本文關(guān)鍵詞：防風(fēng)提取物聯(lián)合三氧化二砷對急、慢性髓系白血病體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以人急世髓系白血病細(xì)胞株HL-60和人性性隨系白血病細(xì)胞株K562為實(shí)驗(yàn)對象,探討ATO及防風(fēng)提取物對該細(xì)胞株生長的影響。檢測防風(fēng)提取物單獨(dú)與聯(lián)合ATO后對HL-60、K562細(xì)胞增殖、凋亡的影響,并探討其分子機(jī)制。建立NOD/SCID-AML小鼠模型,通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證防風(fēng)提取物對ATO的減毒增效作用。方法：1.防風(fēng)提取物抑制HL-60、K562細(xì)胞增殖的作用研究不同劑量防風(fēng)提取物(1500、1250、1000、750、500、250μg/ml)作用于HL-60和K562細(xì)胞株48h。MTT法檢測防風(fēng)提取物對HL-60、K562細(xì)胞增殖的影響并計(jì)算出防風(fēng)提取物對HL-60、K562細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。2.防風(fēng)提取物聯(lián)合ATO對HL-60、K562增殖、凋亡的影響采用HL-60和K562兩種細(xì)胞株,分為空白對照組、防風(fēng)提取物組、ATO組、防風(fēng)提取物聯(lián)合ATO組。MTT法檢測HL-60、K562細(xì)胞增殖變化；流式細(xì)胞儀檢測HL-60、K562細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期分布。3.建立NOD/SCID-AML小鼠模型NOD/SCID小鼠,雄性,3-4周齡,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F、G7組。A、B、C組小鼠接種腫瘤細(xì)胞前給予300 cGy60Co照射(照射劑量率為116 cGy/min),照射后24h內(nèi)尾靜脈注射對數(shù)生長期HL-60細(xì)胞(A組：1×107/只；B組：5×106/只：C組：3×106/只)。D、E、F組小鼠無預(yù)處理,直接尾靜脈注射對數(shù)生長期HL-60細(xì)胞(D組：1×107/只；E組：5×106/只；F組：3×106/只)。G組小鼠不做處理為正常對照組。日常觀察小鼠的發(fā)病和身體淺表部位腫瘤生長情況；通過流式細(xì)胞儀分析外周血、肝脾組織和骨髓中HL-60細(xì)胞比例；取瀕死小鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦、骨髓及腫瘤組織,進(jìn)行組織病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢查,綜合判斷模型是否建立成功。4.基于NOD/SCID-AML小鼠模型,觀察防風(fēng)提取物減毒增效功能的實(shí)驗(yàn)研究建模：4-5周齡NOD/SCID小鼠尾靜脈注射1×107的HL-60細(xì)胞,定期檢查小鼠外周血細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測小鼠外周血中CD33陽性率,確定模型建立成功。分組：建模后的小鼠隨機(jī)分為4組：模型組(不給予藥物治療)、單用防風(fēng)提取物組(500mg/kg灌胃×15d)、單用ATO組(3mg/kgATO腹腔注射×15d)、防風(fēng)提取物聯(lián)合ATO組(500mg/kg防風(fēng)提取物灌胃+3mg/kg ATO腹腔注射×15d),觀察各組小鼠生存時間。實(shí)驗(yàn)后期,每組隨機(jī)麻醉處死3只小鼠,采集主要臟器標(biāo)本,觀察臟器損傷情況。結(jié)果：1.防風(fēng)提取物能夠抑制K562、HL-60細(xì)胞增殖750,1000,1250,1500μg/ml防風(fēng)提取物對K562細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用,48h的OD值與對照組比較有顯著性差異(P0.05)：防風(fēng)提取物6個濃度組對HL-60細(xì)胞有明顯增殖抑制作用,48h的OD值與對照組比較有顯著性差異(P0.05),其抑制增殖的作用呈劑量依賴性。2.防風(fēng)提取物能夠增強(qiáng)ATO對K562、HL-60細(xì)胞增殖的抑制作用防風(fēng)提取物與ATO具有協(xié)同抑制HL-60、K562細(xì)胞生長的作用,這種協(xié)同抑制作用隨著防風(fēng)提取物濃度的增加而增強(qiáng)；防風(fēng)提取物分別與500,250μg/ml聯(lián)用對K562細(xì)胞的凋亡率與空白對照組或ATO組相比顯1μg/ml、2μg/ml ATO著升高防風(fēng)提取物分別與(P0.05); 500、250μg/ml聯(lián)用對1、0.5μg/ml ATOHL-60細(xì)胞的凋亡率與空白對照組或ATO組相比顯著升高(P0.05)；2、1、0.5作用48h后,與空白對照組相比,K562細(xì)胞G2-M期比例升高、G0-G1μg/ml ATO期細(xì)胞比例降低；HL-60細(xì)胞Go-G1期、G2-M期細(xì)胞比例升高、S期細(xì)胞比例降低。兩藥聯(lián)用后K562細(xì)胞S期細(xì)胞比例與空白對照組或單用ATO組升高；HL-60細(xì)胞周期的變化不規(guī)律,凋亡細(xì)胞比例與空白對照組或ATO組相比顯著升高(P0.05)并呈現(xiàn)出劑量依賴性。小鼠模型建立成功3. NOD/SCID-AML造模10d左右,小鼠外周血涂片中可檢測到HL-60細(xì)胞；28d左右,部分小鼠出現(xiàn)后肢癱瘓的癥狀；35d左右,部分小鼠身體淺表部位出現(xiàn)實(shí)體瘤,各處理組小鼠全部發(fā)病,發(fā)病后期外周血、骨髓可檢測到大量白血病細(xì)胞并浸潤到肝、脾等臟器。40d左右,小鼠陸續(xù)死亡,60Co照射過的所有小鼠在52d內(nèi)死亡,平均生存時間為(39.33±12.66)d；沒有接受60Co照射的所有小鼠在64d內(nèi)全部死亡,平均生存時間為(55.67±10.41)d,發(fā)病率為100%,證實(shí)NOD/SCID-AML小鼠模型建立成功。4.