本文關(guān)鍵詞：七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：過去的幾十年中麻醉專業(yè)已經(jīng)把它的臨床實(shí)踐從大部分局限在手術(shù)室擴(kuò)展到包括“急性疼痛治療”、“術(shù)后監(jiān)護(hù)治療”、“重癥監(jiān)護(hù)治療”、“慢性疼痛治療”、“睡眠治療”和“姑息治療”在內(nèi)的圍術(shù)期醫(yī)療范疇。最近麻醉學(xué)雜志上有一篇文章討論將“圍術(shù)期醫(yī)學(xué)”加到“麻醉科”的名稱中并決定如何擴(kuò)展最新的培訓(xùn)課程[1]�！奥樽砜啤备麨椤奥樽砑皣g(shù)期醫(yī)學(xué)科”已達(dá)成專家共識。而在中國劉進(jìn)也提出了“改善圍術(shù)期患者的轉(zhuǎn)歸是麻醉醫(yī)生始終不渝的使命”。麻醉藥物及方法的選擇對患者術(shù)后的轉(zhuǎn)歸有重要影響。腫瘤手術(shù)患者術(shù)中都需要接觸到麻醉藥物。麻醉藥物對腫瘤的生物學(xué)特性影響最近越來越受到關(guān)注。最近有研究表明異氟醚可促進(jìn)卵巢癌的增殖[2],同時(shí)異氟醚還可促進(jìn)前列腺癌的增殖、遷移及化療耐藥[3]。2013年麻醉學(xué)雜志上發(fā)表的異氟醚促進(jìn)腎細(xì)胞癌的增殖及遷移受到了廣泛的關(guān)注及討論[4]。而之前的研究表明常用吸入麻醉藥如氟烷、七氟醚及異氟醚對腫瘤細(xì)胞增殖有抑制作用,且與處理時(shí)間密切相關(guān)[5]。以上結(jié)論的差異可能是由于吸入麻醉藥處理的時(shí)間及與腫瘤細(xì)胞種類的不同導(dǎo)致。又有研究顯示七氟醚可拮抗順鉑對艾氏腹水細(xì)胞瘤的DNA毒性。骨肉瘤是一種高致殘率的惡性腫瘤。其手術(shù)常用麻醉藥物為七氟醚和異氟醚。而七氟醚、異氟醚對骨肉瘤生物學(xué)特性及化療敏感性的影響并未見相關(guān)報(bào)道。本課題將應(yīng)用腫瘤生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)及分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法對吸入麻醉藥對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖凋亡及對順鉑化療敏感性的影響進(jìn)行研究,并檢測相關(guān)蛋白分子水平的變化,探討可能的相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、克隆形成及凋亡的影響目的:觀察不同濃度七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、克隆形成能力及凋亡的影響。方法:將MG63細(xì)胞從液氮中取出,迅速放入37℃水浴鍋中,復(fù)蘇細(xì)胞,常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分七組:對照組(C組):充入含5%CO2、21%O2、74%N2混合氣體,處理4 h,七氟醚組(S1組):1.7%七氟醚的上述混合氣體處理4 h,七氟醚組(S2組):3.4%七氟醚的混合氣體處理4 h,七氟醚組(S3組):5.1%七氟醚的混合氣體處理4 h,異氟醚組(I1組):充入含有1.3%異氟醚的混合氣體處理4 h,異氟醚組(I2組):2.0%異氟醚混合氣體處理4 h,異氟醚組(I3組):2.6%異氟醚混合氣體處理4 h。用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖抑制率,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的克隆形成能力,用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:1.MTT法檢測顯示:與對照組相比,七氟醚、異氟醚處理組增殖抑制率增高(P0.05),其中S3組和I3組增殖抑制率高于其它各組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖有抑制作用,其中高濃度的吸入麻醉藥抑制作用更明顯。2.平板克隆形成實(shí)驗(yàn):與對照組相比,各濃度七氟醚、異氟醚組克隆形成率要低于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但組間比較顯示各濃度七氟醚組和異氟醚組無差異。提示七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞克隆形成有抑制作用,但與濃度關(guān)系不大。3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果:與對照組相比,各濃度七氟醚、異氟醚組細(xì)胞凋亡率無差異(P0.05),組間多重比較顯示,各組間細(xì)胞凋亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示各濃度七氟醚、異氟醚并不促進(jìn)骨肉瘤MG63細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖有抑制作用,高濃度抑制作用更明顯;七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞克隆形成能力有抑制作用,但與濃度關(guān)系不大;七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡無影響,提示七氟醚、異氟醚對MG63細(xì)胞增殖抑制作用與凋亡無關(guān)。實(shí)驗(yàn)二七氟醚、異氟醚對順鉑誘導(dǎo)的骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制目的:觀察2.5%七氟醚、2.0%異氟醚對順鉑誘導(dǎo)的MG63細(xì)胞凋亡率的影響。方法:同實(shí)驗(yàn)一。實(shí)驗(yàn)分為六組:對照組,只充入含5%CO2、21%O2、74%N2混合氣體,處理4 h;七氟醚組,含2.5%七氟醚的混合氣體處理4h;異氟醚組,含2.0%異氟醚的混合氣體處理MG63細(xì)胞4h;順鉑組:用終濃度為10mg/L的順鉑處理MG63細(xì)胞24h;順鉑+七氟醚組,加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開始4h內(nèi)同時(shí)給予2.5%七氟醚處理;順鉑組+異氟醚,加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開始4h內(nèi)同時(shí)給予2.0%異氟醚處理。