本文關鍵詞：七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：過去的幾十年中麻醉專業(yè)已經(jīng)把它的臨床實踐從大部分局限在手術室擴展到包括“急性疼痛治療”、“術后監(jiān)護治療”、“重癥監(jiān)護治療”、“慢性疼痛治療”、“睡眠治療”和“姑息治療”在內的圍術期醫(yī)療范疇。最近麻醉學雜志上有一篇文章討論將“圍術期醫(yī)學”加到“麻醉科”的名稱中并決定如何擴展最新的培訓課程[1]�！奥樽砜啤备麨椤奥樽砑皣g期醫(yī)學科”已達成專家共識。而在中國劉進也提出了“改善圍術期患者的轉歸是麻醉醫(yī)生始終不渝的使命”。麻醉藥物及方法的選擇對患者術后的轉歸有重要影響。腫瘤手術患者術中都需要接觸到麻醉藥物。麻醉藥物對腫瘤的生物學特性影響最近越來越受到關注。最近有研究表明異氟醚可促進卵巢癌的增殖[2],同時異氟醚還可促進前列腺癌的增殖、遷移及化療耐藥[3]。2013年麻醉學雜志上發(fā)表的異氟醚促進腎細胞癌的增殖及遷移受到了廣泛的關注及討論[4]。而之前的研究表明常用吸入麻醉藥如氟烷、七氟醚及異氟醚對腫瘤細胞增殖有抑制作用,且與處理時間密切相關[5]。以上結論的差異可能是由于吸入麻醉藥處理的時間及與腫瘤細胞種類的不同導致。又有研究顯示七氟醚可拮抗順鉑對艾氏腹水細胞瘤的DNA毒性。骨肉瘤是一種高致殘率的惡性腫瘤。其手術常用麻醉藥物為七氟醚和異氟醚。而七氟醚、異氟醚對骨肉瘤生物學特性及化療敏感性的影響并未見相關報道。本課題將應用腫瘤生物學常用實驗技術及分子生物學常用實驗方法對吸入麻醉藥對骨肉瘤MG63細胞增殖凋亡及對順鉑化療敏感性的影響進行研究,并檢測相關蛋白分子水平的變化,探討可能的相關機制。實驗一七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖、克隆形成及凋亡的影響目的:觀察不同濃度七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖、克隆形成能力及凋亡的影響。方法:將MG63細胞從液氮中取出,迅速放入37℃水浴鍋中,復蘇細胞,常規(guī)培養(yǎng)細胞。實驗分七組:對照組(C組):充入含5%CO2、21%O2、74%N2混合氣體,處理4 h,七氟醚組(S1組):1.7%七氟醚的上述混合氣體處理4 h,七氟醚組(S2組):3.4%七氟醚的混合氣體處理4 h,七氟醚組(S3組):5.1%七氟醚的混合氣體處理4 h,異氟醚組(I1組):充入含有1.3%異氟醚的混合氣體處理4 h,異氟醚組(I2組):2.0%異氟醚混合氣體處理4 h,異氟醚組(I3組):2.6%異氟醚混合氣體處理4 h。用MTT法檢測各組細胞的增殖抑制率,平板克隆形成實驗檢測各組細胞的克隆形成能力,用流式細胞術檢測各組細胞的凋亡率。結果:1.MTT法檢測顯示:與對照組相比,七氟醚、異氟醚處理組增殖抑制率增高(P0.05),其中S3組和I3組增殖抑制率高于其它各組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖有抑制作用,其中高濃度的吸入麻醉藥抑制作用更明顯。2.平板克隆形成實驗:與對照組相比,各濃度七氟醚、異氟醚組克隆形成率要低于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),但組間比較顯示各濃度七氟醚組和異氟醚組無差異。提示七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞克隆形成有抑制作用,但與濃度關系不大。3.流式細胞術結果:與對照組相比,各濃度七氟醚、異氟醚組細胞凋亡率無差異(P0.05),組間多重比較顯示,各組間細胞凋亡率無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示各濃度七氟醚、異氟醚并不促進骨肉瘤MG63細胞的凋亡。結論:七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖有抑制作用,高濃度抑制作用更明顯;七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞克隆形成能力有抑制作用,但與濃度關系不大;七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞凋亡無影響,提示七氟醚、異氟醚對MG63細胞增殖抑制作用與凋亡無關。實驗二七氟醚、異氟醚對順鉑誘導的骨肉瘤MG63細胞凋亡的影響及相關機制目的:觀察2.5%七氟醚、2.0%異氟醚對順鉑誘導的MG63細胞凋亡率的影響。方法:同實驗一。實驗分為六組:對照組,只充入含5%CO2、21%O2、74%N2混合氣體,處理4 h;七氟醚組,含2.5%七氟醚的混合氣體處理4h;異氟醚組,含2.0%異氟醚的混合氣體處理MG63細胞4h;順鉑組:用終濃度為10mg/L的順鉑處理MG63細胞24h;順鉑+七氟醚組,加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開始4h內同時給予2.5%七氟醚處理;順鉑組+異氟醚,加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開始4h內同時給予2.0%異氟醚處理。MTT法檢測各組細胞活力,流式細胞術檢測各組細胞凋亡率,Western blot檢測各組細胞p-Akt、NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2、Bax蛋白表達水平。