本文關(guān)鍵詞：血紅蛋白誘導(dǎo)一氧化氮合酶過表達(dá)與過氧化亞硝酸鹽產(chǎn)生在大鼠腦出血后血腦屏障破壞中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：腦出血(Intracerebral hemorrhage, ICH)是一種高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率的疾病。世界范圍內(nèi)腦出血發(fā)病率雖僅占腦卒中總數(shù)10-15%,但它是腦卒中疾病中最嚴(yán)重的亞型；其30天的死亡率約為43～51%,致殘率為80%-95%,只有少數(shù)患者能夠恢復(fù)至生活自理。腦出血后,血腫周圍損傷組織水腫的發(fā)生、發(fā)展是導(dǎo)致患者神經(jīng)功能缺損、死亡、殘疾的主要原因,并且腦水腫的程度與患者預(yù)后密切相關(guān)。腦出血后腦水腫主要是血管源性腦水腫和細(xì)胞毒性腦水腫共同作用的結(jié)果。血腦屏障(Blood brain barrier, BBB)是維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要結(jié)構(gòu),主要由腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及其間緊密連接蛋白、內(nèi)皮基底膜、周細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞終足等構(gòu)成。BBB結(jié)構(gòu)與功能的破壞是腦出血后血管源性腦水腫形成的主要原因。內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接蛋白是維持BBB結(jié)構(gòu)與功能完整的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),構(gòu)成緊密連接的蛋白分子主要包括：跨膜蛋白(occludins, claudins, junction associated molecules (JAM)和胞漿蛋白zonulaoccludens (ZO), cingulin, AF-6 and 7H6)。緊密連接蛋白一旦破壞,可直接引起B(yǎng)BB的通透性增加,從而導(dǎo)致腦水腫的發(fā)生。紅細(xì)胞是腦出血后顱內(nèi)血腫的主要成分,其裂解產(chǎn)物血紅蛋白(Hemoglobin, Hb,主要由珠蛋白和血紅素組成)是腦出血后一種很強(qiáng)的氧化應(yīng)激介質(zhì)。研究證實(shí),在腦出血的早期即有血紅蛋白被釋放入周圍腦實(shí)質(zhì)中,且釋放的血紅蛋白與BBB通透性增加及腦水腫的發(fā)生密切相關(guān)。但是血紅蛋白破壞BBB及介導(dǎo)腦水腫形成的具體機(jī)制仍不清楚。一氧化氮(Nitric oxide, NO)是一種具有雙重作用的調(diào)節(jié)分子,由一氧化氮合酶(主要包括神經(jīng)元型一氧化氮合酶(neuronal NOS, nNOS),誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible NOS, iNOS)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial NOS, eNOS))以L-精氨酸為底物合成。有報(bào)道顯示在病理情況下,如腦缺血、顱內(nèi)感染及蛛網(wǎng)膜下腔出血中,大量產(chǎn)生的NO可以介導(dǎo)BBB結(jié)構(gòu)及功能破壞。但更重要的是,在氧化應(yīng)激情況下,NO與超氧陰離子(O2-)所形成的代謝產(chǎn)物過氧化亞硝酸鹽(ONOO-)是一種毒性更大、破壞性更強(qiáng)的氧化硝化產(chǎn)物。在多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如腦缺血、腦栓塞、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化及急性細(xì)菌性腦膜炎等中,大量產(chǎn)生的ONOO可導(dǎo)致明顯的BBB功能障礙。