本文關(guān)鍵詞：氟對調(diào)控骨與胰島素相關(guān)性影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 成骨細胞當(dāng)處于慢性氟中毒狀態(tài)時是如何被激活的，胰島素與骨組織如何受氟的調(diào)控從而導(dǎo)致病理過程進行，這兩點是地方性氟中毒發(fā)病機制中有價值的研究問題。本實驗擬從體外、體內(nèi)兩方面進行探究，具體是通過體外培養(yǎng)成骨細胞染氟，同時配合整體氟中毒動物實驗，觀察氟中毒對氧化應(yīng)激（SOD、MDA、GPX等）的變化影響，同時檢測氟化物對動物模型的血糖、血脂、血鈣以及血清胰島素的含量影響，分析成骨細胞增生、分化和骨形成與其之間的相互關(guān)系；檢測與成骨細胞增殖、分化等相關(guān)的基因表達和調(diào)控因子的變化。本實驗的完成有助于發(fā)現(xiàn)氟對于調(diào)控骨組織與胰島素的內(nèi)在相關(guān)性，為氟骨癥及相關(guān)并發(fā)癥的防治策略提供思路和理論依據(jù)。 實驗方法： 動物實驗：Wistar大鼠100只，分配成對照組、低氟組和高氟組3組，保證各組間體重基本一致。給氟方式為灌胃，溶液配制方法為：雙蒸水配置NaF,定濃度2.21g/L，相當(dāng)于100mgF-/ml。低氟組大鼠按照每天10mg F-/kg體重給氟，高氟組大鼠每天20mg F-/kg體重給氟，對照組通過灌胃給以雙蒸水。在進行投氟1、2和3月之后，將大鼠分別經(jīng)乙醚麻醉，采血、分離血清以備生化檢測。同時，選取一側(cè)大鼠股骨經(jīng)10%EDTA脫鈣，常規(guī)脫水、石蠟包埋、制作病理切片，HE染色和免疫組化；再選取取另一側(cè)股骨提取總RNA進行相關(guān)基因的表達分析。 CCK-8檢測MC3T3-E1細胞體外增殖活性：MC3T3-E1細胞植入96孔板，分別設(shè)為實驗組和對照組，每組劑量梯度均為0、0.1、1.0、2.0、4.0、8.0、16mgF-/L，各共7組不同氟濃度組。實驗組在染氟基礎(chǔ)上，每孔各加入50nmol/L胰島素進行干預(yù)。每組設(shè)8個復(fù)孔，采用CCK-8法檢測細胞增殖活性。依據(jù)受干預(yù)細胞的活性變化趨勢，選取具有代表性的低、中、高劑量氟干預(yù)的成骨細胞。取24孔培養(yǎng)板，將細胞植入其中，分為對照組及2.0、8.0和20mg F-/L3個不同氟濃度組，采用免疫熒光技術(shù)，實現(xiàn)對不同染氟條件下成骨細胞InR變化的檢測。提取細胞RNA進行實時PCR定量，分析成骨相關(guān)基因的表達變化。 實驗結(jié)果： 動物實驗結(jié)果：通過灌胃給氟方式成功復(fù)制了氟骨癥特征性病變。運用形態(tài)學(xué)、免疫熒光技術(shù)和實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，觀察到胰島素及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、生化因子和細胞因子在不同濃度氟作用于成骨細胞功能改變發(fā)生機制中參與反應(yīng)。通過氟中毒大鼠骨組織成骨相關(guān)的基因考察結(jié)果，證明氟中毒大鼠氟骨癥呈特征性的骨吸收活躍到成骨活躍的骨轉(zhuǎn)換加強病變特征。 細胞實驗結(jié)果：成骨細胞在氟的干預(yù)下具有雙向效應(yīng)，即低劑量氟刺激細胞活性，而高劑量氟抑制細胞活性。成骨相關(guān)基因在染氟成骨細胞內(nèi)的表達變化呈雙向性特征，即低氟條件下升高，但在高氟條件下降低。 實驗結(jié)論： 本項目通過灌胃方式給氟，準(zhǔn)確復(fù)制出骨形成加速的病變特征的氟中毒大鼠骨病變。投氟后ALP、Runx2表達增強，而胰島素受體和IGF-Ⅰ表達變化與ALP和Runx2變化類似，提示胰島素受體和IGF-Ⅰ參與了在氟促成骨作用的機制。 早期氟并未造成明顯氧化應(yīng)激，投氟后期引起了氧化應(yīng)激輕度失代償，，說明氧化應(yīng)激在早期氟刺激骨轉(zhuǎn)換過程作用不明顯。投氟各組大鼠相關(guān)胰島素異常而受影響的血糖和血脂等代謝指標(biāo)在代償范圍內(nèi)，說明氟對胰島的影響并未造成機體的代謝異常。 細胞實驗證實胰島素與氟聯(lián)合應(yīng)用后成骨細胞明顯增生，并且低、中劑量氟直接誘導(dǎo)成骨細胞表面胰島素受體的表達，提示了胰島素信號通路對氟誘導(dǎo)成骨機制中的可能作用。 氟刺激成骨作用的同時伴隨著胰島素分泌增強和骨組織或成骨細胞相關(guān)胰島素受體等表達增多，證明在氟誘導(dǎo)成骨作用機制中，胰島素增強對其產(chǎn)生了較大的影響。
【關(guān)鍵詞】：氟化物 氟骨癥 胰島素 胰島素受體
