【摘要】：目的:本實驗利用去氧乙烯基環(huán)己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)來建立大鼠卵巢儲備功能下降(decreasing ovarian reserve,DOR)模型,觀察坤泰膠囊對大鼠一般狀況的影響;對卵巢儲備功能下降大鼠模型的性激素(estradiol,E)、(follicle-stimulating,FSH)、(lactogenichormone,LH)的影響;對顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad)的影響;對卵巢與子宮HE切片的觀察;從母代受孕率、產(chǎn)仔率、死胎率、子代體重來觀察VCD的遠(yuǎn)期不良影響及坤泰膠囊的保護(hù)作用。從線粒體凋亡通路來研究坤泰膠囊防治卵巢儲備功能下降模型的機(jī)制。方法:SD雌性大鼠連續(xù)腹腔注射VCD80mg·kg-1l5天,建立與人類相似的生理性卵巢儲備功能下降模型。將大鼠分為正常組、模型組、坤泰膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組與西藥組,于造模第1天開始灌胃給藥1次/天,連續(xù)45天(每周休息1天)。給藥劑量按照人體與大鼠體表面積等效劑量的1:3:9計算,分別設(shè)定高(1.89 g·kg-1、中(0.63 g·kg-1)、低(0.21 g.kg-1)劑量組。正常組和模型組每只大鼠每日灌服生理鹽水lml/100g。西藥組給予補(bǔ)佳樂(戊酸雌二醇),按照人體與大鼠體表面積等效劑量計算(0.13mg·kg-1)。于造模前、VCD造模后70±5天取材前稱取體重并記錄。VCD停藥后70±5天時,各組隨機(jī)麻醉8只大鼠腹主動脈取血,快速無菌方法摘取卵巢、子宮。各組剩余7只大鼠以3:1的比例與正常雄性大鼠合籠,剔除假孕者,觀察受孕率、產(chǎn)仔率、死胎率、及子代體重情況。ELISA法檢測大鼠血清FSH、LH及E2水平;HE染色觀察卵巢、子宮的病理組織學(xué)變化;Western-blot法檢測卵巢組織Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、與正常組相比,模型組大鼠蜷臥少動、反應(yīng)淡漠、毛色晦暗干枯,飲食量下降導(dǎo)致體瘦;與模型組相比,用藥后各組大鼠飲食量相應(yīng)增加,體重增長,反應(yīng)靈敏喜動,毛色光滑。改善程度依次為:低、中、高劑量組、西藥組;2、與正常組相比,模型組大鼠體重消瘦,生長緩慢,.用藥后各組體重都有不同程度的改善,坤泰膠囊低劑量組與模型組相比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異,坤泰膠囊中、高劑量組、西藥組與模型組相比較,具有極其顯著意義。改善程度依次為:低、中、高劑量組、西藥組;3、病理檢查,造模后卵巢體積明顯縮小,且與周圍組織有不同程度的粘連;子宮體積萎縮。HE染色后光鏡下可見原始卵泡與初級卵泡數(shù)目明顯減少,導(dǎo)致成熟卵泡數(shù)目減少,閉鎖卵泡增加,顆粒細(xì)胞數(shù)目減少,排列紊亂,卵母細(xì)胞變小;子宮內(nèi)膜變薄,腺體數(shù)目減少,腺腔變小。用藥后各治療組卵巢、子宮體積增大,原始卵泡、初級卵泡及成熟卵泡數(shù)目較模型組增加,閉鎖卵泡數(shù)目減少,顆粒細(xì)胞增加。同時子宮內(nèi)膜變厚,腺體數(shù)目增加,腺腔增大;4、與正常組相比,模型組FSH明顯升高,LH有一定程度的升高,但是改變差異不顯著,E2明顯降低;與模型組相比,坤泰膠囊高、中、低劑量組FSH降低,E2升高,LH有一定水平的降低,但是改變差異不顯著;補(bǔ)佳樂組FSH、LH降低,E2升高;5、模型組大鼠卵巢Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)減少,Bax、Bad蛋白表達(dá)增加,Bcl-2/Bax下降。與模型組相比,坤泰膠囊高、中、低劑量組劑量組及補(bǔ)佳樂組大鼠卵巢Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)增加,Bcl-2/Bax升高,Bax、Bad蛋白表達(dá)減少;6、各組大鼠受孕率、產(chǎn)仔率之間無統(tǒng)計學(xué)差異;模型組死胎率為14%,坤泰膠囊低劑量組死胎率為3%,余均無死胎發(fā)生。改善程度依次為:低、中、高劑量組、西藥組;7、VCD對DOR模型大鼠子代具有不良影響,模型組與正常組比較,體重偏輕;用藥后能改善子代不良情況,體重增加,低劑量組與模型組相比較,體重有一定程度的增加,但不具有統(tǒng)計學(xué)差異。體重改善程度依次為:低、中、高劑量組、西藥組;結(jié)論:1、坤泰膠囊能夠改善DOR模型大鼠的一般狀況;2、坤泰膠囊能夠改善VCD所造模型的卵巢、子宮的體積萎縮,增加生長卵泡與成熟卵泡的數(shù)目,使子宮內(nèi)膜增厚,腺體增加;3、造模藥物VCD導(dǎo)致大鼠FSH、LH水平升高,卵巢分泌E2下降。坤泰膠囊具有植物雌激素樣作用,能夠下調(diào)FSH、LH水平,刺激卵巢分泌E2,抑制顆粒細(xì)胞的凋亡,延緩卵巢的衰老;4、坤泰膠囊可能通過上調(diào)卵巢Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)及下調(diào)Bax、Bad蛋白表達(dá),抑制卵泡的凋亡,從而改善卵巢儲備功能;5、VCD對DOR模型大鼠子代具有不良影響,坤泰膠囊對DOR模型大鼠的子代具有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2768386