研究背景:腦性癱瘓(cerebral Palsy,CP)簡(jiǎn)稱腦癱,是指自受孕期間至嬰幼期非進(jìn)行性腦損傷和發(fā)育缺陷所致的活動(dòng)受限癥候群,主要表現(xiàn)為中樞性運(yùn)動(dòng)障礙和姿勢(shì)異常。國(guó)際衛(wèi)生組織報(bào)道腦癱的患病率為1‰～5‰,我國(guó)報(bào)道腦癱兒童患病率為1.2‰～2.7‰。隨著早產(chǎn)兒及低出生體重兒存活率的上升,腦癱兒童的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。我國(guó)目前現(xiàn)有腦癱患兒400-500萬(wàn),每年又新增患兒3～4萬(wàn),致殘率為42%～45%。腦癱己成為我國(guó)導(dǎo)致兒童肢體殘疾的主要疾病之一。在腦癱的分型中以痙攣型腦癱為常見,約占60-70%。該類型腦癱主要為椎體系受損所致,常伴肌張力增高,后期往往并發(fā)肌腱攣縮、關(guān)節(jié)畸形并致終身殘疾。因此,緩解肢體痙攣、降低肌張力是治療痙攣型腦癱的關(guān)鍵。根據(jù)導(dǎo)師三十多年臨床實(shí)踐,針刺治療痙攣型腦癱具有肯定的療效,可予以推廣使用。但許多西醫(yī)神經(jīng)內(nèi)科或康復(fù)科醫(yī)師對(duì)于針刺治療痙攣型腦癱持否定觀點(diǎn),認(rèn)為針刺的疼痛刺激會(huì)加重痙攣、導(dǎo)致肢體肌張力升高,尤其是陰經(jīng)取穴針刺直接刺激痙攣側(cè)部分,更被大多數(shù)臨床醫(yī)師所反對(duì)。盡管目前有較多文獻(xiàn)報(bào)道針刺可降低痙攣型腦癱的肌張力、緩解痙攣,但其療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)主觀、單一,說(shuō)服力弱,不能被眾多臨床醫(yī)師所接受和信服。因此,本課題臨床部分采用隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn),觀察陰陽(yáng)經(jīng)不同經(jīng)穴針刺對(duì)于痙攣型腦癱患兒下肢肌張力的影響,通過(guò)采用改良Tardieu量表、表面肌電圖儀等量化療效指標(biāo)來(lái)評(píng)估針刺降低肌張力的有效性,為臨床針刺治療痙攣型腦癱提供確切的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)部分通過(guò)行為學(xué)指標(biāo)觀察針刺對(duì)痙攣型腦癱模型大鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響,采用HE染色、TUNEL染色、免疫組織化學(xué)染色、westernblot等方法觀察該模型大鼠皮層腦組織病理形態(tài)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)及cleaved-caspase3表達(dá)變化情況,進(jìn)而探討針刺改善痙攣型腦癱運(yùn)動(dòng)功能、降低肌張力的內(nèi)在機(jī)制,為針刺治療痙攣型腦癱提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。本課題共分為兩部分,摘要如下:第一部分針刺對(duì)痙攣型腦癱患兒下肢肌張力影響的臨床研究目的:本研究采用隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn),觀察陰陽(yáng)經(jīng)不同經(jīng)穴針刺治療對(duì)痙攣型腦癱患兒下肢肌張力的影響,并在常規(guī)療效評(píng)估方法的基礎(chǔ)上,采用改良Tardieu量表、表面肌電圖儀等量化療效指標(biāo)來(lái)評(píng)估針刺在改善痙攣型腦癱患兒肌張力方面的應(yīng)用價(jià)值,為痙攣型腦癱患兒針刺治療提供切實(shí)可靠的依據(jù)。