通過治療藥物或清除劑,針對性減少ONOO水平,不僅能夠防止神經(jīng)元死亡,而且還能恢復(fù)BBB的完整性。此外,也有研究證實(shí),在很多情況下,NO的細(xì)胞毒性主要取決于ONOO的產(chǎn)生,ONOO可通過使酪氨酸殘基硝化或者通過S-亞硝基化機(jī)制,來氧化修飾體內(nèi)生物大分子物質(zhì),如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等,從而介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷、BBB破壞、腦水腫形成及神經(jīng)元壞死與凋亡�；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metaUopeptidases, MMPs)是一類鋅離子依賴性蛋白酶,具有多種生物學(xué)活性。目前已知的哺乳動物體內(nèi)MMPs約有24種,其中,基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)與腦出血后神經(jīng)功能缺損及腦水腫的產(chǎn)生密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),血紅蛋白、凝血酶及氧化應(yīng)激等因素均可激活MMP-9,活化的MMP-9可降解血管基膜及內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接蛋白,引起血腦屏障通透性增加,從而導(dǎo)致腦水腫。據(jù)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)報(bào)道,幾種金屬卟啉能夠催化分解ONOO,從而減輕其毒性效果。由于其重要性,ONOO清除劑現(xiàn)已被廣泛用于多種領(lǐng)域,比如心臟、肺、肝臟、腎臟、腸道及其它內(nèi)臟性缺損再灌注損傷。FeTPPS (5,10,15,20-Tetrakis (4-sulfonatophenyl)porphyrinato Iron (Ⅲ), Chloride)是金屬卟啉類中的代表性成員之一,它能夠?qū)NOO催化為無害的硝酸鹽離子,從而減輕大量ONOO產(chǎn)生所介導(dǎo)的組織、細(xì)胞損傷。目的：本研究通過建立Hb模擬的大鼠腦出血模型：1.檢測不同時(shí)間點(diǎn)腦組織中三種NOS表達(dá)和ONOO生成變化、緊密連接蛋白claudin-5和ZO-1的表達(dá)變化、腦含水量及大鼠行為學(xué)變化,探究Hb對BBB、腦含水量及神經(jīng)功能的影響,并進(jìn)一步分析NOS和ONOO在此過程中的作用；2.針對產(chǎn)生的毒性產(chǎn)物ONOO-,予以干預(yù)劑FeTPPS清除,觀察大鼠損傷腦組織緊密連接蛋白ZO-1、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9活性及神經(jīng)功能變化情況,為腦出血臨床治療提供新的參考依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法：1、實(shí)驗(yàn)分組及模型制作實(shí)驗(yàn)一成年雄性SD大鼠,SPF級,體重為280-300g,隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組和Hb組。造模成功后,假手術(shù)組和Hb組觀察、取材時(shí)間點(diǎn)依次為6h、12h、24h、 48h、3d和7d,共6個(gè)亞組。實(shí)驗(yàn)二取相同體重相同來源的大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組、對照組(Hb+生理鹽水組)、實(shí)驗(yàn)組(Hb+FeTPPS治療組)。