱利濕組用益氣養(yǎng)陰清熱利濕中藥藥液灌胃,貝那普利組用貝那普利混懸液灌胃,正常組、模型組用純凈水灌胃,用藥8周。分別于造模前、第7、第9、第13、第17周末檢測(cè)24h尿蛋白定量。18周末將大鼠禁食水12h,稱(chēng)重,按照3.50ml/kg用量將10%水合氯醛注入腹腔,進(jìn)行麻醉,于腹主動(dòng)脈取血,測(cè)定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。觀察大鼠腎組織病理變化。分別用免疫組化法、RT-PCR法測(cè)定NF-κB、MCP-1在腎組織的表達(dá)情況。結(jié)果:1 24h尿蛋白定量24h尿蛋白定量:用藥干預(yù)后,于第17周末,兩個(gè)治療組(即貝那普利組與益氣養(yǎng)陰清熱利濕組)間相比較,無(wú)顯著性差異(P0.05)。兩治療組與模型組進(jìn)行比較,尿蛋白均明顯降低,有顯著性差異(P0.05)。2腎功能正常組、模型組及兩治療組(貝那普利組與益氣養(yǎng)陰清熱利濕組)之間差異均不明顯(P0.05)。3腎組織病理改變光學(xué)顯微鏡觀察:在正常組,大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整;在模型組觀察到系膜細(xì)胞增生、系膜基質(zhì)增多;兩治療組(即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組)大鼠系膜細(xì)胞輕度增生和系膜基質(zhì)增多,相對(duì)于模型組,病變減輕。免疫熒光觀察:主要觀察免疫復(fù)合物沉積在大鼠腎小球系膜區(qū)有無(wú)沉積。正常組大鼠腎小球系膜區(qū)未見(jiàn)免疫復(fù)合物沉積,在模型組觀察到有熒光綠色免疫復(fù)合物沉積,兩治療組(即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組)大鼠也有不同程度的免疫復(fù)合物沉積,但較模型組減輕。4免疫組化染色法檢測(cè),NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)NF-κB陽(yáng)性表達(dá)情況:正常組弱,其余三組明顯增強(qiáng)(P0.05);相對(duì)于模型組,兩治療組(即貝那普利、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組)表達(dá)減弱(P0.05);貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組兩治療組間相比較,無(wú)明顯差異(P0.05)。MCP-1陽(yáng)性表達(dá)情況:正常組弱,其余三組明顯增強(qiáng)(P0.05);模型組高于兩治療組(即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組),差異明顯(P0.05);貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組兩治療組間相比較,無(wú)明顯差異(P0.05)。通過(guò)免疫組化法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),NF-κB與MCP-1在腎組織的表達(dá)呈正相關(guān)。5 RT-PCR法檢測(cè),NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)相對(duì)于正常組,模型組、兩治療組(即益氣養(yǎng)陰清熱利濕組與貝那普利組)大鼠NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P0.05);與模型組比較,益氣養(yǎng)陰清熱利濕組、貝那普利組兩治療組大鼠NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)均減弱(P0.05);但益氣養(yǎng)陰清熱利濕組與貝那普利組進(jìn)行組間比較,無(wú)明顯差異(P0.05)。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示,NF-κB與MCP-1在腎組織的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論:1益氣養(yǎng)陰清熱利濕方能明顯降低Ig A腎病大鼠的尿蛋白,進(jìn)而保護(hù)腎功能;2益氣養(yǎng)陰清熱利濕方能改善Ig A腎病大鼠腎組織的病理?yè)p傷情況,延緩Ig A腎病的進(jìn)展;3益氣養(yǎng)陰清熱利濕方可能通過(guò)降低NF-κB、MCP-1在Ig A腎病大鼠腎臟組織的表達(dá),降低炎癥反應(yīng),進(jìn)而防止腎小球系膜增生、系膜硬化、基質(zhì)沉積,延緩Ig A腎病的發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】:IgA腎病 核因子-κB 單核細(xì)胞趨化蛋白-1 益氣養(yǎng)陰清熱利濕 動(dòng)物模型 系膜增生
【學(xué)位授予單位】:河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類(lèi)號(hào)】:R285.5
【目錄】:
- 中文摘要4-7
- 英文摘要7-11
- 英文縮寫(xiě)11-12
- 前言12-13
- 材料與方法13-19
- 結(jié)果19-22
- 附圖22-32
- 附表32-34
- 討論34-40
- 結(jié)論40
- 參考文獻(xiàn)40-44
- 綜述 中醫(yī)對(duì)IgA腎病的認(rèn)識(shí)與研究現(xiàn)狀44-52
- 參考文獻(xiàn)50-52
- 致謝52-53
- 個(gè)人簡(jiǎn)歷53
【參考文獻(xiàn)】
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本文關(guān)鍵詞:益氣養(yǎng)陰清熱利濕方對(duì)IgA腎病大鼠腎臟組織NF-κB和MCP-1的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào):310693
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