本文關(guān)鍵詞：敬釗纓毛蜘蛛毒素-V對(duì)LTP和認(rèn)知行為改善作用的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：LTP自發(fā)現(xiàn)以來(lái)即被公認(rèn)為學(xué)習(xí)記憶的分子模型,藥物成癮實(shí)則為一種異常的學(xué)習(xí)記憶,病理性學(xué)習(xí)記憶過(guò)程。在前期的試驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)JZTX-V對(duì)戒毒具有明顯作用,鑒于LTP與學(xué)習(xí)記憶之間千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系,近年來(lái),我們開(kāi)展了系列JZTX-V對(duì)LTP和認(rèn)知行為作用及其分子作用機(jī)制的研究。本研究分為四個(gè)部分：第一部分JZTX-V對(duì)大鼠海馬齒狀回LTP的影響目的研究JZTX-V對(duì)大鼠海馬齒狀回LTP的影響方法大鼠采用烏拉坦麻醉,待其深度麻醉后,將頭部固定在腦立體定位儀上,參照大鼠腦立體定位圖譜確定側(cè)腦室、DG及PP區(qū)位置,用顱鉆按照上述位置在大鼠腦上打孔,分別用來(lái)放置給藥導(dǎo)管、記錄電極R和刺激電極S。以刺激間隔0.033 Hz的刺激方波記錄基礎(chǔ)刺激。基礎(chǔ)刺激波形穩(wěn)定30 min后,給予高頻刺激誘導(dǎo)LTP形成,并研究10 nM和100 nM JZTX-V對(duì)LTP不同時(shí)期的作用結(jié)果10 nM和100nM的JZTX-V對(duì)LTP的基礎(chǔ)傳遞期與空白組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是對(duì)LTP的誘導(dǎo)期與空白組相比都有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)結(jié)論JZTX-V對(duì)海馬DG區(qū)突觸傳遞有顯著的增強(qiáng)作用第二部分JZTX-V對(duì)Aβ和東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用研究目的研究JZTX-V對(duì)Ap和東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用方法Ap模型組：小鼠分為4組(對(duì)照組、Aβ模型組?JZTX-V給藥組、陽(yáng)性藥多奈哌齊組),模型組、JZTX-V給藥組和陽(yáng)性藥物組連續(xù)3天通過(guò)側(cè)腦室給予Aβ1-42 400 pmol/5μl進(jìn)行造模,其余組別正常給藥；東莨菪堿模型組：小鼠分為5組(對(duì)照組、東莨菪堿模型組、陽(yáng)性藥多奈哌齊組、JZTX-V給藥組(0.024μm和0.0024μm),模型各組小鼠水迷宮試驗(yàn)訓(xùn)練前20分鐘腹腔注射東莨菪堿0.5mg/kg,對(duì)照組注射等量的生理鹽水。手術(shù)恢復(fù)7天后,第八天開(kāi)始給藥。陽(yáng)性藥組每天灌胃給予5 mg/kg多奈哌齊,其余各組給予同劑量的雙蒸水。JZTX-V組側(cè)腦室給予JZTX-V，其余各組側(cè)腦室給予等體積的鹽水。Morris水迷宮試驗(yàn)?zāi)┐谓o藥7天后進(jìn)行。結(jié)果Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不論是Aβ1-42模型組還是東莨菪堿模型組在定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)與空白組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),小鼠表現(xiàn)出明顯的空間學(xué)習(xí)記憶障礙。定位航行實(shí)驗(yàn)中,鹽酸多奈哌齊組的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)與模型組相比明顯縮短(P0.05);JZTX-V的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)與模型組相比明顯縮短(P0.05)�？臻g探索實(shí)驗(yàn)中：與空白組相比,Aβ1-42和東莨菪堿模型組小鼠在原平臺(tái)所在象限的游程、時(shí)間比率、路程比率明顯減少。不論是陽(yáng)性藥物組還是JZTX-V組在原平臺(tái)所在象限的游程、路程比率與模型組比明顯增加(P0.05)。結(jié)論JZTX-V對(duì)Aβ和東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用第三部分JZTX-V對(duì)海馬CAl區(qū)瞬時(shí)外向鉀電流和延遲整流鉀電流的作用研究目的采用紅外腦片膜片鉗全細(xì)胞記錄方法,利用急性腦片,觀察JZTX-V對(duì)小鼠海馬CA1錐體神經(jīng)元A型鉀電流變化的影響,以探索JZTX-V對(duì)LTP和認(rèn)知行為改善作用的分子機(jī)制。方法選取出生兩周左右的KM小鼠制備海馬腦片,通過(guò)紅外腦片膜片鉗全細(xì)胞記錄,負(fù)壓破膜建立全細(xì)胞電壓鉗模式,鉗制細(xì)胞膜電位在-60 mV,在維持上述電壓的基礎(chǔ)上給予去極化電刺激,可誘使離子通道開(kāi)放記錄電流,玻璃電極的電阻2-8 MΩ。腦片置于持續(xù)灌流的通以混合氧的ACSF液中,通過(guò)重力灌流系統(tǒng)給予急性工具藥及測(cè)試藥物,通過(guò)EPC-10膜片鉗系統(tǒng)記錄JZTX-V對(duì)小鼠海馬CA1錐體神經(jīng)元瞬時(shí)外向鉀電流和延遲整流鉀電流及其激活、失活等特性的變化。