給藥方式：實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)(Hb注入后立即,12h,36h,60h)腹腔注射FeTPPS (30mg/kg);對照組在同樣的時(shí)間點(diǎn)以同樣的方式給予生理鹽水作安慰劑對照。在立體定向儀輔助下,向大鼠右側(cè)尾狀核注射血紅蛋白溶液(20ul,150 g/L),制成大鼠腦內(nèi)Hb注入模型。假手術(shù)組大鼠同法在相同位置僅做單純穿刺。2、腦組織水含量測定分別在造模后不同時(shí)間點(diǎn)麻醉大鼠、斷頭取腦,沿中線切開左右兩側(cè)大腦半球,去除小腦和腦干后,用電子分析天平分別稱量雙側(cè)半球濕重。將腦組織放入烤箱中烘烤(100℃,持續(xù)24h),再次用電子天平稱其干重。腦組織含水量(%)=[(濕重一干重)/濕重]×100%。3、行為學(xué)檢測采用改良神經(jīng)功能缺損程度評分方法(mNSS)在術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)(6h、12h、 24h、48h、3d、7d和14d)分別對其進(jìn)行評分,包括運(yùn)動、感覺、反射、平衡等方面。得分越高提示神經(jīng)功能損傷越重：總分18分,13-18分重度受損；7-12分中度受損；1-6分輕度受損。4、Western Blot方法檢測蛋白表達(dá)變化大鼠深度麻醉后,斷頭取腦,取Hb損傷處及周圍腦組織約100mg,-80℃冰箱或液氮中保存?zhèn)溆�。組織標(biāo)本經(jīng)勻漿、裂解、超聲破碎、離心后,采用Bradford法蛋白定量。蛋白裂解液依次經(jīng)過電泳、轉(zhuǎn)膜、孵育一抗及二抗、顯影及定影。凝膠成像系統(tǒng)掃描并分析nNOS、iNOS、eNOS、claudin-5、ZO-1、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)蛋白表達(dá)變化。5、ELISA法檢測組織及血清中3-硝基酪氨酸變化麻醉大鼠后,打開胸腔,心臟穿刺抽取2m1全血,室溫下靜置2小時(shí),離心(4000轉(zhuǎn),10分鐘)取上清,儲存于-80℃冰箱備用。同時(shí),斷頭取腦,取Hb損傷處周圍腦組織約100mg,加入等量生理鹽水搗碎、勻漿,3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,同法儲存?zhèn)溆�。Elisa檢測方法如下：往預(yù)先包被3-NT抗體的微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌,然后底物TMB顯色。用多功能酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD)值,計(jì)算樣品濃度。6、腦組織石蠟切片制作麻醉大鼠后并固定,先后用生理鹽水和4%多聚甲醛溶液行心臟灌注。切取損傷處腦組織,于4%多聚甲醛溶液中浸泡24小時(shí)后,按照常規(guī)石蠟包埋法制成石蠟標(biāo)本并切片,切片厚度為3-5umm,撈片、風(fēng)干后備用。7、免疫組化組織切片經(jīng)脫蠟、水化,在檸檬酸緩沖液(0.01 mol/L)中給予微波熱修復(fù)25-30min。冷卻至室溫后,依次給予0.3%H202溶液、山羊血清、一抗、生物素化二抗和辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液封閉、孵育。DAB顯色液(1：20)顯色后,二甲苯透明、中性樹膠封片,在顯微鏡下觀察并拍照。8、免疫熒光石蠟切片脫蠟至水,在Tris-EDTA (PH 8.5)或檸檬酸緩沖液(0.01 mol/L)中給予微波熱修復(fù)25-30min,血清封閉后滴加一抗,4℃孵育12-24h, PBS溶液沖洗后滴加相應(yīng)熒光二抗,37℃孵育1h。熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察、拍照、分析。9、血清中NO含量測定血清制備方法同Elisa檢測。按照硝酸還原酶法測定血清中NO含量,NO含量表示為umol/L。