方法:病例來(lái)源為2015年6月至2016年11月期間在廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬南海婦產(chǎn)兒童醫(yī)院兒童康復(fù)科門診及住院部治療的2～6歲痙攣型腦癱患兒,共收集符合腦癱診斷標(biāo)準(zhǔn)及課題納入標(biāo)準(zhǔn)的痙攣型腦癱患兒90例,隨機(jī)分為3組,分別為針刺Ⅰ組(陰經(jīng)針刺組+常規(guī)康復(fù)治療)、針刺Ⅱ組(陽(yáng)經(jīng)針刺+常規(guī)康復(fù)治療)及對(duì)照組(常規(guī)康復(fù)治療)各30例。治療前后均行下肢改良Ashworth量表(MAS)、臨床痙攣指數(shù)(CSI)、改良Tardieu量表(MTS)評(píng)估及腓腸肌表面肌電圖(sEMG)檢測(cè),觀察治療前后各組患兒的下肢肌張力水平、臨床痙攣程度、痙攣角度、腓腸肌肌電積分值(iEMG)參數(shù)的變化,并比較三組之間的療效差異。結(jié)果:1.研究開始前對(duì)三組患兒的性別、胎齡、出生體重、年齡、頭圍、病程、肌力、分娩方式、粗大運(yùn)動(dòng)功能分級(jí)、粗大運(yùn)動(dòng)功能測(cè)試、大運(yùn)動(dòng)商DQ、肌張力、臨床痙攣指數(shù)等方面的基線資料進(jìn)行比較,三組之間無(wú)顯著性差異(P0.05),說(shuō)明三組具有可比性。2.在改良Ashworth肌張力評(píng)分方面,治療后三組患兒改良Ashworth量表評(píng)級(jí)有極顯著性差異(P0.01)。與對(duì)照組比較,治療后針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組改良Ashworth量表評(píng)級(jí)均有極顯著性改善(P0.01);治療后針刺Ⅰ組和針刺Ⅱ組之間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與治療前比較,治療后針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組痙攣程度有顯著性差異(P0.05),對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)。3.在痙攣指數(shù)方面,治療后三組患兒總體均值比較有極顯著性差異(P0.01)。與對(duì)照組比較,治療后針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組痙攣指數(shù)均有顯著性降低(P0.05);而針刺Ⅰ組和針刺Ⅱ組之間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與治療前比較,三組患兒治療后痙攣指數(shù)均有極顯著性降低(P0.01)。在痙攣程度方面,治療后三組數(shù)據(jù)比較有顯著性差異(P0.05)。與對(duì)照組比較,治療后針刺Ⅰ組痙攣程度有極顯著性改善(P0.01),針刺Ⅱ組痙攣程度有顯著性改善(P0.05);針刺Ⅰ組和針刺Ⅱ組之間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與治療前比較,治療后針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組痙攣程度有極顯著性差異(P0.01),對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)。4.在內(nèi)收肌痙攣角度方面,三組患兒治療前后差值總體均值比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。在乆繩肌、踝跖屈肌群痙攣角度方面,三組數(shù)據(jù)治療后總體均值比較有極顯著性差異(P0.01),治療前后差值總體均值比較有顯著性差異(P0.05);與對(duì)照組比較,針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組治療后及治療前后差值總體均值比較有顯著性增加(P0.05),針刺Ⅰ組和針刺Ⅱ組之間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與治療前比較,三組患兒治療后下肢不同部位痙攣角度總體均值有極顯著性增加(P0.01)。5.在腓腸肌肌電積分值(iEMG)方面,三組患兒治療后及治療前后差值總體均值比較存在顯著性差異(P0.05)。