本文關(guān)鍵詞：酪氨酸激酶c-Src在機(jī)械通氣肺損傷中的作用機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：機(jī)械通氣相關(guān)肺損傷(Ventilation induced-lung injury, VILI)是指在利用呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣時(shí),由于機(jī)械通氣的原因和肺部原發(fā)病交叉引起的急性肺損傷(Acute lung injury, ALI)。機(jī)械因素通過(guò)破壞肺泡細(xì)胞膜的完整性,影響細(xì)胞膜的通透性,引起肺泡水腫,進(jìn)而引起肺損傷。致密連接蛋白(Tight junctions, TJs) Occludin是維持肺泡上皮通透性和屏障功能的重要連接蛋白。因此,本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)(周期性機(jī)械牽張小鼠肺泡上皮細(xì)胞)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(不同潮氣量機(jī)械通氣)來(lái)模擬機(jī)械通氣相關(guān)肺損傷,觀察致密連接蛋白Occludin和酪氨酸激酶c-Src的表達(dá)；使用c-Src激酶抑制劑后,Occludin蛋白表達(dá)的變化及c-Src激酶磷酸化狀態(tài),及c-Src激酶在VILI中的作用機(jī)制。研究方法：體外實(shí)驗(yàn)：將單層培養(yǎng)的小鼠肺泡上皮細(xì)胞(MEL-12細(xì)胞)隨機(jī)分為5組,對(duì)照組(C組)、機(jī)械牽張組(S組)、二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)組(D組)、酪氨酸激酶(c-Src)抑制劑(PP2)組(P組)、小分子RNA干擾(siRNA-Occludin)組(Si組)。D組、P組在進(jìn)行周期性機(jī)械牽張前30min用c-Src激酶抑制劑PP2 (100umol/L)和DMSO (30ul/ml)進(jìn)行預(yù)處理。C組未進(jìn)行周期性機(jī)械牽張；S組以頻率0.5HZ,牽張幅度為8%、20%分別進(jìn)行周期性機(jī)械牽張MLE-12細(xì)胞,D組、P組以頻率0.5HZ,牽張幅度20%進(jìn)行周期性機(jī)械牽張預(yù)處理后的MLE-12細(xì)胞,S組的牽張時(shí)間時(shí)間為1 h、2 h、4 h,D組、P組的機(jī)械牽張時(shí)間為4 h。Si組進(jìn)行siRNA-Occludin預(yù)處理。預(yù)處理及周期性機(jī)械牽張后,一部分在冰上迅速進(jìn)行蛋白裂解,提取總蛋白,用于Western Blotting檢測(cè)Occludin蛋白及c-Src激酶的表達(dá)；另一部分,用4%多聚甲醛固定l0min,透膜封閉后,采用細(xì)胞免疫熒光觀察Occludin蛋白的分布。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：30只健康Wistar大鼠,體重250-300g,隨機(jī)分為5組,每組6只：對(duì)照組(C組),小潮氣量組(M組),大潮氣量組(H組),小潮氣量+c-Src激酶抑制劑組(M+P組),大潮氣量+c-Src激酶抑制劑組(H+P組)。C組大鼠不進(jìn)行機(jī)械通氣；M組、H組、M+P組、H+P組均進(jìn)行機(jī)械通氣,呼吸頻率均為40次／min,吸呼比(I：E)為1：2,吸入氧濃度為21%,通氣時(shí)間為4h。M組和M+P組潮氣量為7mL/kg; H組和H+P組潮氣量為42mL/kg。M+P組和H+P組在麻醉前用c-Src激酶抑制劑PP2 (lug/kg)預(yù)處理1h。機(jī)械通氣后,記錄肺損傷評(píng)分；右肺上葉迅速放入液氮中,凍存?zhèn)鋀estern Blotting測(cè)Occludin蛋白及c-Src激酶；右肺其他部分固定于4%多聚甲醛中,做HE染色；左肺用來(lái)測(cè)干濕重比評(píng)價(jià)肺水腫(W/D)。結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)：1.免疫熒光發(fā)現(xiàn),牽張幅度20%的周期性機(jī)械牽張,Occludin表達(dá)呈時(shí)間依賴(lài)性,隨牽張時(shí)間的增長(zhǎng),Occludin表達(dá)減少,PP2預(yù)處理后,進(jìn)行機(jī)械牽張,Occludin表達(dá)較未用PP2預(yù)處理多。2. Western Blotting發(fā)現(xiàn),S組中牽張幅度為8%的周期性機(jī)械牽張1h、2h、4h,與牽張0h相比,Occludin表達(dá)沒(méi)有明顯變化(P0.05)；S組中振幅為20%的周期性機(jī)械牽張1h、2h、4h,與牽張0h相比,c-Src激酶表達(dá)明顯升高(P0.05),Occludin表達(dá)明顯降低(P0.05)；與S組中機(jī)械牽張4h比較,D組中機(jī)械牽張4h的Occludin沒(méi)有明顯改變(P0.05)；與S組中機(jī)械牽張4h比較,P組中機(jī)械牽張4h, Occludin表達(dá)升高(P0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：1.HE染色發(fā)現(xiàn),大潮氣量機(jī)械通氣肺泡充血嚴(yán)重,出血,肺泡壁增厚,肺透明膜形成；加入PP2后進(jìn)行大潮氣量機(jī)械通氣后,肺泡充血及出血減少,肺泡壁增厚減少；小潮氣量機(jī)械通氣肺泡變化不明顯；2. Western Blotting發(fā)現(xiàn),與C組及M組比較,H組Occludin蛋白表達(dá)降低(P0.05),總的和磷酸化的c-Src激酶表達(dá)均升高(P0.05)；與H組比較,H+P組Occludin蛋白表達(dá)升高(P0.05),總的和磷酸化的c-Src激酶表達(dá)均降低(P0.05)。結(jié)論：大潮氣量機(jī)械通氣導(dǎo)致機(jī)械通氣肺損傷,可能與酪氨酸激酶c-Src有關(guān)。c-Src激酶磷酸化導(dǎo)致c-Src激酶激活,c-Src激酶激活導(dǎo)致致密連接蛋白Occludin表達(dá)降低,導(dǎo)致肺損傷。
【關(guān)鍵詞】：機(jī)械通氣相關(guān)肺損傷 周期性機(jī)械牽張 致密連接蛋白 c-Src激酶 Occludin
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-14
• 前言14-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一部分 機(jī)械牽張對(duì)細(xì)胞凋亡及致密連接蛋白Occludin表達(dá)的影響18-34
• 材料與方法19-27
• 結(jié)果27-28
• 討論28-29
• 結(jié)論29-30
• 附圖30-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 第二部分 酪氨酸激酶Src在機(jī)械通氣性牽張致肺泡上皮細(xì)胞損傷中的作用34-46
• 材料與方法35-39
• 結(jié)果39-40
• 討論40-41
• 結(jié)論41-42
• 附圖42-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 第三部分 酪氨酸激酶Src大鼠機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷中的作用46-60
• 材料與方法47-52
• 結(jié)果52-53
• 討論53-55
• 結(jié)論55-56
• 附圖56-58
• 參考文獻(xiàn)58-60
• 綜述60-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 致謝69-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄70-71
• 附件71