防風(fēng)提取物聯(lián)合ATO能夠延長NOD/SCID-AML模型小鼠的生存時間聯(lián)合用藥組小鼠生存時間與模型組比較有顯著性差異(P0.05),防風(fēng)提取物組和ATO組無顯著性差異。各治療組小鼠生命延長率分別為：單用ATO組36%,單用防風(fēng)組37.3%,聯(lián)合用藥組51.8%。主要臟器病理切片顯示,與模型組相比,治療組臟器病變有不同程度減輕,腎臟較明顯。結(jié)論：1.防風(fēng)提取物具有一定程度的抑制K562、HL-60細(xì)胞增殖的能力,其抑制作用呈濃度依賴性。2.防風(fēng)提取物能夠增強(qiáng)ATO對K562、HL-60細(xì)胞增殖的抑制作用。增強(qiáng)ATO對K562細(xì)胞的增殖抑制作用可能與協(xié)同ATO誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡和S期細(xì)胞周期阻滯有關(guān)。增強(qiáng)ATO對HL-60細(xì)胞的增殖抑制作用可能與協(xié)同ATO誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.4-5周齡NOD/SCID小鼠尾靜脈注射3×106～1×107個HL-60細(xì)胞,無論是否接受60Co照射均能表現(xiàn)出全身白血病癥狀。這種方法建立的白血病小鼠模型是國內(nèi)外評價(jià)藥物對白血病增殖、分化等作用機(jī)制研究的常用模型。4.防風(fēng)提取物具有增強(qiáng)ATO對NOD/SCID-AML小鼠模型的治療作用,并能改善小鼠臟器受損情況,該實(shí)驗(yàn)為防風(fēng)協(xié)同ATO治療白血病動物模型提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：三氧化二砷 防風(fēng)提取物 急性髓系白血病 慢性髓系白血病 NOD/SCID小鼠
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略語名詞對照表13-14
• 文獻(xiàn)綜述14-21
• 前言21-22
• 第一章 防風(fēng)提取物聯(lián)合三氧化二砷對白血病細(xì)胞株K562/HL-60的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用22-39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 1.1.1 細(xì)胞株22
• 1.1.2 主要藥物與試劑22-23
• 1.1.3 儀器和設(shè)備23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 1.2.2 MTT法檢測藥物對白血病細(xì)胞的抑制率23-25
• 1.2.3 Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率25-26
• 1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布26
• 1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析26
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 1.3.1 MTT檢測結(jié)果26-30
• 1.3.2 藥物對細(xì)胞凋亡的影響30-35
• 1.3.3 藥物對細(xì)胞增殖周期的影響35-37
• 1.4 討論37-39
• 第二章 NOD/SCID-AML小鼠模型的建立方法39-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 2.1.1 主要試劑及耗材39-40
• 2.1.2 主要儀器40
• 2.1.3 細(xì)胞、小鼠40
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 2.2.1 配制HL-60細(xì)胞接種液40
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物模型的建立40-41
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動物模型的鑒定41-43
• 2.3 結(jié)果43-54
• 2.3.1 發(fā)病情況43-45
• 2.3.2 流式細(xì)胞儀分析檢測CD33陽性率45-47
• 2.3.3 組織病理學(xué)檢查47-54
• 2.4 討論54-56
• 第三章 防風(fēng)提取物聯(lián)合ATO對NOD/SCID-AML模型小鼠的治療作用56-63
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料56-57
• 3.1.1 主要試劑及耗材56
• 3.1.2 主要儀器56-57
• 3.1.3 細(xì)胞、小鼠57
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法57
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動物模型分組57
• 3.2.2 小鼠發(fā)病情況57
• 3.2.3 觀察小鼠的一般情況及生存時間57
• 3.2.4 病理檢查57
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析57
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-61
• 3.3.1 小鼠發(fā)病情況57-58
• 3.3.2 實(shí)驗(yàn)各組白血病NOD/SCID小鼠生存時間58
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)各組白血病NOD/SCID小鼠主要臟器病理學(xué)檢查58-61
• 3.4 討論61-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 個人簡歷70-71
• 致謝71-72
• 附件72-77

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：防風(fēng)提取物聯(lián)合三氧化二砷對急、慢性髓系白血病體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：308344