MTT法檢測各組細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率,Western blot檢測各組細(xì)胞p-Akt、NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.MTT法結(jié)果:與對照組相比,各組細(xì)胞吸光度值降低(P0.05),其中順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值明顯低于其它各組(P0.05),提示七氟醚、異氟醚、順鉑對MG63細(xì)胞活力有影響,順鉑對其活力影響更明顯;與順鉑組相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值高于單純順鉑組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對順鉑對骨肉瘤MG63細(xì)胞毒性作用有拮抗作用。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:與對照組相比,順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組細(xì)胞凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示順鉑誘導(dǎo)了骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡;與順鉑比相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚細(xì)胞凋亡率降低于(P0.05),提示七氟醚、異氟醚對順鉑誘導(dǎo)MG63細(xì)胞凋亡有拮抗作用。3.Western blot結(jié)果顯示:與順鉑組相比,順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2表達(dá)升高,Bax表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示七氟醚、異氟醚促進(jìn)了NF-κB的活化,提高了Hif-1α表達(dá)水平,并改變了凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá),七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63對順鉑化療敏感性的影響可能與這些蛋白表達(dá)變化有關(guān)。p-Akt蛋白表達(dá)在各組間并無差異(P0.05)。結(jié)論:七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63活力有影響,七氟醚、異氟醚拮抗順鉑對骨肉瘤MG63細(xì)胞的毒性作用;七氟醚、異氟醚對順鉑誘導(dǎo)的MG63細(xì)胞凋亡有拮抗作用。七氟醚、異氟醚降低了骨肉瘤MG63細(xì)胞對順鉑化療敏感性可能與活化NF-κB,促進(jìn)Hif-1α表達(dá)及改變凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：七氟醚 異氟醚 骨肉瘤 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614;R738.1
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-26
• 第一部分七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、克隆形成及凋亡的影響26-36
• 1 材料26-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器材及試劑26-27
• 2 方法27-30
• 2.1 骨肉瘤MG63的復(fù)蘇和培養(yǎng)27
• 2.2 吸入麻醉藥處理細(xì)胞27-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組28
• 2.4 MTT法檢測MG63細(xì)胞增殖抑制率28-29
• 2.5 平板克隆形成率檢測細(xì)胞克隆形成能力29
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡29-30
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30
• 3 結(jié)果30-34
• 3.1 各組七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖抑制率的比較30-31
• 3.2 七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞克隆形成率的比較31-33
• 3.3 七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡率的影響33-34
• 4 討論34-36
• 第二部分七氟醚、異氟醚對順鉑誘導(dǎo)的骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制36-52
• 1 材料36-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器材及試劑36-37
• 2.方法37-41
• 2.1 骨肉瘤MG63細(xì)胞的培養(yǎng)37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組37
• 2.3 順鉑處理細(xì)胞37-38
• 2.4 最佳順鉑濃度的選擇38
• 2.5 MTT法檢測細(xì)胞活力38-39
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡39
• 2.7 Western blot檢測Bcl-2、Bax、NF-κB P65、Hif-1α、p-Akt蛋白表達(dá)水平39-41
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 3 結(jié)果41-49
• 3.1 最佳順鉑濃度41-42
• 3.2 各組骨肉瘤MG63細(xì)胞活力的比較42-43
• 3.3 各組MG63細(xì)胞凋亡率的比較43-44
• 3.4 各組MG63細(xì)胞Bcl-2、Bax、P65、p-Akt、Hif-1α 蛋白表達(dá)水平的比較44-49
• 4 討論49-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-65
• 個(gè)人簡歷和研究成果65-66
• 致謝66

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  本文關(guān)鍵詞：七氟醚、異氟醚對骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：300634