與對(duì)照組比較,針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組治療后iEMG總體均值比較顯著性降低(P0.05);與對(duì)照組比較,針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組治療前后iEMG差值總體均值比較有顯著性差異(P0.05);針刺Ⅰ組、針刺Ⅱ組之間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與治療前比較,在右側(cè)腓腸肌iEMG方面,三組治療后總體均值比較均有顯著性降低(P0.05),在左側(cè)腓腸肌iEMG方面,針刺Ⅰ組和針刺Ⅱ組治療后總體均值比較有顯著性降低(P0.05),對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)。6.出生體重及胎齡與針刺Ⅰ組治療前后腓腸肌iEMG差值與呈負(fù)相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:(1)課題研究未發(fā)現(xiàn)針刺治療(尤其是陰經(jīng)取穴)會(huì)增加痙攣型腦癱患兒肢體肌張力。(2)陰陽(yáng)經(jīng)針刺可降低痙攣型腦癱患兒下肢肌張力、改善肢體痙攣程度、改善乆繩肌及踝跖屈肌群痙攣角度、降低腓腸肌肌電積分值,針刺對(duì)于痙攣型腦癱患兒痙攣狀態(tài)具有良好的臨床療效。(3)陰陽(yáng)經(jīng)不同經(jīng)穴針刺治療臨床療效無(wú)明顯差異。第二部分針刺對(duì)痙攣型腦癱模型大鼠的干預(yù)作用及機(jī)制研究目的:通過(guò)建立缺血缺氧所致的痙攣型腦癱大鼠模型,觀察針刺對(duì)于痙攣型腦癱模型大鼠行為學(xué)以及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討針刺改善痙攣型腦癱模型大鼠運(yùn)動(dòng)功能、促進(jìn)損傷修復(fù)的內(nèi)在機(jī)制。方法:將SPF級(jí)7日齡Wistar大鼠50只(其中10只備用),按照隨機(jī)數(shù)字表分為5組,每組8只,分別為正常組、假手術(shù)組、幼鼠痙攣型腦癱模型對(duì)照組、針刺Ⅰ組(陰經(jīng)取穴)、針刺Ⅱ組(陽(yáng)經(jīng)取穴)。正常組不作任何處理,假手術(shù)組麻醉后分離左頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎離斷,不作低氧處理,模型對(duì)照組及針刺兩組結(jié)扎并離斷左側(cè)頸總動(dòng)脈,將大鼠置于密閉容器中通以8%氧氣與92%氮?dú)獾幕旌蠚怏w,構(gòu)建痙攣型腦癱大鼠模型。造模成功后分組給予陰經(jīng)取穴針刺及陽(yáng)經(jīng)取穴針刺。于針刺療程前后行斜坡試驗(yàn)及網(wǎng)屏試驗(yàn),并于針刺1周后取皮層腦組織行HE染色觀察其病理形態(tài)變化;行western blot檢測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)及cleaved-caspase3的表達(dá)情況;行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)GDNF蛋白的表達(dá)情況;行TUNEL染色檢測(cè)皮層腦組織神經(jīng)元凋亡情況。結(jié)果:缺血缺氧后痙攣型腦癱模型大鼠運(yùn)動(dòng)功能下降,皮層腦組織神經(jīng)元細(xì)胞核固縮明顯,細(xì)胞凋亡增多,cleaved-caspase3表達(dá)水平上調(diào),GDNF表達(dá)水平下調(diào);與模型對(duì)照組比較,針刺可一定程度改善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能,抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)cleaved-caspase3表達(dá)下調(diào)及GDNF表達(dá)上調(diào)。