本文關(guān)鍵詞：慢性束縛應(yīng)激對WIRS致急性胃黏膜損傷及其愈合的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、研究背景：應(yīng)激性胃潰瘍(急性胃黏膜損傷)是臨床上危重癥患者常見并發(fā)癥,尤其發(fā)生在嚴(yán)重?zé)齽?chuàng)傷、重大手術(shù)、嚴(yán)重顱腦傷、嚴(yán)重感染等急危重人群。經(jīng)過長期以來國內(nèi)外學(xué)者的研究指出急性胃黏膜損傷主要與以下幾方面相關(guān)：神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)、胃酸分泌增多、PG及NO等保護(hù)性因子減少、活性氧生成增多、胃黏膜細(xì)胞增殖/凋亡失衡等。我們課題組長期致力于急性胃黏膜損傷及愈合的研究,前期通過制備浸水束縛應(yīng)激模型(WIRS)模擬損傷性應(yīng)激對大鼠胃黏膜損傷的發(fā)生、發(fā)展的影響及對其可能機(jī)制進(jìn)行探討,并從應(yīng)激控制的層面,發(fā)現(xiàn)一些常用的麻醉藥、鎮(zhèn)靜藥,如舒芬太尼、氯胺酮、右美托嘧啶等的預(yù)處理都可以有效的保護(hù)AGML,那么在手術(shù)、麻醉過程中還存在一些非損傷性應(yīng)激,如緊張、焦慮、恐懼等一系列心理應(yīng)激,這些會不會對急性胃黏膜損傷造成影響?其應(yīng)激機(jī)制又是如何?心理應(yīng)激(psychological stress)是有認(rèn)知、評價(jià)能力的個(gè)體在察覺應(yīng)激源威脅時(shí),所引發(fā)的一種身心緊張狀態(tài),持續(xù)的這種機(jī)體緊張狀態(tài)在心腦血管疾病、神經(jīng)內(nèi)分泌疾病、免疫系統(tǒng)疾病中起重要作用。動(dòng)物心理應(yīng)激模型包括水浸、束縛制動(dòng)、噪聲、電擊等,但其中一些存在物理性應(yīng)激成分,而束縛應(yīng)激作為一種非損傷性刺激,能夠較好地模擬人類生活中“無法控制”的擁擠、挫折等生活狀態(tài),因此,束縛應(yīng)激是一種良好的心理應(yīng)激模型。本課題主要通過束縛應(yīng)激來制備心理應(yīng)激模型,觀察其對急性胃黏膜損傷及其愈及可能機(jī)制,為確定心理應(yīng)激導(dǎo)致胃黏膜損傷提供可靠的依據(jù),同時(shí)從束縛應(yīng)激導(dǎo)致胃黏膜損傷的可能原因入手,探討相應(yīng)的干預(yù)措施及治療手段；進(jìn)一步為臨床防治應(yīng)激性胃黏膜損傷提供學(xué)術(shù)觀點(diǎn),旨在降低重大手術(shù)、嚴(yán)重創(chuàng)傷包括重癥顱腦損傷后及嚴(yán)重感染等重癥患者AGML的發(fā)生率和減輕其損傷程度。二、研究目的：通過對大鼠復(fù)制慢性束縛應(yīng)激及浸水束縛應(yīng)激模型,并對造成胃黏膜損傷的可能原因如胃酸、氧自由基損傷、細(xì)胞增殖與凋亡失衡等進(jìn)行分析,故本課題的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕校?.通過觀察不同時(shí)間束縛應(yīng)激對正常大鼠胃黏膜的作用,探索出心理應(yīng)激對胃黏膜的影響及可能的影響因素；2.通過觀察慢性束縛預(yù)處理對于WIRS對大鼠胃黏膜損傷的作用,模擬術(shù)前的心理應(yīng)激對于術(shù)中應(yīng)激導(dǎo)致胃黏膜損傷的影響,進(jìn)一步分析其影響因素；3.通過觀察束縛應(yīng)激對WIRS致胃黏膜損傷后愈合的作用,探討心理應(yīng)激對于術(shù)后患者胃黏膜修復(fù)的影響及可能原因。三、實(shí)驗(yàn)方法：(1)32只成年雄性SPF級Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組,分別為：正常組(NC組)、束縛應(yīng)激3d組(RS3組)、束縛應(yīng)激5d組(RS5組)和束縛應(yīng)激7d組(RS7組),除NC組外,均制備束縛應(yīng)激模型,每天記錄4組大鼠的體重。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括：1造模后水合氯醛麻醉大鼠,測定胃液PH,計(jì)數(shù)潰瘍指數(shù)(UI)。