10、MMP-9原位明膠酶譜法及熒光雙標(biāo)制備10umm厚的損傷處腦組織快速冰凍切片備用,按照冰凍切片基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)原位明膠酶譜法熒光染色試劑盒說明書方法(杰美基因)檢測損傷腦組織MMP-9活性。取適當(dāng)明膠熒光底物孵育新鮮組織切片(先4℃10mmin, 后37℃,1 h),直接觀察、拍照(激發(fā)波長480nm,發(fā)射波長530nm)。觀察后,PBS沖洗切片,依次孵育一抗、二抗,共聚焦顯微鏡下觀察、拍照、分析。11、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean± SD)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用ONE-WAY方差分析,多重比較用LSD-t檢驗(yàn)。3-NT水平與腦水含量和神經(jīng)功能缺損之間的相關(guān)性采用Spearman失相關(guān)分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一1、Hb注入后不同時(shí)間點(diǎn)腦水含量變化。Hb組損傷對側(cè)腦組織,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦水含量均未見明顯變化。然而,Hb損傷同側(cè)腦組織水含量從6h開始逐漸升高,24h達(dá)到最大值,維持在較高水平直至3d,后逐漸下降。Hb損傷同側(cè)腦組織在各時(shí)間點(diǎn)腦水含量均明顯高于正常對照組和損傷對側(cè)腦組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、Hb注入后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠行為學(xué)變化。mNSS評分表明,與正常對照組和假手術(shù)組比較,注入Hb后6h大鼠神經(jīng)功能缺損逐漸加重,24 h達(dá)到峰值,維持在較高水平直至3d,后逐漸恢復(fù)。從6h至7d Hb組大鼠神經(jīng)功能缺損均明顯高于正常對照組和假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在14d時(shí),大鼠mNSS評分基本恢復(fù)正常,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、Hb注入后,三種NOS在蛋白水平的變化趨勢。Westernblot檢測表明HB注入后,nNOS表達(dá)是升高的,各時(shí)間點(diǎn)與假手術(shù)組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但其趨勢變異性較大,3d時(shí)表達(dá)最高(P0.001)；注入Hb后iNOS表達(dá)急劇升高,6h即達(dá)到最高峰,后持續(xù)在高水平直至24h(P0.001),然后逐漸降低,且變異性大；與iNOS和iNOS相比,eNOS在Hb注入后也表達(dá)明顯升高,從6h至24h,一直維持在較高水平,12h達(dá)到峰值(P0.001),后呈現(xiàn)不同程度的降低。4、Hb注入后緊密連接蛋白claudin-5/ZO-1的表達(dá)、分布變化。Westernblot檢測表明,與假手術(shù)組相比,Hb組claudin-5蛋白表達(dá)在12h (P 0.05),3d (P 0.001),7d (P 0.001)均明顯降低；而其余的時(shí)間點(diǎn)與假手術(shù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同樣地,免疫熒光觀察顯示假手術(shù)組的血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接蛋白claudin-5和ZO-1表達(dá)完整,并呈連續(xù)條帶狀分布；而Hb組中,claudin-5和ZO-1的表達(dá)明顯減少且分布彌散、不連續(xù)。5、硝酸鹽還原酶法檢測Hb注入后不同時(shí)間點(diǎn)血清中NO含量變化。