【摘要】：咬合創(chuàng)傷(traumatic occlusion)是指由于不正常的牙合接觸關(guān)系和/或咀嚼系統(tǒng)的功能異常,造成咀嚼系統(tǒng)的某些部位的病理性損害或適應(yīng)性變化。是由于咬合關(guān)系不正�；蛞Ш狭α坎粎f(xié)調(diào),個別或某幾個牙所受的咬合力量超過其牙周組織的耐受力而造成的牙周組織損傷情況,咬合創(chuàng)傷嚴(yán)重者可導(dǎo)致牙槽骨的吸收。在咬合創(chuàng)傷發(fā)生發(fā)展過程中,毛細(xì)血管的變化有著重要作用,通過對毛細(xì)血管的鑄型,可以直接顯示咬合創(chuàng)傷發(fā)生后毛細(xì)血管的變化,為揭示牙周組織在異常外力作用下微循環(huán)變化研究提供直接證據(jù)。 本研究中為揭示咬合創(chuàng)傷造成的病損與為微循環(huán)形態(tài)學(xué)變化之間關(guān)系,通過建立Wistar大鼠下頜第一磨牙咬合創(chuàng)傷模型,模擬人類的咬合創(chuàng)傷,采用毛細(xì)血管鑄型技術(shù)、掃描電鏡技術(shù)、病理切片等方法,從形態(tài)學(xué)角度,研究咬合創(chuàng)傷對牙周組織、顳下頜關(guān)節(jié)區(qū)域的毛細(xì)血管鑄型變化,為進(jìn)一步系統(tǒng)、全面、深入研究和分析毛細(xì)血管變化在口頜系統(tǒng)病損中的變化,為研究咬合創(chuàng)傷致口頜系統(tǒng)疾患的發(fā)病機(jī)理及其防治措施提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 一、毛細(xì)血管鑄型材料配制研究 在室溫和45°水浴恒溫條件下,分別對低粘度樹脂和高粘度樹脂聚合固化的過程中,觀察聚合中粘稠度、體積變化、有無炸管、氣泡,并進(jìn)行分析。 室溫條件下,低粘度樹脂溶液中分為聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組。加入聚合引發(fā)劑1小時后觀察,1.5%組中,5支試管均有大氣泡產(chǎn)生；1.0%組中,5支試管中有2支有比較大氣泡產(chǎn)生,另3支試管有中小氣泡產(chǎn)生。加入聚合引發(fā)劑3小時后觀察,0.5%組均發(fā)生爆管現(xiàn)象,0.3%組沒有氣泡,0.1%組沒有氣泡。 0.1%組48小時未能完全聚合,0.3%組36小時聚合,0.5%組36小時聚合,1.0%組30小時聚合,1.5%組12小時聚合。室溫低粘度樹脂聚合后體積變化：0.1%組48小時未能聚合,因此不進(jìn)行體積測量；0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.32±0.05ml,4.30±0.08ml,4.30±0.11ml,4.35±0.12ml。統(tǒng)計分析4組聚合反應(yīng)后體積無明顯差異。 45℃水浴恒溫條件下,低粘度樹脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時后觀察,1.0%組和1.5%組中,每組5支試管均有大氣泡產(chǎn)生；加入聚合引發(fā)劑3小時后觀察,0.5%組均發(fā)生爆管現(xiàn)象,0.3%組無氣泡,0.1%組也有少量小氣泡。0.1%組18小時聚合,0.3%組12小時聚合,0.5%組12小時聚合,1.0%組6小時聚合,1.5%組6小時聚合。聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.31±0.06ml,4.27±0.06ml,4.28±0.12ml,4.30±0.17ml,4.27±0.13ml。統(tǒng)計分析5組聚合反應(yīng)后體積無明顯差異。 室溫條件下,高粘度樹脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時后觀察,1.5%組中5支試管4支試管有大氣泡產(chǎn)生,剩余1支試管有中等量氣泡；加入聚合引發(fā)劑3小時后觀察,1.0%組和0.5%組有中、小氣泡產(chǎn)生,0.3%組和0.1%組無氣泡產(chǎn)生。5組均沒有發(fā)生爆管現(xiàn)象。0.1%組24小時聚合,0.3%組18小時聚合,0.5%組18小時聚合,1.0%組12小時聚合,1.5%組12小時聚合。高粘度樹脂聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.52±0.05ml,4.47±0.06ml,4.39±0.13ml,4.33±0.16ml,4.38±0.18ml。統(tǒng)計分析5組聚合反應(yīng)后體積無明顯差異。 