結果:1.MTT法結果:與對照組相比,各組細胞吸光度值降低(P0.05),其中順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值明顯低于其它各組(P0.05),提示七氟醚、異氟醚、順鉑對MG63細胞活力有影響,順鉑對其活力影響更明顯;與順鉑組相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值高于單純順鉑組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對順鉑對骨肉瘤MG63細胞毒性作用有拮抗作用。2.流式細胞術檢測結果顯示:與對照組相比,順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組細胞凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示順鉑誘導了骨肉瘤MG63細胞凋亡;與順鉑比相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚細胞凋亡率降低于(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對順鉑誘導MG63細胞凋亡有拮抗作用。3.Western blot結果顯示:與順鉑組相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2表達升高,Bax表達減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚促進了NF-κB的活化,提高了Hif-1α表達水平,并改變了凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的表達,七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63對順鉑化療敏感性的影響可能與這些蛋白表達變化有關。p-Akt蛋白表達在各組間并無差異(P0.05)。結論:七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63活力有影響,七氟醚、異氟醚拮抗順鉑對骨肉瘤MG63細胞的毒性作用;七氟醚、異氟醚對順鉑誘導的MG63細胞凋亡有拮抗作用。七氟醚、異氟醚降低了骨肉瘤MG63細胞對順鉑化療敏感性可能與活化NF-κB,促進Hif-1α表達及改變凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax表達水平有關。
【關鍵詞】：七氟醚 異氟醚 骨肉瘤 增殖 凋亡
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614;R738.1
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 文獻回顧17-26
• 第一部分七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖、克隆形成及凋亡的影響26-36
• 1 材料26-27
• 1.1 實驗細胞26
• 1.2 實驗器材及試劑26-27
• 2 方法27-30
• 2.1 骨肉瘤MG63的復蘇和培養(yǎng)27
• 2.2 吸入麻醉藥處理細胞27-28
• 2.3 實驗分組28
• 2.4 MTT法檢測MG63細胞增殖抑制率28-29
• 2.5 平板克隆形成率檢測細胞克隆形成能力29
• 2.6 流式細胞術檢測細胞凋亡29-30
• 2.7 統(tǒng)計學分析30
• 3 結果30-34
• 3.1 各組七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞增殖抑制率的比較30-31
• 3.2 七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞克隆形成率的比較31-33
• 3.3 七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細胞凋亡率的影響33-34
• 4 討論34-36
• 第二部分七氟醚、異氟醚對順鉑誘導的骨肉瘤MG63細胞凋亡的影響及相關機制36-52
• 1 材料36-37
• 1.1 實驗細胞36
• 1.2 實驗器材及試劑36-37
• 2.方法37-41
• 2.1 骨肉瘤MG63細胞的培養(yǎng)37
• 2.2 實驗分組37
• 2.3 順鉑處理細胞37-38
• 2.4 最佳順鉑濃度的選擇38
• 2.5 MTT法檢測細胞活力38-39
• 2.6 流式細胞術檢測細胞凋亡39
• 2.7 Western blot檢測Bcl-2、Bax、NF-κB P65、Hif-1α、p-Akt蛋白表達水平39-41
• 2.8 統(tǒng)計學分析41
• 3 結果41-49
• 3.1 最佳順鉑濃度41-42
• 3.2 各組骨肉瘤MG63細胞活力的比較42-43
• 3.3 各組MG63細胞凋亡率的比較43-44
• 3.4 各組MG63細胞Bcl-2、Bax、P65、p-Akt、Hif-1α 蛋白表達水平的比較44-49
• 4 討論49-52
• 小結52-53
• 參考文獻53-65
• 個人簡歷和研究成果65-66
• 致謝66

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本文編號：300634