本文關(guān)鍵詞：聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏誘導(dǎo)的肝臟損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一種常見有機溶劑,接觸一段時間TCE的工人可能發(fā)生職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT),伴發(fā)嚴重的肝臟損傷。臨床觀察中發(fā)現(xiàn)ODMLT病人在發(fā)病前期常出現(xiàn)頭痛、發(fā)熱等病毒性全身感染的癥狀。此外有研究指出病人血清中抗病毒抗體滴度顯著升高,皰疹病毒和巨細胞病毒出現(xiàn)再次激活,佐證了ODMLT與病毒感染密切相關(guān)這一現(xiàn)象。前期動物實驗表明TCE致敏小鼠肝臟發(fā)生免疫損傷,補體激活參與其中。同時相關(guān)基礎(chǔ)研究提示病毒模擬物聚肌胞苷酸(polyinosine-polycytidylic acid,poly(I:C))可以通過激活Toll樣受體-3上調(diào)局部B因子水平以促進補體從旁路途徑激活。本次研究探討了腹腔注射poly(I:C)是否可以通過促進補體激活加重TCE致敏導(dǎo)致的肝臟免疫損傷,嘗試解釋臨床中病情與病毒感染之間在機制上的聯(lián)系。研究目的:以TCE致敏小鼠模型為基礎(chǔ),采用腹腔注射poly(I:C)模擬病人發(fā)病前的全身病毒感染狀態(tài),觀察該處理是否加重TCE致敏介導(dǎo)的小鼠肝臟損傷,檢測肝臟局部補體激活程度,探索補體是否參與該免疫損傷放大的過程。研究方法:購買40只6-8周雌性BALB/c小鼠,經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)后分為溶劑對照組(n=5)、poly(I:C)對照組(n=5)、TCE處理組(n=15)和聯(lián)合處理組(n=15),聯(lián)合處理組小鼠于末次TCE激發(fā)前3小時腹腔注射50μg poly(I:C)。末次激發(fā)后48小時根據(jù)皮膚致敏反應(yīng)評分將小鼠分為致敏或未致敏組,隨后麻醉、處死小鼠,收集血清、肝臟。采用全自動生化儀檢測肝功能指標ALT和AST,免疫比濁法測定血清補體C3水平,HE染色法觀察小鼠肝臟病理學(xué)損傷程度,免疫組化法檢測肝臟局部補體激活水平和細胞因子沉積水平,Real-time RT-PCR檢測肝臟補體C3、補體調(diào)節(jié)蛋白和B因子的基因轉(zhuǎn)錄水平,Western Blotting檢測肝臟B因子的蛋白表達相對量。結(jié)果:1.皮膚致敏反應(yīng)評判:溶劑對照組和poly(I:C)對照組小鼠背部均未發(fā)現(xiàn)皮炎反應(yīng)。TCE處理組致敏率6/15(40.0%),聯(lián)合處理組致敏率5/15(33.3%),兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異。2.肝臟解剖學(xué)外觀評價和臟器系數(shù)比較:溶劑對照組和poly(I:C)對照組肝臟未發(fā)現(xiàn)明顯病變。非致敏組肝臟也未見明顯異常。TCE致敏組肝臟腫大,臟器系數(shù)顯著高于溶劑對照組(P0.05)。聯(lián)合處理致敏組肝臟呈黃褐色、質(zhì)脆易碎,體積腫大,臟器系數(shù)顯著高于溶劑對照組(P0.05)。3.肝臟病理學(xué)研究:溶劑對照組和poly(I:C)對照組肝臟切片未見病理學(xué)異常。非致敏組肝臟未見病理學(xué)損傷。TCE致敏組肝臟偶見肝細胞腫大和匯管區(qū)炎細胞浸潤。聯(lián)合處理組肝臟肝細胞水腫明顯,常見氣球樣變性,匯管區(qū)常見中性粒細胞浸潤。4.肝功能指標檢測結(jié)果:poly(I:C)對照組血清ALT和AST水平較溶劑對照組水平無統(tǒng)計學(xué)差異。非致敏組肝功能水平較溶劑對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。TCE致敏組血清ALT和AST均輕微升高,顯著高于溶劑對照組水平(P0.05)。聯(lián)合處理致敏組ALT和AST均明顯升高,顯著高于溶劑對照組和TCE致敏組水平(P0.05)。5.肝臟細胞因子沉積水平檢測:溶劑對照組、poly(I:C)對照組、非致敏組肝臟未檢測到TNF-α、IL-1β和IL-6的沉積。TCE致敏組和聯(lián)合處理組均發(fā)現(xiàn)三種蛋白的沉積,其中以TNF-α表達居多,三種蛋白表達水平在兩組中無顯著差異。6.血清補體C3含量比較:與溶劑對照組水平相比,poly(I:C)對照組和TCE致敏組血清C3水平均無統(tǒng)計學(xué)差異。聯(lián)合處理致敏組水平較溶劑對照組和TCE致敏組水平顯著下降(P0.05)。