45℃水浴恒溫條件下,高粘度樹脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時后觀察,0.5%組、1.0%組和1.5%組,每組5支試管均有大氣泡產(chǎn)生。5組均沒有發(fā)生爆管現(xiàn)象。0.1%組、0.3%組和0.5%組6小時聚合；1.0%組和1.5%組中,1小時聚合。聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.46±0.08ml,4.55±0.09ml,4.54±0.16ml,4.46±0.21ml,4.46±0.25ml。統(tǒng)計分析5組聚合反應(yīng)后體積無明顯差異。 對于毛細(xì)血管鑄型材料,采用高粘度和低粘度2種樹脂溶液,選用比例為0.3%的聚合引發(fā)劑,有利于在室溫和45。C恒溫水浴中聚合良好后,將可以形成理想的毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本。 二、正常Wistar大鼠口頜系統(tǒng)毛細(xì)血管鑄型制作 選用健康的8周齡Wistar大鼠,8只,頭面部無外傷,牙列完整,咬合關(guān)系正常,無齲壞及牙周病。給予腹腔注射2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后,打開胸腹腔,保留肝臟,剪去腹腔以下部分,從心尖進(jìn)針插入主動脈。Wistar大鼠標(biāo)本沖洗脫血后,使用KDS200注射泵以5ml/min的速度注入50ml低粘度樹脂溶液,前肢變硬伸直；然后再以1ml/min的速度注入5ml高粘度樹脂溶液。抽出灌注針扎緊主動脈,放入45℃恒溫水浴箱中加溫聚合24小時。解剖大鼠頭頸部,形成皮膚標(biāo)本、舌標(biāo)本、下頜骨標(biāo)本、上頜骨標(biāo)本、顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本。Wistar大鼠解剖后標(biāo)本腐蝕,含有骨與軟組織的標(biāo)本用次氯酸鈉溶液浸泡腐蝕；皮膚標(biāo)本、舌標(biāo)本浸泡在10%NaOH溶液中腐蝕。對Wistar大鼠標(biāo)本清洗去油、流水沖洗、超聲波清洗。將Wistar大鼠標(biāo)本自然干燥,制作完成的各毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,可以進(jìn)行掃描電子顯微鏡觀察分析。 舌毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,顯示舌部表面形態(tài)完整,毛細(xì)血管網(wǎng)解剖形態(tài)清晰,舌部兩側(cè)毛細(xì)血管網(wǎng)被舌正中纖維隔分開,舌前部正中存在凹陷。舌深動脈發(fā)出分支上升至舌背構(gòu)成舌背粘膜下毛細(xì)血管網(wǎng),兩側(cè)未見明顯吻合,可以顯示舌中部缺失血管位置與形態(tài)。 掃描電鏡顯微分析Wistar大鼠舌背部密布絲狀乳頭和菌狀乳頭的毛細(xì)血管叢,數(shù)量眾多,形態(tài)多種多樣。掃描電鏡下放大300倍至1000倍,可以觀察到絲狀乳頭血管叢呈現(xiàn)圓錐狀或者花籃狀,大小不均一；菌狀乳頭頂端平坦,呈現(xiàn)圓盤狀。毛細(xì)血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)清晰,表面光滑。放大到3000倍和4500倍時,毛細(xì)血管鑄型結(jié)構(gòu)表面依然清晰光滑,在4500倍視野中,清楚顯示毛細(xì)血管鑄型的管徑明顯小于10μm,說明樹脂材料完全可以灌注入毛細(xì)血管。 上、下頜牙根部位血管鑄型標(biāo)本,毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本解剖結(jié)構(gòu)清晰,顯示頜骨、牙與毛細(xì)血管鑄型之間的關(guān)系。來自牙槽骨和牙齦的微動脈多沿牙槽骨走行,逐級分支變細(xì),各級分支相互交織形成緊靠根面的網(wǎng)絡(luò),包圍牙根周圍。Wistar大鼠髁突的動脈主要來自關(guān)節(jié)囊的血管網(wǎng)和翼外肌動脈,血管分支在髁突頸部吻合成平行于髁突長軸的橫形血管弓,由弓上發(fā)出分支至髁突表面形成關(guān)節(jié)表面的血管網(wǎng)。 Wistar大鼠頜面皮膚以及皮下組織結(jié)構(gòu)毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,可以看到各級細(xì)微鑄型結(jié)構(gòu)組成的血管網(wǎng),大的血管逐級發(fā)出分支,直到毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò),清楚顯示分支走形的立體結(jié)構(gòu)。