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R599.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-13
• 中英文縮寫詞對照表13-14
• 第一篇 文獻綜述14-30
• 第一章 骨對胰島素的影響14-19
• 1.1 胰島的內(nèi)分泌和外分泌功能14
• 1.2 胰島分泌的幾種激素14-15
• 1.3 胰島素的特征15-16
• 1.4 骨鈣素的特征16-17
• 1.5 骨鈣素受體 GPRC6A 的特征17
• 1.6 骨鈣素對胰島素的影響17-19
• 第二章 胰島素對骨的影響19-26
• 2.1 骨結(jié)構(gòu)19
• 2.2 骨細胞種類19-21
• 2.3 骨基質(zhì)21-22
• 2.4 胰島素對骨的調(diào)控22-26
• 2.4.1 InR 與 IRS22-23
• 2.4.2 IGF-Ⅰ23-24
• 2.4.3 PI3K24-25
• 2.4.4 Ras25-26
• 第三章 氟中毒病區(qū)人群的骨病變與胰島素分泌的變化調(diào)查26-30
• 3.1 氟化物26-27
• 3.2 氟中毒病區(qū)概況27-28
• 3.3 慢性氟中毒時的骨轉(zhuǎn)換28
• 3.4 氟中毒病區(qū)胰島素分泌變化28-30
• 第二篇 實驗研究30-51
• 第一章 材料與方法30-40
• 1.實驗材料30-33
• 1.1 實驗對象30
• 1.1.1 實驗動物30
• 1.1.2 染氟小鼠 MC3T3-E1 成骨細胞系：30
• 1.2 主要試劑30-31
• 1.3 主要儀器與設(shè)備31-32
• 1.4 器械耗材32-33
• 1.5 主要應(yīng)用軟件33
• 2.實驗方法33-40
• 2.1 制備氟中毒動物模型33
• 2.2 骨組織病理學(xué)檢測33-35
• 2.2.1 組織的固定、脫鈣和切片33-34
• 2.2.2 常規(guī) HE 染色34
• 2.2.3 免疫組化34-35
• 2.3 氟中毒大鼠骨組織相關(guān)基因的表達分析35-37
• 2.3.1 骨組織總 RNA 提取35
• 2.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)35-36
• 2.3.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)36
• 2.3.4 引物合成36-37
• 2.4 氟中毒大鼠血清氧化應(yīng)激水平37-38
• 2.5 血糖、血脂、血鈣及血清胰島素的含量變化38
• 2.6 CCK-8 檢測 MC3T3-E1 細胞體外增殖活性38-39
• 2.6.1 實驗原理38
• 2.6.2 實驗分組38-39
• 2.6.3 實驗步驟39
• 2.7 胰島素受體免疫熒光39-40
• 2.7.1 實驗分組39
• 2.7.2 實驗步驟39-40
• 第二章 實驗結(jié)果40-51
• 1.1 大鼠的基本特征40
• 1.2 骨組織病理學(xué)檢測40-41
• 1.2.1 骨組織切片染色40-41
• 1.3 大鼠股骨成骨相關(guān)基因的表達41-42
• 1.4 大鼠股骨細胞骨鈣素、胰島素受體與胰島素樣生長因子的表達42-43
• 1.5 大鼠血清氧化應(yīng)激水平變化43-44
• 1.6 投氟不同時間大鼠胰島病理和功能變化44-47
• 1.7 大鼠血糖、血脂、血鈣與血清胰島素水平變化47-48
• 1.8 氟對 MC3T3-E1 細胞增殖活性的影響48-49
• 1.9 胰島素受體免疫熒光49-51
• 第三篇 討論和結(jié)論51-54
• 一、討論51-52
• 二、結(jié)論52-54
• 參考文獻54-62
• 作者簡介及科研成果62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 邊建朝,咸樹梅,葉平,劉永平,劉傳蛟,紀(jì)慶憲,王學(xué)松,劉源,李平春,相有章,丁偉,王琳,范崇法;氟中毒患者體內(nèi)微量元素、抗氧化物質(zhì)、脂類及其相互關(guān)系[J];中國地方病防治雜志;1993年06期

2 官志忠;楊沛施;劉尚安;蘇玉水;;氟中毒對大鼠肝、腦組織中脂質(zhì)過氧化物和超氧化物歧化酶的影響[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1990年03期

  本文關(guān)鍵詞：氟對調(diào)控骨與胰島素相關(guān)性影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：297120