Hb注入后,血清中NO在6h開始下降,12h明顯降低,2d時(shí)相對增加但仍低于正常對照組；在3d和7d時(shí),NO含量又明顯下降,后逐漸恢復(fù)。與正常組相比,Hb組12h、24h、3d、7d和14d時(shí)NO含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6、Hb注入后過氧化亞硝酸鹽(ONOO-)表達(dá)變化及其細(xì)胞定位。由于過氧化亞硝酸鹽(ONOO-)具有不穩(wěn)定性,3-nitrotyrosine (3-NT)可作為ONOO-產(chǎn)生可靠的生物學(xué)標(biāo)志。Westemblot檢測顯示,正常組及假手術(shù)組6h,幾乎沒有3-NT產(chǎn)生；Hb注入后,3-NT從6h開始增加,12h明顯增加,后維持在較高水平,第3d達(dá)到峰值,后逐漸降低。Hb組各時(shí)間點(diǎn)3-NT水平與假手術(shù)組及正常組均有明顯差異(P0.05)。此外,免疫組化觀察顯示3-NT也呈現(xiàn)相似的表達(dá)趨勢。免疫熒光觀察顯示3-NT主要表達(dá)在MPO陽性的中性粒細(xì)胞和ED-1陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞／巨噬細(xì)胞中。7、ELISA檢測Hb注入后腦組織和血清中的ONOO-表達(dá)變化。與Westernblot檢測結(jié)果一致,Elisa檢測提示Hb注入后6h大鼠腦組織中的3-NT表達(dá)開始增加,后逐漸上升,在第3d達(dá)到峰值,然后逐漸下降；血清中的3-NT水平呈現(xiàn)相同的趨勢,不同的是其在第2d達(dá)到峰值。Hb組腦組織和血清中的3-NT水平與假手術(shù)組和正常組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。腦組織和血清中3-NT水平變化與大鼠腦水含量變化(r=0.689,P0.01,與腦組織中3-NT；r=0.782,P0.01,與血清中3-NT)和神經(jīng)功能缺損改變(r=0.844,P0.01,與腦組織中3-NT; r=0.851, P0.01,與血清中3-NT)之間均有顯著正相關(guān)性。8、通過ZO-1和三種NOS的熒光雙染,進(jìn)一步探究三種NOS在BBB破壞中的作用。假手術(shù)組中,表達(dá)完整、連續(xù)的ZO-1血管周圍沒有明顯的1NOS、 iNOS和eNOS表達(dá)。在Hb組中,血管周圍發(fā)現(xiàn)nNOS、iNOS和eNOS表達(dá)明顯增加。三種NOS表達(dá)增加部位,毗鄰的血管表達(dá)的ZO-1明顯減少且彌散、不連續(xù),這表明三種NOS與BBB破壞之間可能存在緊密聯(lián)系。9、通過3-NT與claudin-5和ZO-1之間的熒光雙染,進(jìn)一步探究ONOO"在BBB破壞中的作用。假手術(shù)組中,表達(dá)完整、連續(xù)的claudin-5和ZO-1血管周圍均無明顯的3-NT表達(dá)。在Hb組中,血管周圍發(fā)現(xiàn)大量密集的3-NT產(chǎn)生。3-NT產(chǎn)生明顯增加的部位,毗鄰的血管表達(dá)的claudin-5和ZO-1均明顯減少且不連續(xù),這提示著ONOO在BBB破壞中扮演著重要的作用。實(shí)驗(yàn)二1、原位明膠酶譜檢測明膠酶MMP-9溶解明膠活性的細(xì)胞定位。Hb注入后24h,大部分MMP-9溶解明膠活性位于血管壁(Fibronectin, FN+)和神經(jīng)元核(NeuN+)上；部分膠質(zhì)細(xì)胞足突(GFAP+)與溶解明膠活性部位之間存在相互毗鄰關(guān)系,特別是在血管壁處,但在膠質(zhì)細(xì)胞胞體未見溶解明膠活性；同時(shí),只有很少的溶解明膠活性位于中性粒細(xì)胞(MPO+)和小膠質(zhì)細(xì)胞／巨噬細(xì)胞(ED-1+)上。這些定位結(jié)果提示,MMP-9溶解明膠活性可存在多種細(xì)胞類型中。2、FeTPPS治療后可減少Hb誘導(dǎo)的ONOO產(chǎn)生。