電鏡掃描圖像中,可見到小動脈、毛細(xì)血管前微動脈、毛細(xì)血管及微靜脈等微血管的立體構(gòu)筑結(jié)構(gòu),直徑較粗的血管與毛細(xì)血管網(wǎng)交織一起,形成豐富多樣的血管走形網(wǎng)絡(luò)。 三、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型制作 選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠12只,給予腹腔注射2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后,用光固化丙烯酸酯結(jié)構(gòu)膠將光固化復(fù)合樹脂材料固定在右側(cè)下頜第一、二磨牙牙合面上,形成高為1.Omm的高點,建立右側(cè)磨牙早接觸的創(chuàng)傷咬合。造模1月后觀測Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷組的咬合面嵌體固位良好,右側(cè)咬合發(fā)生早接觸,咬合左側(cè)不接觸；對照組咬合接觸正常。Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷組右側(cè)局部牙周組織稍紅腫,牙周袋不明顯,對合牙明顯磨損,牙齒無明顯松動。Wistar大鼠處理組體重增長比對照組平均少30g,且被毛凌亂,無光澤：對照組比較溫順,被毛光滑,有光澤。 本研究中采用Wistar大鼠作為咬合創(chuàng)傷的動物模型,由于Wistar大鼠來源豐富,有磨牙習(xí)慣,咬合創(chuàng)傷發(fā)展速度較快,可以短時間內(nèi)實現(xiàn)咬合創(chuàng)傷模型；價格低廉,飼養(yǎng)容易,抗病力強,有利于批量研究的順利進(jìn)行。 四、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的牙周毛細(xì)血管鑄型研究 選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為8組,每組6只。對于處理組,選擇制作模型完成后3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周為觀察時間點,對照組6只,第8周為觀察時間點。 牙周膜和牙槽骨的變化：對于3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周處理組和對照組,制作鑄型標(biāo)本觀察牙周膜的毛細(xì)血管和牙槽骨的變化。3天組和1周組,牙槽骨無明顯吸收,牙齦以及周圍粘骨膜結(jié)構(gòu)中毛細(xì)血管膨大；2周組、3周組和4周組,牙槽骨有吸收,毛細(xì)血管密度變小,結(jié)構(gòu)變細(xì),四周組吸收最為明顯；6周組處于靜止期,8周組中牙槽吸收有所修復(fù),牙周毛細(xì)血管密度逐漸增加。 咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致大鼠牙槽骨牙周組織發(fā)生病理變化,隨著咬合創(chuàng)傷的改建,牙槽骨與牙周組織破壞得到修復(fù)。Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的毛細(xì)血管鑄型研究,揭示咬合創(chuàng)傷與微循環(huán)變化之間的關(guān)系。為牙周組織的病理與生理變化研究提供了形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 五、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的顳下頜關(guān)節(jié)毛細(xì)血管鑄型研究 對于Wistar大鼠7個處理組,選擇制作模型完成后第3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周為觀察時間點,提前4小時禁食,進(jìn)行解剖后按照第三章方法進(jìn)行血管灌注處理。大體鑄型標(biāo)本和掃描電鏡觀察顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本的鑄型血管變化。 