7.肝臟C3轉(zhuǎn)錄能力比較:與溶劑對照組肝臟C3轉(zhuǎn)錄水平相比,poly(I:C)對照組、TCE致敏組和聯(lián)合致敏組肝臟C3轉(zhuǎn)錄水平均無顯著上調(diào)或下調(diào)。8.肝臟局部補體激活水平檢測:溶劑對照組、poly(I:C)對照組、非致敏組肝臟未檢測到補體激活。TCE致敏組肝臟有少量C3片段和MAC沉積。聯(lián)合處理致敏組肝臟有大量補體激活標志性蛋白表達。9.肝臟補體調(diào)節(jié)蛋白表達比較:與溶劑對照組比較,poly(I:C)對照組和聯(lián)合處理致敏組的四種補體調(diào)節(jié)蛋白(CD55、CD59、CD46和Crry)的轉(zhuǎn)錄水平均無顯著變化,而TCE致敏組肝臟CD59、CD46和Crry的轉(zhuǎn)錄水平顯著下降(P0.05)。10.肝臟B因子表達比較:與溶劑對照組比較,poly(I:C)對照組和TCE致敏組肝臟B因子表達水平無明顯差異。而聯(lián)合處理致敏組肝臟B因子顯著上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:1.腹腔注射poly(I:C)顯著加劇TCE致敏誘導(dǎo)的肝臟損傷;2.TCE致敏組肝臟補體激活上調(diào),可能由調(diào)節(jié)蛋白水平顯著下降引起;3.聯(lián)合處理致敏組肝臟局部補體激活水平顯著上升,可能由B因子表達顯著上調(diào)介導(dǎo)。4.聯(lián)合處理致敏組血清C3水平顯著下降,但并不由肝臟C3轉(zhuǎn)錄能力受損介導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：三氯乙烯 補體 肝臟損傷 B 因子
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要(Abstract)10-15
• 1. 前言15-19
• 2. 材料與方法19-27
• 2.1 化學(xué)試劑、抗體與實驗儀器19
• 2.2 動物飼養(yǎng)與處理19-20
• 2.3 小鼠致敏反應(yīng)視覺評分20-21
• 2.4 生物材料的收集和保存21
• 2.5 血清生化指標測定21
• 2.6 血清補體C3含量測定21-22
• 2.7 小鼠肝臟病理學(xué)檢查22
• 2.8 免疫組化檢測肝臟中蛋白沉積22-23
• 2.9 肝臟總RNA的提取、定量和逆轉(zhuǎn)錄23-24
• 2.10 實時定量熒光RT-PCR檢測目的基因轉(zhuǎn)錄水平24-25
• 2.11 肝臟總蛋白的提取和定量25
• 2.12 Western Blotting檢測目的蛋白表達水平25-26
• 2.13 數(shù)據(jù)庫建立和統(tǒng)計分析26-27
• 3. 結(jié)果27-36
• 3.1 皮膚致敏反應(yīng)評分及分組27
• 3.2 肝臟解剖學(xué)外觀評價及臟器系數(shù)計算27-28
• 3.3 肝臟病理學(xué)研究結(jié)果28
• 3.4 血清肝功能指標結(jié)果28-30
• 3.5 肝臟局部細胞因子沉積檢測結(jié)果30
• 3.6 血清補體C3分子水平檢測結(jié)果30-32
• 3.7 肝臟補體C3合成水平檢測結(jié)果32
• 3.8 肝臟局部補體激活檢測結(jié)果32-33
• 3.9 肝臟補體調(diào)節(jié)蛋白水平檢測結(jié)果33-34
• 3.10 肝臟補體B因子水平檢測結(jié)果34-36
• 4. 討論36-40
• 5. 結(jié)論40
• 參考文獻40-44
• 個人簡介44-45
• 致謝45-46
• 綜述：補體系統(tǒng)與Toll樣受體的交互作用46-56
• 1. 補體系統(tǒng)47-49
• 1.1 補體系統(tǒng)簡介47
• 1.2 補體激活的調(diào)節(jié)與抑制47-48
• 1.3 補體系統(tǒng)調(diào)節(jié)T細胞免疫48-49
• 1.4 細胞內(nèi)部的補體激活49
• 2. Toll樣受體（toll-like receptors, TLRs）49-51
• 2.1 TLRs簡介49-50
• 2.2 TLRs信號的調(diào)節(jié)和抑制50-51
• 2.3 TLRs調(diào)節(jié)T細胞免疫51
• 3. 補體和TLRs的交互作用51-53
• 3.1 補體調(diào)節(jié)TLRs介導(dǎo)的炎性反應(yīng)51-52
• 3.2 TLRs信號放大補體激活52
• 3.3 C3a R和C5a R信號通路和TLRs信號通路交互作用52-53
• 4. 結(jié)語53
• 參考文獻53-56

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