2采用HE染色方法觀察胃黏膜損傷情況；3刮取胃黏膜液氮凍存,分別提取組織總蛋白和總RNA,采用Western-Blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測胃黏膜中PCNA、Caspase-3的蛋白及mRNA的表達(dá)變化；4各組大鼠麻醉后取其腹主動(dòng)脈血,離心并留取血清,以檢測各組大鼠血清中SOD、MDA含量；(2)32只成年雄性SPF級Wistar大鼠,隨機(jī)分為4組,分別為：正常組(NC組)、浸水束縛應(yīng)激組(WIRS組)、慢性束縛應(yīng)激組(RS組)和慢性束縛應(yīng)激后浸水束縛應(yīng)激組(RS+WIRS組),后兩組均制備束縛應(yīng)激7天模型,WIRS及RS+WIRS組均制備浸水束縛應(yīng)激模型。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容同第一部分。(3)64只成年雄性SPF級Wistar大鼠,隨機(jī)分為8組,分別為：正常組(NC組)、浸水束縛應(yīng)激組(WIRS組)、浸水束縛應(yīng)激后3d(F3組)、5d(F5組)、7d組(F7組)、浸水束縛應(yīng)激后慢性束縛應(yīng)激3d(S3組)、5d(S5組)、7d組(S7組),除NC組外,均制備浸水束縛應(yīng)激模型,RS組均制備束縛應(yīng)激模型。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容同第一部分。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)NC組大鼠均未見胃黏膜損傷性改變,鏡下細(xì)胞排列完整,腺體結(jié)構(gòu)正常；束縛組隨應(yīng)激時(shí)間延長,大鼠胃黏膜可見明顯充血、水腫,呈深紅色及點(diǎn)狀或線狀出血、壞死,鏡下細(xì)胞腫脹、充血,排列紊亂,腺體結(jié)構(gòu)不完整。束縛應(yīng)激后大鼠胃黏膜損傷的潰瘍指數(shù)及組織含水量顯著升高(P0.05),且與束縛時(shí)間呈正比。與NC組相比,RS組大鼠胃液PH值均升高(P0.05),且隨著束縛時(shí)間延長,PH逐漸升高(P0.05)。與NC組相比,RS組大鼠的血清SOD呈先升高后降低,RS三組血清MDA均升高(P0.01),且三組均下調(diào)了SOD/MDA(P0.01)。RS3組的PCNA表達(dá)較正常對照組明顯降低(P0.01),caspase-3的表達(dá)明顯增多(P0.01)；RS5組的PCNA表達(dá)逐漸減少至最低,caspase-3的表達(dá)逐漸增多；RS7組的PCNA及Caspase-3的表達(dá)均達(dá)最高峰。(2)NC組大鼠均未見胃黏膜損傷性改變,鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,排列整齊,腺體結(jié)構(gòu)正常；WIRS組胃腔內(nèi)有大量棕色血性液體,黏膜糜爛、出血、壞死,鏡下細(xì)胞及腺體結(jié)構(gòu)消失；RS組大鼠胃黏膜呈深紅色,可見明顯充血、水腫及點(diǎn)狀出血,鏡下細(xì)胞排列疏松；RS+WIRS組大鼠胃腔內(nèi)咖啡色液體及壞死粘膜較WIRS組少,但線狀出血明顯增多,且深達(dá)肌層,鏡下粘膜連續(xù)性中斷。與NC組相比,余三組的潰瘍指數(shù)及組織含水量都有升高(P0.05),特別是WIRS組和RS+WIRS組(P0.01)；與WIRS組相比,RS+WIRS組的UI及組織含水量更高(P0.05)。與NC組相比,RS組胃液PH升高(P0.05),余兩組顯著降低(P0.01)；與WIRS組相比,RS+WIRS組胃液PH更高(P0.05)。與NC組相比,余三組的SOD及MDA均升高明顯(P0.01),且WIRS組最高,而SOD/MDA均下降(P0.01),以WIRS組最低；與WIRS組相比,RS+WIRS組血清SOD及MDA均更低(P0.01),而SOD/MDA則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Q-PCR/Western-Blot及免疫組化的結(jié)果一致顯示：與NC組相比,WIRS組及RS+WIRS組的PCNA表達(dá)相對減少(P0.01),而RS組表達(dá)則明顯增多；與WIRS組相比,RS+WIRS組PCNA表達(dá)略多(P0.05)。與NC組相比,余三組胃黏膜Caspase-3的表達(dá)均顯著增多(P0.01),且與WIRS組相比,RS+WIRS組胃黏膜Caspase-3的表達(dá)明顯增多(P0.05)。(3)NC組大鼠均未見胃黏膜損傷性改變,胃腔見少量棕灰色食物殘?jiān)?