對于Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型,在掃描電鏡下觀察,下頜骨髁突與關(guān)節(jié)盤周圍隨著咬合創(chuàng)傷時間延長,毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)密度逐漸減小,第4周達(dá)到最低；到第6周沒有發(fā)展,第8周出現(xiàn)恢復(fù)。和咬合創(chuàng)傷改建有著密切關(guān)系。 咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致顳下頜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)發(fā)生病變,毛細(xì)血管鑄型技術(shù)能真實完整地反映顳下頜關(guān)節(jié)區(qū)域毛細(xì)血管網(wǎng)解剖形態(tài)結(jié)構(gòu)和空間分布,對研究顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病(temporomandibular disorders, TMD)的病理生理改變具有重要的應(yīng)用價值。 主要解決的問題與創(chuàng)新 本研究中主要通過毛細(xì)血管鑄型技術(shù)方法,建立Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型,研究牙周和顳下頜關(guān)節(jié)在咬合創(chuàng)傷中的毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)變化,為微循環(huán)研究增添了新的方法。 ①通過對Wistar大鼠模型毛細(xì)血管鑄型,完備了毛細(xì)血管鑄型方法,為微循環(huán)的病理生理研究提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 ②通過Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的牙周毛細(xì)血管鑄型,揭示咬合創(chuàng)傷引起牙槽骨吸收,牙周膜變化的毛細(xì)血管的形態(tài)學(xué)改變。 ③通過Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的顳下頜關(guān)節(jié)毛細(xì)血管鑄型,揭示咬合創(chuàng)傷引起顳下頜關(guān)節(jié)病理變化的毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)改變。 ④通過Wistar大鼠模型毛細(xì)血管鑄型從形態(tài)學(xué)研究疾病對微循環(huán)變化,可以和其病理生理的分子生物機(jī)制研究結(jié)果向結(jié)合,可以從宏觀和微觀2個方面相互印證,為其疾病的機(jī)理和治療措施的研究提供了可靠基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782;R-332
【圖文】：

次氯酸鈉溶液（Sodium hypochlorite solution，分析純AR，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研宄開發(fā)中心，廣東），見下圖2-1,圖2-2所示。圓圖2-1鑄型材料的試劑：甲基丙稀酸甲酯，N，N-二甲基苯胺，鄰苯二甲酸二丁酯，過氧化苯甲酷。Fig.2-1 Reagents of mold material ： methyl methacrylate, N,N-Dimethylaniline,Di-n-butyl phthaiate, Benzoyl peroxide.14

次氯酸鈉溶液（Sodium hypochlorite solution，分析純AR，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研宄開發(fā)中心，廣東），見下圖2-1,圖2-2所示。圓圖2-1鑄型材料的試劑：甲基丙稀酸甲酯，N，N-二甲基苯胺，鄰苯二甲酸二丁酯，過氧化苯甲酷。Fig.2-1 Reagents of mold material ： methyl methacrylate, N,N-Dimethylaniline,Di-n-butyl phthaiate, Benzoyl peroxide.14

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【參考文獻(xiàn)】

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1 程明亮,袁耀華,侯皓天,趙建偉,李桂軍;人體全身血管鑄型標(biāo)本的研制[J];解剖學(xué)研究;2004年03期

本文編號：2835886