本文關(guān)鍵詞：富氫水對大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)p38MAPK表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的缺血性腦血管病以其極高的致死率、致殘率成為世界范圍內(nèi)導(dǎo)致病人死亡的第二大因素。腦缺血后氧供、能量供應(yīng)不足導(dǎo)致腦細(xì)胞死亡和相應(yīng)的功能障礙,嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量,全球每年因腦血管病死亡患者約600萬。腦血管病的臨床及動(dòng)物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn),模擬并干預(yù)腦組織損傷的病理變化,為臨床治療提供重要的科學(xué)基礎(chǔ),大鼠腦缺血再灌注損傷模型成功模擬了腦血管阻塞及再通的病理過程,凋亡在腦缺血再灌注損傷中扮演著重要角色。富氫水(Saturated Hydrogen Saline,HS)是高純氫氣置于生理鹽水中,加壓使氫氣溶于生理鹽水達(dá)到飽和狀態(tài)。富氫水在多種動(dòng)物模型中發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗凋亡作用,從而發(fā)揮組織保護(hù)作用。其相關(guān)受體Gsk-3β在機(jī)體中分布廣泛,腦組織中也有該受體表達(dá),可以較好模擬人體中相關(guān)生理過程。本實(shí)驗(yàn)擬建立大鼠腦缺血再灌注模型,觀察富氫水對大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)P38MAPK表達(dá)的影響,探討富氫水對腦組織凋亡調(diào)節(jié)的作用。材料與方法實(shí)驗(yàn)分為三組,假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)、富氫水干預(yù)組(HS)。建立大鼠暫時(shí)性局灶性腦缺血再灌注模型(t MCAO),于造模前3天及再灌注即刻腹腔注射富氫水(0.6mmmol/L)5ml或等量鹽水,評價(jià)試驗(yàn)動(dòng)物后12h、24h神經(jīng)功能,Longa評分標(biāo)準(zhǔn):0分為無明顯神經(jīng)功能缺陷,1分為提尾巴時(shí)動(dòng)物左前肢屈曲不能伸直(輕度),2分為向單側(cè)轉(zhuǎn)圈,靜息狀態(tài)下可維持平衡(中度),3分為靜息時(shí)姿勢不穩(wěn)倒向?qū)?cè)(重度),4分為無可見活動(dòng)(極重度),為確保每組動(dòng)物數(shù)量相等,剔除死亡或蛛網(wǎng)膜下腔出血的動(dòng)物;迅速斷頭取腦,濾紙吸去腦組織水分,稱濕重(Wet Weight,WW),置于120℃烤箱中烘烤2h至恒重,取出腦組織稱干重(dry weight,DW)。計(jì)算缺血24h后腦組織含水量=(WW-DW)/WW×100㳠;HE染色后在普通光鏡下觀察腦組織的病理變化并拍照;TTC染色觀察再灌注后24h大鼠腦組織梗死面積變化;TUNEL染色法觀察大鼠腦組織凋亡情況;免疫組化觀察腦組織P38MAPK、P-p38MAPK表達(dá)變化;應(yīng)用Western-blot分析P38MAPK、P-p38MAPK蛋白表達(dá),闡明富氫水在大鼠腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮腦保護(hù)的可能機(jī)制。結(jié)果1神經(jīng)功能學(xué)評分所有大鼠均在麻醉后30~60min蘇醒,假手術(shù)組(Sham組)未發(fā)現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀。I/R組和富氫水(HS組)的大鼠有不同程度的左前肢肢體偏癱癥狀。術(shù)后24h,I/R組和HS組神經(jīng)功能缺損癥狀較Sham組均明顯增加(p㩳0.01);HS組神經(jīng)功能缺損評分較IR組顯著降低(p㩳0.01)。2.腦組織病理學(xué)改變光鏡下,Sham組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列整齊,胞核邊界清晰。I/R組皮層神經(jīng)元核結(jié)構(gòu)失去完整性、胞核固縮,細(xì)胞間明顯腫脹。HS組大鼠皮層神經(jīng)元腫脹明顯減輕,胞體細(xì)胞核溶解明顯減少,損傷程度輕于I/R組。3.三組腦組織含水量及梗死面積的比較Sham組腦組織含水量為(45.31±0.32)%,I/R組為(82.68±1.27)%、HS組為(61.36±0.84)%,由此可見,IR和HS腦組織含水量較Sham組均升高(p㩳0.05或0.01);HS治療組腦組織含水量與IR組比較明顯降低(p㩳0.05或0.01)24h取腦組織TTC染色后用Image J軟件測量病計(jì)算了梗死面積,所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,HS組較I/R組梗死面積有明顯減少。4.TUNEL顯示大腦皮層凋亡情況鏡下可見Sham組靜息狀態(tài)下神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常,幾乎無凋亡小體出現(xiàn),I/R組可見明顯增多的凋亡小體,HS治療組凋亡小體數(shù)目較I/R組明顯減少。5免疫組化測定P38MAPK及磷酸化P38MAPK表達(dá)變化測定術(shù)后24h免疫組化,評估P38MAPK表達(dá)情況,I/R組和HS組P38MAPK及磷酸化P38MAPK均表達(dá)顯著增加;與I/R組比較,HS組P38MAPK及磷酸化P38MAPK表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6腦組織P38MAPK及P-P38MAPK表達(dá)Western blot結(jié)果顯示24h各組蛋白P38MAPK及P-P38MAPK表達(dá)情況,I/R組P38MAPK及P-P38MAPK表達(dá)量明顯高于Sham組,富氫水抑制了P38MAPK表達(dá),降低了P38MAPK的活性。結(jié)論1、富氫水可減輕大鼠腦缺血再灌注損2.富氫水可抑制神經(jīng)元凋亡,從而發(fā)揮腦保護(hù)作用,其機(jī)制可能為抑制P38MAPK通路來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：富氫水 凋亡 大腦 缺血再灌注損傷
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫索引11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 綜述 MAPK家族受體及其相關(guān)配體在缺血再灌注損傷中的表達(dá)35-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 個(gè)人簡歷57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Guo-Dan Liu;Hong Zhang;Lin Wang;Qing Han;Shi-Feng Zhou;Ping Liu;;Molecular hydrogen regulates the expression of miR-9,miR-21 and miR-199 in LPS-activated retinal microglia cells[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年03期

2 ;Hydrogen-rich Saline Reduces Atherogenesis in Apolipoprotein E Knockout Mice Fed a High-fat Diet by Inhibiting the Non-HDL-mediated Arterial Inflammation and Promoting the Expression of Genes Involving Reverse Cholesterol Transport[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2011年03期

  本文關(guān)鍵詞：富氫水對大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)p38MAPK表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：309361