目的:建立以糞腸球菌感染的大鼠根尖周炎模型,研究在大鼠根尖周病變過程中Bcl-2的表達(dá),探討糞腸球菌對(duì)Bcl-2表達(dá)的影響。方法:實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象為雄性SD大鼠40只。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,于右下頜第一磨牙牙合面開髓后,隨機(jī)分為A、B兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組,每組各20只。A組(未封菌組):開髓后清理髓腔,封入浸有PBS緩沖液的無菌棉球;B組(封菌組):開髓后清理髓腔,封入浸有濃度為1.0×108CFU/ml的糞腸球菌菌懸液的棉球。兩組均采用進(jìn)口玻璃離子對(duì)開髓的牙齒進(jìn)行充填以封閉髓腔。取大鼠左下第一磨牙作為正常對(duì)照。常規(guī)飼養(yǎng),分別在開髓后的1、2、3、4周,各選取5只實(shí)驗(yàn)大鼠,乙醚麻醉,心內(nèi)灌流固定,取下頜骨,修整為包含完整第一磨牙的方形骨組織塊,10%EDTA脫鈣,常規(guī)組織學(xué)處理(脫水、透明、浸蠟),石蠟包埋,制作平行于牙長軸矢狀面5μm厚的石蠟切片。采用HE染色觀察根尖區(qū)炎癥組織的病理改變;使用免疫組織化學(xué)染色手段研究Bcl-2在大鼠根尖周炎癥組織中的陽性表達(dá)與分布,采集圖像和數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果可見,開髓1周后實(shí)驗(yàn)側(cè)下頜第一磨牙根尖組織表現(xiàn)出不同程度的漿液性滲出及血管擴(kuò)張,可見少量中性粒細(xì)胞浸潤;隨病變進(jìn)展,炎性浸潤范圍擴(kuò)大,其中含有大量中性粒細(xì)胞;在術(shù)后4周炎細(xì)胞灶范圍仍在擴(kuò)大,淋巴細(xì)胞增多。由HE病理檢測結(jié)果可以說明大鼠根尖周炎動(dòng)物模型建立成功。2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(1)術(shù)后1至4周,A、B兩組大鼠右下頜第一磨牙根尖周炎癥區(qū)域均可見Bcl-2陽性細(xì)胞,主要定位于淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的細(xì)胞漿中,部分表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi),為棕褐色或棕黃色深染。術(shù)后1至2周,Bcl-2陽性表達(dá)增高,在2周達(dá)到高峰,之后Bcl-2的表達(dá)下降。正常對(duì)照組可見少量Bcl-2陽性細(xì)胞。(2)B組Bcl-2的陽性表達(dá)量在術(shù)后1、2、3、4周之間兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組Bcl-2的陽性表達(dá)量在術(shù)后2周和3周分別與其他時(shí)間點(diǎn)兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);術(shù)后1周和4周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)上相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)A組術(shù)后1、2、3、4周Bcl-2的陽性表達(dá)均高于正常對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)B組術(shù)后1、2、3、4周Bcl-2的陽性表達(dá)均高于正常對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)在術(shù)后1、2、3、4周各時(shí)間點(diǎn)上,B組Bcl-2的陽性表達(dá)均高于A組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.大鼠實(shí)驗(yàn)性根尖周炎炎癥性破壞中Bcl-2的表達(dá)量與根尖病損發(fā)展呈正相關(guān)。2.糞腸球菌對(duì)大鼠根尖周炎的病理過程產(chǎn)生影響,使Bcl-2陽性表達(dá)增高。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R781.34
【部分圖文】：

圖 1 大鼠根尖周炎模型的建立2.4 石蠟切片的制備2.4.1 固定于 1、2、3、4 周四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組隨機(jī)選取 5 只大鼠處死，乙醚麻醉，取仰臥位固定大鼠，觸摸到胸骨柄在其稍下方打開腹腔，剝離膈肌進(jìn)入胸腔，暴露心臟，用止血鉗上翻固定胸骨柄，與心尖搏動(dòng)處插灌流針入左心室-主動(dòng)脈。用止血鉗固定灌流針和心臟以防脫出。打開灌流閥灌注 9%生理鹽水 300ml，同時(shí)剪開右心耳，置換出血液；待流出的液體為無色澄清，換用灌流液緩慢灌注（約 500ml），待大鼠四肢及尾巴僵硬后，停止灌流。分離灌流完成的大鼠下頜骨，與下頜中處分離兩側(cè)下頜骨，去凈軟組織，將其修整成約一厘米見方的小組織塊，區(qū)分左右側(cè)后放入 15ml Ep 管中，加入 4%多聚甲醛溶液于微波爐中后固定半分鐘。

r Windows 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用 t 檢驗(yàn)和況。計(jì)量數(shù)據(jù)：均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。P實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)間點(diǎn) A、B 兩組 HE 染色可見, 根尖周炎雖存在但較為局限性，且累及病變范圍較小性滲出及血管擴(kuò)張，可見少量中性粒細(xì)胞浸潤液主要以中性粒細(xì)胞為主；術(shù)后 3 周到 4 周，以淋巴細(xì)胞浸潤為主。

滲出中可見 Bcl-2 陽性表達(dá)，主要定位于淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的細(xì)胞達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，為棕褐色或棕黃色深染。A、B 兩組，1 周至 2 周，達(dá)量增加，2 周達(dá)峰，3 周開始下降，4 周持續(xù)降低。A 組中的 Bcl-2達(dá)量明顯低于 B 組。正常對(duì)照組可見少量 Bcl-2 陽性表達(dá)（圖 5）。

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