目的:建立以糞腸球菌感染的大鼠根尖周炎模型,研究在大鼠根尖周病變過程中Bcl-2的表達,探討糞腸球菌對Bcl-2表達的影響。方法:實驗研究對象為雄性SD大鼠40只。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,于右下頜第一磨牙牙合面開髓后,隨機分為A、B兩個實驗組,每組各20只。A組(未封菌組):開髓后清理髓腔,封入浸有PBS緩沖液的無菌棉球;B組(封菌組):開髓后清理髓腔,封入浸有濃度為1.0×108CFU/ml的糞腸球菌菌懸液的棉球。兩組均采用進口玻璃離子對開髓的牙齒進行充填以封閉髓腔。取大鼠左下第一磨牙作為正常對照。常規(guī)飼養(yǎng),分別在開髓后的1、2、3、4周,各選取5只實驗大鼠,乙醚麻醉,心內(nèi)灌流固定,取下頜骨,修整為包含完整第一磨牙的方形骨組織塊,10%EDTA脫鈣,常規(guī)組織學處理(脫水、透明、浸蠟),石蠟包埋,制作平行于牙長軸矢狀面5μm厚的石蠟切片。采用HE染色觀察根尖區(qū)炎癥組織的病理改變;使用免疫組織化學染色手段研究Bcl-2在大鼠根尖周炎癥組織中的陽性表達與分布,采集圖像和數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果:1.HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果可見,開髓1周后實驗側(cè)下頜第一磨牙根尖組織表現(xiàn)出不同程度的漿液性滲出及血管擴張,可見少量中性粒細胞浸潤;隨病變進展,炎性浸潤范圍擴大,其中含有大量中性粒細胞;在術(shù)后4周炎細胞灶范圍仍在擴大,淋巴細胞增多。由HE病理檢測結(jié)果可以說明大鼠根尖周炎動物模型建立成功。2.免疫組織化學染色結(jié)果(1)術(shù)后1至4周,A、B兩組大鼠右下頜第一磨牙根尖周炎癥區(qū)域均可見Bcl-2陽性細胞,主要定位于淋巴細胞和中性粒細胞的細胞漿中,部分表達在細胞核內(nèi),為棕褐色或棕黃色深染。術(shù)后1至2周,Bcl-2陽性表達增高,在2周達到高峰,之后Bcl-2的表達下降。正常對照組可見少量Bcl-2陽性細胞。(2)B組Bcl-2的陽性表達量在術(shù)后1、2、3、4周之間兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。A組Bcl-2的陽性表達量在術(shù)后2周和3周分別與其他時間點兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);術(shù)后1周和4周兩個時間點上相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)A組術(shù)后1、2、3、4周Bcl-2的陽性表達均高于正常對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)B組術(shù)后1、2、3、4周Bcl-2的陽性表達均高于正常對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(5)在術(shù)后1、2、3、4周各時間點上,B組Bcl-2的陽性表達均高于A組,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.大鼠實驗性根尖周炎炎癥性破壞中Bcl-2的表達量與根尖病損發(fā)展呈正相關(guān)。2.糞腸球菌對大鼠根尖周炎的病理過程產(chǎn)生影響,使Bcl-2陽性表達增高。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R781.34
【部分圖文】：

圖 1 大鼠根尖周炎模型的建立2.4 石蠟切片的制備2.4.1 固定于 1、2、3、4 周四個時間點，每組隨機選取 5 只大鼠處死，乙醚麻醉，取仰臥位固定大鼠，觸摸到胸骨柄在其稍下方打開腹腔，剝離膈肌進入胸腔，暴露心臟，用止血鉗上翻固定胸骨柄，與心尖搏動處插灌流針入左心室-主動脈。用止血鉗固定灌流針和心臟以防脫出。打開灌流閥灌注 9%生理鹽水 300ml，同時剪開右心耳，置換出血液；待流出的液體為無色澄清，換用灌流液緩慢灌注（約 500ml），待大鼠四肢及尾巴僵硬后，停止灌流。分離灌流完成的大鼠下頜骨，與下頜中處分離兩側(cè)下頜骨，去凈軟組織，將其修整成約一厘米見方的小組織塊，區(qū)分左右側(cè)后放入 15ml Ep 管中，加入 4%多聚甲醛溶液于微波爐中后固定半分鐘。

r Windows 軟件進行數(shù)據(jù)處理，采用 t 檢驗和況。計量數(shù)據(jù)：均值±標準差(x±SD)表示。P實驗結(jié)果時間點 A、B 兩組 HE 染色可見, 根尖周炎雖存在但較為局限性，且累及病變范圍較小性滲出及血管擴張，可見少量中性粒細胞浸潤液主要以中性粒細胞為主；術(shù)后 3 周到 4 周，以淋巴細胞浸潤為主。

滲出中可見 Bcl-2 陽性表達，主要定位于淋巴細胞和中性粒細胞的細胞達在細胞核內(nèi)，為棕褐色或棕黃色深染。A、B 兩組，1 周至 2 周，達量增加，2 周達峰，3 周開始下降，4 周持續(xù)降低。A 組中的 Bcl-2達量明顯低于 B 組。正常對照組可見少量 Bcl-2 陽性表達（圖 5）。

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本文編號：2818799