目前尚無(wú)足夠證據(jù)證明陰陽(yáng)經(jīng)不同經(jīng)穴針刺療效有顯著差異。結(jié)論:針刺可改善痙攣型腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力,抑制痙攣型腦癱模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡,促進(jìn)損傷的神經(jīng)細(xì)胞修復(fù),其機(jī)制可能與其降低cleaved-caspase3蛋白活化水平、促進(jìn)GDNF表達(dá)升高有關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R246.6
【部分圖文】：

＞０．０５）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，Ｈ組患兒的胎齡、出生體重、年齡、頭圍、病程無(wú)顯著性差異逡逑（護(hù)＝２．３６０、０．６８３、１．６９７、２．７９９、１．６９４＞０．０５，邋Ｐ＝０．１００、０．５０８、０．１９３、０．０６６、０．１９０逡逑＞化０５）。Ｈ組患兒的基線資料具有可比性。（表１、圖１）逡逑２１逡逑

３）轉(zhuǎn)膜緩沖液：甘氨酸２．９ｇ；邋Ｔｒｉｓ５．８ｇ；邋ＳＤＳ０．３化；甲醇２００ｍｌ；加ｄｄＨ２０定逡逑容至邋１０００ｍｌ。逡逑４）邐０．０１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）：邋ＮａＣ１８．０ｇ；邋ＫＣ１０．２ｇ；邋Ｎａ２ＨＰ０４邋１．４４ｇ；邋ＫＨ２ＰＯ４邋０．２４ｇ；逡逑力口邋ｄｄＨ２０邋至邋１０００ｍｌ。逡逑３N１．２．３主要儀器邐逡逑商品名邐生產(chǎn)商／代理商邐貨號(hào)／型號(hào)邋應(yīng)用逡逑解剖鏡邐上海光學(xué)儀器一廠邐Ｑ０３１３８７６邋動(dòng)物實(shí)驗(yàn)逡逑針灸針邐蘇州醫(yī)療器械用品有限公司邋０．３Ｘ２５ｍｍ邋動(dòng)物實(shí)驗(yàn)逡逑智能型獨(dú)立通氣籠逡逑＇邐蘇州市蘇杭科技器材有限公司ＩＳ７邐動(dòng)物實(shí)驗(yàn)逡逑ＩＶＣ系統(tǒng)逡逑ＢＩＯ－ＲＡＤ邋小型垂邐一邋ｎ邐ｍｉｎｉ邋Ｐｒｏｌｉｅａｎ逡逑直電泳槽邐ＷＯＲＡＤＣＭ）邐４逡逑超低溫冰箱邐Ｔｈｅｒｍｏ邋（美國(guó)）邐９９１邐免疫印跡實(shí)驗(yàn)逡逑凝膠圖像分析儀邋上海天能科技有限公司（上海）Ｔａｎｏｎｌ２２０邋免疫印跡實(shí)驗(yàn)逡逑其他儀器和設(shè)備包括手術(shù)刀柄、手術(shù)刀片、止血鉛、組織剪、顯微攝、抗凝管、逡逑腎形盤，鼠盒，鼠籠等（圖１）。逡逑

鼠取出進(jìn)行復(fù)蘇，造模完２４ｈ后行神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)乳鼠向右側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈，右逡逑前爪及右足屈曲痊李，右側(cè)肢體震顫抖動(dòng)，肌肉硬度增加，Ｚｅａｌｏｎｇａ評(píng)分１？３分、逡逑肌張力在１級(jí)及１級(jí)Ｗ上者進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)［１＂，１心］。（圖２）逡逑圖２．左圖為分離并雙重結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，右圖為造模缺氧處理逡逑３N２N３假手術(shù)組動(dòng)物處理逡逑假手術(shù)組動(dòng)物分離左側(cè)頸總動(dòng)脈但不予結(jié)扎，術(shù)后縫合皮膚進(jìn)行復(fù)蘇，夏蘇方法逡逑同模型組。逡逑３N２．３動(dòng)物治療及對(duì)照組處理逡逑腦d劣資竽Ｐ馱炷３曬Γ玻矗韜蠼脅煌ㄕ氪獺ｅ義希保┱氪蹋勺檠⊙ǎ海紉踅弧⑻�。定位参斟幎实验针倦yА匪鬧ㄎ�，结合葦\脲義隙錒嵌壤啾齲紉踅蝗∧誆雀叩閔顯跡常悖恚嫉斃⊥認(rèn)攏鋇暾鄣憒ε吖嗆笤擔(dān)貝體義希埃�？０．３ｃｍ；太溪取恼E扔敫嶠謚滸枷葜�，重愄０．２？０．３ｃｍ，褍婶为度留针�(dān)恚椋睿誨義廈吭唬貝危艙氪蹋敝�。（哇E常╁義希常峰義

本文編號(hào)：2819081