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1 陳彥,邱海波;機(jī)械牽張?jiān)诤粑鼨C(jī)相關(guān)性肺損傷中的作用機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(呼吸系統(tǒng)分冊(cè));2004年05期

2 吳劍;李紀(jì)明;孫愛(ài)軍;龔惠;鄒云增;;機(jī)械牽張引起心肌肥厚的分子機(jī)制[J];中國(guó)臨床醫(yī)學(xué);2008年03期

3 鐘甜;尤列·皮爾曼;維克多·科羅索夫;周向東;;機(jī)械牽張對(duì)人氣道黏膜上皮細(xì)胞黏蛋白5AC表達(dá)的影響及其信號(hào)通路機(jī)制研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

4 胡恒亮;程龍獻(xiàn);王志強(qiáng);蘇方成;廖玉華;王嘉陵;;機(jī)械牽張對(duì)腺苷預(yù)適應(yīng)心肌電生理特性的影響[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

5 程龍獻(xiàn),王志強(qiáng),廖玉華,王嘉陵,李星海,盛富強(qiáng);機(jī)械牽張對(duì)缺血預(yù)適應(yīng)心肌動(dòng)作電位的影響[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2004年08期

6 董愛(ài)萍;姚銳;;心臟機(jī)械牽張激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J];咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