Westernblot檢查提示：Hb注入后24h,與假手術(shù)組相比,對照組(Hb+生理鹽水組)3-NT產(chǎn)生明顯增加(P0.01)；而給予FeTPPS治療后,干預(yù)組(Hb±FeTPPS治療組)3-NT產(chǎn)生較對照組明顯減少(P0.01)。此外,免疫組化觀察顯示,與假手術(shù)組相比,Hb組血腫周圍損傷組織3-NT表達(dá)明顯增加；而FeTPPS治療后,3-NT表達(dá)明顯降低。3、FeTPPS治療后可減輕Hb誘導(dǎo)的MMP-9活化。原位明膠酶譜檢查提示：假手術(shù)組僅少量的細(xì)胞和血管有較弱的溶解明膠活性,對照組即Hb注入后24h,血腫周圍損傷組織溶解明膠活性明顯增加(陽性的細(xì)胞和血管數(shù)明顯增加,P0.01)；而FeTPPS治療后,干預(yù)組分解明膠活性較對照組明顯減少(陽性的細(xì)胞和血管數(shù)較對照組明顯減少,P0.05)。4、FeTPPS治療后可改善Hb介導(dǎo)ZO-1表達(dá)減少。Westernblot檢查提示：Hb注入后24h,與假手術(shù)組相比,對照組ZO-1表達(dá)產(chǎn)生明顯減少(P0.01)；而FeTPPS治療后,干預(yù)組ZO-1表達(dá)較對照組明顯增加(P0.05)。此外,免疫熒光觀察顯示,與假手術(shù)組相比,Hb組血腫周圍損傷組織ZO-1表達(dá)明顯減少且分布彌散、不連續(xù)；而FeTPPS治療可明顯改善Hb介導(dǎo)的ZO-1降低。5、FeTPPS治療后可減輕Hb介導(dǎo)的神經(jīng)功能缺損。mNSS評分顯示：Hb注入后24h和3d,與假手術(shù)組相比,對照組評分均明顯增加,神經(jīng)功能缺損明顯加重(P0.01)；而給予FeTPPS治療后,干預(yù)組24h評分較對照組減少但未呈現(xiàn)明顯差異(P＝0.065),而3d時(shí)干預(yù)組評分較對照組明顯減少,神經(jīng)功能缺損改善明顯(P0.01)。結(jié)論：1.Hb可引起腦血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白claudin-5/ZO-1的表達(dá)、分布變化,從而導(dǎo)致BBB破壞、腦水腫形成及神經(jīng)功能缺損。2.Hb可引起腦組織內(nèi)三種NOS(包括nNOS、iNOS和eNOS)表達(dá)顯著增加,進(jìn)而產(chǎn)生過量的ONOO-。上調(diào)的三種NOS及伴隨產(chǎn)生的過量的ONOO與claudin-5/ZO-1的破壞或減少有密切關(guān)系。3.Hb引起的BBB破壞和神經(jīng)功能缺損可能與三種NOS上調(diào)和伴隨的ONOO-合成有關(guān),過量產(chǎn)生的ONOO-參與腦出血后腦水腫和神經(jīng)功能缺損的發(fā)生、發(fā)展過程。4. ONOO可能是一個(gè)可靠的腦出血后判斷腦損傷程度和臨床預(yù)后的指標(biāo)。5.ONOO清除劑FeTPPS在Hb模擬的大鼠腦出血模型中可以改善Hb誘導(dǎo)的BBB破壞和神經(jīng)功能損。
【關(guān)鍵詞】：血紅蛋白 血腦屏障 緊密連接 一氧化氮合酶 過氧化亞硝酸鹽 FeTPPS
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.34
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-24
• 前言24-28
• 第一章 一氧化氮合酶與過氧化亞硝酸鹽在血紅蛋白誘導(dǎo)的血腦屏障破壞中的作用28-54
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-32
• 2 實(shí)驗(yàn)方法32-38
• 3 結(jié)果38-50
• 4 討論50-54
• 第二章 過氧化亞硝酸鹽清除劑對血紅蛋白介導(dǎo)的血腦屏障破壞的保護(hù)作用54-70
• 1 實(shí)驗(yàn)材料54-58
• 2 實(shí)驗(yàn)方法58-62
• 3 結(jié)果62-68
• 4 討論68-70
• 結(jié)論70-71
• 參考文獻(xiàn)71-80
• 攻讀學(xué)位期間成果80-81
• 致謝81-82