胃液呈透明淡黃色,黏膜光滑、顏色紅潤；WIRS組胃腔內(nèi)有大量棕色血性液體,黏膜糜爛、出血、壞死,鏡下細(xì)胞及腺體結(jié)構(gòu)消失,粘膜下血管和皮區(qū)血管充血；隨著時(shí)間延長,潰瘍指數(shù)減小,組織水腫減輕,胃潰瘍逐漸愈合,到第7天基本恢復(fù)正常；在潰瘍愈合過程中,束縛3天組潰瘍愈合比非束縛3天組好,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),束縛5天組與非束縛5天組愈合差異不明顯,束縛7天組則明顯慢于非束縛7天組(P0.05)；與NC組相比,WIRS組胃液PH降低(P0.01),在愈合過程中,胃液PH值逐漸升高,但差異不明顯,同時(shí)間段束縛組胃液PH均高于非束縛組(P0.05)；浸水束縛應(yīng)激后,血清SOD及MDA均升高,而SOD/MDA則明顯下降；在潰瘍愈合過程中,SOD、MDA均逐漸降低,SOD/MDA逐漸恢復(fù)正常；其中,同時(shí)間段束縛組MDA高于非束縛組,且隨著束縛時(shí)間延長,MDA逐漸升高；與NC組相比,WIRS組胃黏膜PCNA表達(dá)明顯減少(P0.05),在愈合過程中,各組胃黏膜PCNA表達(dá)均增多(P0.01),其中S3組最多；與NC組相比,余各組胃黏膜Caspase-3表達(dá)均增多,特別是WIRS組表達(dá)最多；與WIRS組相比。愈合各組胃黏膜Caspase-3的表達(dá)相對減少,與非束縛組相比,同時(shí)間段的束縛組大鼠胃黏膜PCNA表達(dá)減少(除外3d組)、Caspase-3表達(dá)相對增多(P0.05)；五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論：(1)慢性束縛應(yīng)激會引起胃黏膜損傷,且損傷程度與束縛時(shí)間呈正比,這不僅與下調(diào)胃黏膜SOD/MDA有關(guān),還與慢性束縛應(yīng)激導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞凋亡明顯增加、增殖能力下降相關(guān),這是潰瘍發(fā)生的重要原因；(2)慢性束縛應(yīng)激預(yù)處理會加重WIRS致急性胃黏膜的損傷,這可能主要與慢性束縛應(yīng)激導(dǎo)致的胃黏膜上皮細(xì)胞大量凋亡有關(guān)。(3)大鼠經(jīng)浸水束縛應(yīng)激致胃黏膜損傷后大約經(jīng)7天胃黏膜結(jié)構(gòu)可基本恢復(fù)正常,而胃黏膜功能恢復(fù)可能還需更長時(shí)間：慢性束縛應(yīng)激早期可以加速胃黏膜損傷的愈合,但隨著束縛時(shí)間延長,則會延緩損傷的愈合,這可能與應(yīng)激早期可以促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞增殖,而隨著應(yīng)激強(qiáng)度增加,胃黏膜上皮細(xì)胞增殖減少、凋亡增多,導(dǎo)致愈合延遲。
【關(guān)鍵詞】：慢性束縛應(yīng)激 急性胃黏膜損傷 超氧化物歧化酶 丙二醛 增殖細(xì)胞核抗原天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R573
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-14
• 前言14-21
• 第一部分 不同時(shí)間束縛應(yīng)激對正常大鼠胃黏膜的影響及可能機(jī)制21-47
• 1.1 材料與儀器21-22
• 1.2 方法22-35
• 1.3 結(jié)果35-44
• 1.4 討論44-46
• 1.5 結(jié)論46-47
• 第二部分 慢性束縛應(yīng)激預(yù)處理對急性胃黏膜損傷的影響47-60
• 2.1 材料與儀器47
• 2.2 方法47-49
• 2.3 結(jié)果49-57
• 2.4 討論57-59
• 2.5 結(jié)論59-60
• 第三部分 不同時(shí)間束縛應(yīng)激對大鼠急性胃黏膜損傷愈合的影響60-76
• 3.1 材料與儀器60
• 3.2 方法60-62
• 3.3 結(jié)果62-72
• 3.4 討論72-75
• 3.5 結(jié)論75-76
• 全文總結(jié)76-78
• 參考文獻(xiàn)78-85
• 綜述85-92
• 參考文獻(xiàn)89-92
• 附錄：縮略語和中英文對照表92-93
• 攻讀學(xué)位期間成果93-94
• 致謝94-95

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳易新,王天芳,季紹良,康純潔,劉曉蘭,劉燕;慢性束縛致大鼠慢性疲勞模型的腎上腺皮質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的變化[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2000年01期

  本文關(guān)鍵詞：慢性束縛應(yīng)激對WIRS致急性胃黏膜損傷及其愈合的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：286987