7 王志強(qiáng),程龍獻(xiàn),廖玉華,胡恒亮,王嘉陵,盛富強(qiáng),李星海;機(jī)械牽張對(duì)鈣預(yù)適應(yīng)心肌電生理特性的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2005年07期

8 王志強(qiáng),程龍獻(xiàn),廖玉華,王嘉陵,張俊紅,周利龍,紀(jì)科偉;機(jī)械牽張對(duì)缺血乳頭肌動(dòng)作電位的影響[J];臨床心血管病雜志;2004年02期

9 蔡新;吳美玲;李菁;許璇;李躍華;;機(jī)械牽張對(duì)大鼠心室肌蛋白激酶B磷酸化及心鈉素分泌的影響[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2007年04期

10 黎潤(rùn)光;邵景范;鮮麟波;魏明發(fā);楊曉進(jìn);陳超;陳超;張海軍;郝�；�;;體外細(xì)胞機(jī)械牽張力學(xué)裝置的研制及力學(xué)分布的有限元分析[J];中國(guó)矯形外科雜志;2006年21期

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1 張容;毛璞;曾文美;龐曉清;何為群;劉曉青;黎毅敏;;機(jī)械牽張對(duì)人肺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及其作用機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

2 葉寰;詹慶元;劉曉陽(yáng);任雁宏;楊春;王辰;;動(dòng)態(tài)機(jī)械牽張對(duì)肺泡二型上皮細(xì)胞活性和功能的影響[A];第九屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 魏嚴(yán);張西正;郭勇;李瑞欣;張永紅;郭新;;機(jī)械牽張對(duì)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝影響的研究[A];2008年全國(guó)生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2008年

4 趙芳;程龍獻(xiàn);曾秋棠;;急性機(jī)械牽張對(duì)大鼠機(jī)械敏感性鉀通道TREK-1表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心電生理和起搏分會(huì)第八次全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

5 王雪芹;李克忠;馬金鳳;;周期性機(jī)械牽張對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞TLR4表達(dá)的影響[A];山東省第十六次麻醉學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

6 黎潤(rùn)光;邵景范;鮮麟波;魏明發(fā);楊曉進(jìn);陳超;陳超;張海軍;郝�；�;;體外細(xì)胞機(jī)械牽張力學(xué)裝置的研制及力學(xué)分布的有限元分析[A];全國(guó)骨科臨床研究新進(jìn)展研討會(huì)暨學(xué)習(xí)班論文集[C];2006年

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8 李磊;周寧;吳劍;楊春杰;游潔蕓;葉勇;蔣國(guó)良;姜莎莎;葛均波;鄒云增;;機(jī)械牽張不依賴(lài)血管緊張素Ⅱ通過(guò)活化血管緊張素Ⅱ1型受體激活Calcineurin通路引起心肌肥大[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

9 丁寧;許立新;佘守章;;P38及上游激酶MKK6對(duì)機(jī)械牽張誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞HMGB1的調(diào)控作用[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)危重病醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第八屆全國(guó)大會(huì)暨中華呼吸病學(xué)會(huì)呼吸生理和重癥監(jiān)護(hù)學(xué)組年會(huì)論文集[C];2008年

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1 谷長(zhǎng)平;p120-catenin在臟器損傷中的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

2 翁麗清;凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體1在機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)的心肌肥厚中的作用及其機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 鐘甜;機(jī)械牽張對(duì)氣道黏膜上皮細(xì)胞黏蛋白表達(dá)的影響及其信號(hào)通路研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 王時(shí)俊;β-arrestin2在壓力超負(fù)荷激活A(yù)T1受體致心室重構(gòu)中的分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

5 李磊;ARB在壓力超負(fù)荷引起的心肌肥大的作用及機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

6 張燕;Cyr61在機(jī)械通氣性肺損傷中作用機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

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1 趙濤;酪氨酸激酶c-Src在機(jī)械通氣肺損傷中的作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

2 黃濤;機(jī)械牽張預(yù)處理對(duì)過(guò)度牽張所致肺泡上皮細(xì)胞損傷的影響及相關(guān)機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2014年

3 孫彥龍;TRP通道在人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞機(jī)械牽張中的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

4 王雪芹;周期性機(jī)械牽張對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞TLR4表達(dá)的影響[D];山東大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：酪氨酸激酶c-Src在機(jī)械通氣肺損傷中的作用機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：277924