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張春燕;中西醫(yī)結(jié)合救治急性腦出血探悉[J];甘肅中醫(yī);2001年02期

2 王春新;46例腦出血患者急性期的觀察及護(hù)理[J];廣西醫(yī)學(xué);2001年03期

3 張鳳麗;腦出血急性期的護(hù)理[J];哈爾濱醫(yī)藥;2001年01期

4 張愛紅;腦出血急性期護(hù)理體會[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2001年01期

5 方凱,朱曉波,李玉方,張慧麗;腦出血急性期的同側(cè)多動癥2例報(bào)道[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2001年05期

6 朱飚,羅小林,楊國清,李平安;腦出血后繼續(xù)出血的臨床分析[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2001年05期

7 趙繼春;活血化瘀治療急性腦出血83例[J];河南中醫(yī)藥學(xué)刊;2001年06期

8 朱曉霞;腦出血急性期的觀察及護(hù)理中需要注意的幾個(gè)問題[J];青海醫(yī)藥雜志;2001年06期

9 閆艷,李澤,李玉賢;168例腦出血患者的護(hù)理及體會[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年11期

10 扈明俠;腦出血后繼發(fā)性癲沲48例報(bào)告[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2001年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙英霖;;腦出血中醫(yī)治療之思考[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會老年神經(jīng)病專題學(xué)術(shù)研討會論文專輯[C];2006年

2 牟歌童;孫鴻輝;;丹參類制劑治療腦出血急性期療效的系統(tǒng)評價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 吳渝憲;;腦出血急性期的活血化瘀治療探討[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

4 高長玉;陳桂英;王志紅;賁瑩;劉桂宇;王彩娟;張?jiān)茣?;腦出血分期分型與中醫(yī)辨證的相關(guān)性分析[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

5 張?zhí)K明;;腦出血研究的新進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

6 王麗娟;馮加純;;腦出血急性期血壓變化與預(yù)后的關(guān)系[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

7 田野;馮加純;;腦出血患者急性期若干生化指標(biāo)水平與死亡率的關(guān)系[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

8 鮑遠(yuǎn)程;;腦出血中西醫(yī)診療指南解讀[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會委員會議暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

9 王健;趙義;;活血化瘀方藥治療腦出血急性期臨床療效的系統(tǒng)評價(jià)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會腦病分會成立大會暨2008年全國中醫(yī)腦病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

10 李瑛;鄺榮貴;梅凡仙;金莉英;;地壇牌清開靈注射液治療急性腦出血34例臨床觀察[A];心腦病藥物臨床評價(jià)專家談[C];1998年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)記者 曹玉祥;數(shù)九寒天警惕腦出血[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

2 ;腦出血臨床治療仍以藥物為主[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

3 孫怡;中西醫(yī)結(jié)合治療腦出血幾個(gè)關(guān)鍵問題[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2007年

4 常怡勇;腦出血為啥還用活血化瘀藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

5 執(zhí)業(yè)藥師 常怡勇;腦出血為啥還用活血化瘀藥？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

6 顧維明;腦出血急性期活血化瘀藥的應(yīng)用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

7 陳維旗邋謝娜;腦出血為啥還用活血化瘀藥？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2008年

8 衣曉峰;針刺治療急性腦出血機(jī)理探析[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

9 董巧云;安全·科學(xué)·客觀[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

10 何云澤;活血化瘀與出血性中風(fēng)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊仲義;熄風(fēng)化痰祛瘀治療腦出血的機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

2 崔元孝;腦出血患者微創(chuàng)穿刺引流術(shù)后血清膠質(zhì)纖維酸性蛋白動態(tài)變化的研究[D];山東大學(xué);2009年

3 周華軍;凝血酶啟動腦出血后血管新生的作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2011年

4 趙彥青;腦出血誘發(fā)心肌損傷的機(jī)制研究及扶正護(hù)腦膠囊對其干預(yù)的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

5 梁迪賽;NSE、S100 mRNA和蛋白水平與中醫(yī)藥治療急性腦出血最佳臨界出血量相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 常誠;活血通瘀法治療急性腦出血及抗腦水腫的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

7 楊樹旭;實(shí)驗(yàn)大鼠腦出血后神經(jīng)細(xì)胞再生的研究[D];浙江大學(xué);2009年

8 余震;缺氧誘導(dǎo)因子-1a對腦出血后神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、遷移、分化及血管新生作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

9 王渙群;復(fù)元醒腦與活血通腑治療急性腦出血臨床對照研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 高培陽;腦出血急性期中西醫(yī)結(jié)合優(yōu)化治療方案臨床研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：血紅蛋白誘導(dǎo)一氧化氮合酶過表達(dá)與過氧化亞硝酸鹽產(chǎn)生在大鼠腦出血后血腦屏障破壞中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：294395