結(jié)果500 nM和1 uM JZTX-V對(duì)小鼠海馬CA1錐體神經(jīng)元全細(xì)胞A型鉀電流與空白組比較均有抑制作用,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而1 uM JZTX-V對(duì)海馬的延遲整流鉀電流與空白組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；1 uM JZTX-V與空白組比較能使小鼠海馬CA1錐體神經(jīng)元全細(xì)胞A型鉀電流的激活及失活曲線向去極化方向漂移不同的程度,改變了A型鉀通道的動(dòng)力學(xué)特征,但對(duì)延遲整流鉀通道的激活曲線沒(méi)有影響。結(jié)論1uM的JZTX-V對(duì)海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元IA電流大小有抑制作用,使IA通道的激活及失活曲線都向去極化方向移動(dòng),我們推測(cè)JZTX-V對(duì)海馬LTP的促進(jìn)作用有可能與其對(duì)A型鉀電流的調(diào)控有關(guān)。第四部分JZTX-V對(duì)大鼠腦中Kv4.2及KChIP2表達(dá)和內(nèi)化遷移的作用研究目的研究JZTX-V對(duì)Kv4.2及其相互作用蛋白KChIP2表達(dá)及內(nèi)化遷移的影響,以探索JZTX-V對(duì)LTP和認(rèn)知行為改善作用的分子機(jī)制。方法采用梯度離心方法分離細(xì)胞膜和內(nèi)涵體,研究JZTX-V對(duì)Kv4.2及其相互作用蛋白KChIP2表達(dá)及內(nèi)化遷移的影響。以Na/K-ATPase作為細(xì)胞膜的標(biāo)志蛋白,采用EEA1標(biāo)志內(nèi)涵體。大鼠連續(xù)10天側(cè)腦室置管給予100 nM JZTX-V,給藥結(jié)束后斷頭取腦,分離海馬及皮層。通過(guò)Western Blot技術(shù),研究JZTX-V對(duì)Kv4.2及其相互作用蛋白KChIP2表達(dá)及內(nèi)化遷移的影響。結(jié)果大鼠連續(xù)10天給予100nM JZTX-V后,Kv4.2在皮層各部分如H1、P1、P2、S2中與空白對(duì)照組相比都沒(méi)有明顯變化(P0.05,n=3)；KChIP2在皮層各部分如H1、P2、S2中與空白對(duì)照組相比都沒(méi)有明顯變化(P0.05,n=3),但在P1組分中與空白對(duì)照組相比明顯增加(P0.01,n=3)；Kv4.2在海馬各部分如H1、P1、P2、S2中與空白對(duì)照組相比都沒(méi)有明顯變化(P0.05,n=3)；KChIP2在海馬各部分如H1、P1、P2、S2中與空白對(duì)照組相比也都沒(méi)有明顯變化(P0.05,n=3)。結(jié)論海馬結(jié)構(gòu)中顯示JZTX-V對(duì)Kv4.2及KChIP2表達(dá)及內(nèi)化遷移與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；皮層中JZTX-V對(duì)Kv4.2表達(dá)及內(nèi)化遷移與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與空白組比較對(duì)KChIP2表達(dá)有增強(qiáng)作用,但對(duì)其內(nèi)化遷移無(wú)作用。
【關(guān)鍵詞】：LTP 水迷宮 A型電流 Kv4.2 KChIP2 內(nèi)化遷移 JZTX-V
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 英文縮略詞表(Abbreviation)13-14
• 前言14-19
• 參考文獻(xiàn)16-19
• JZTX-V對(duì)大鼠海馬齒狀回LTP的影響19-28
• 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• JZTX-V對(duì)Aβ和東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用研究28-38
• 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 結(jié)果30-34
• 討論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• JZTX-V對(duì)海馬CA1區(qū)瞬時(shí)外向鉀電流和延遲整流鉀電流的作用研究38-58
• 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 結(jié)果43-53
• 討論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• JZTX-V對(duì)大鼠腦中Kv4.2及KChIP2表達(dá)及內(nèi)化遷移的作用研究58-75
• 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 實(shí)驗(yàn)方法59-63
• 結(jié)果63-68
• 討論68-70
• 小結(jié)70-71
• 本研究的創(chuàng)新性71
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 綜述 蜘蛛毒素的生物學(xué)活性研究進(jìn)展75-85
• 參考文獻(xiàn)81-85
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷85-86
• 致謝86

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：275828