【摘要】：研究背景肝纖維化(Hepatic fibrosis)是指肝細(xì)胞發(fā)生壞死及炎癥刺激時(shí),肝臟中膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的增生與降解失去平衡,進(jìn)而導(dǎo)致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積的病理過程。輕者稱為“纖維化”,重者肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重,纖維結(jié)締組織延伸并連結(jié),進(jìn)而使肝小葉結(jié)構(gòu)改建,假小葉及結(jié)節(jié)形成,形成“肝硬化”。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將其歸屬于“癮瘕”“積聚”“脅痛”等范疇。肝纖維化常見病因主要有：①病毒性肝炎如乙型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎等導(dǎo)致門脈及門脈周圍性炎癥,肝細(xì)胞碎屑樣壞死或纖維化改變；②肝吸蟲導(dǎo)致肉芽腫性炎癥及門脈阻塞性肝纖維化；③酒精性肝纖維化：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)脂肪(主要為甘油三酯)堆積,細(xì)胞器變性呈酒精性透明樣變(嗜酸性胞漿內(nèi)涵體形成)；④膽汁性肝纖維化：分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。原發(fā)性主要為自身免疫性肝炎的慢性肝內(nèi)膽汁淤積引起,還包括高丙球血癥和抗線粒體抗體引起。繼發(fā)性主要為膽管梗阻引起匯管區(qū)炎癥造成肝纖維化；⑤代謝性疾病如肝豆?fàn)詈俗冃?Wilson病和血色病)；⑥中毒性如四氯化碳(CCL4)、二甲基亞硝胺(DMNA)、異煙肼等；⑦心源性如慢性充血性心衰導(dǎo)致肝靜脈淤血,肝細(xì)胞缺氧變性所致；⑧低蛋白、高血脂等營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致。肝纖維化是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程,是各種慢性肝病的共同病理學(xué)基礎(chǔ),所以阻斷或逆轉(zhuǎn)肝纖維化是治療慢性肝病的重要手段。肝纖維化的機(jī)制比較復(fù)雜：有炎癥反應(yīng),有氧化應(yīng)激,有肝細(xì)胞損傷凋亡,最主要的是肝星狀細(xì)胞的活化增殖,等等。目前多數(shù)認(rèn)為肝纖維化的形成是由于多種損肝因子(如病毒、酒精、脂肪等)引發(fā)正常肝細(xì)胞損傷、壞死、凋亡,炎癥產(chǎn)生,激活Kupffer細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子(如’TGF-β1、TIMP-1等),在肝細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物等化學(xué)遞質(zhì)的作用下,肝星狀細(xì)胞(HSC)被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast, MFB)。HSC是合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源,正常情況下HSC是處于靜止?fàn)顟B(tài)的,只有被激活轉(zhuǎn)化為MFB,再通過自分泌和旁分泌,一方面促使MFB增殖,合成大量膠原和蛋白多糖等,導(dǎo)致ECM生成與沉積,另一方面通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-beta1 (TGF-β1)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)等也是可以誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞活化,并且TIMP能抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性,MMPs是降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶,受抑制后,ECM的降解就會(huì)減少。綜合以上多方面作用,肝星狀細(xì)胞活化后,ECM合成增加,降解減少,則沉積在肝臟中,于是形成并加重肝纖維化的程度。鑒于纖維化發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,對(duì)肝纖維化的治療大致分為：①針對(duì)病因治療：即控制原發(fā)病如抗肝炎病毒、抗血吸蟲病、戒酒等；②抑制細(xì)胞外基質(zhì)合成與促進(jìn)其降解；③抑制肝星狀細(xì)胞的活化。治療肝纖維化的常用藥物主要有：秋水仙堿；干擾素-γ；拉米夫定：核糖核酸；維生素E等。目前尚未有治療肝纖維化的特效藥物,近年來大量的基礎(chǔ)和臨床研究證明清熱利濕、活血化瘀中藥大多有抗肝纖維化作用,比如丹參、姜黃、川芎、青蒿、銀杏等等。常用于治療肝纖維化的中藥主要的作用機(jī)理多為抑制肝星狀細(xì)胞的活化、抑制脂質(zhì)過氧化及促進(jìn)膠原的降解達(dá)到治療目的。紅背葉根為大戟科植物紅背山麻Alchornea trewioides (Benth.) Muell.-Arg.的根。別名紅背娘、紅帽頂(《廣西中草藥》),紅羅裙(廣州空軍《常用中草藥手冊(cè)》)。分布于我國(guó)中部和東南、華南,通常以根、葉入藥。其根味甘,性平。功效清熱解毒,祛風(fēng)除濕,散瘀止血,平喘,殺蟲止癢。傳統(tǒng)應(yīng)用于治腸炎腹瀉,痢疾,黃疸型肝炎,尿路感染和結(jié)石,腎炎,小便不利,血尿,血崩,白帶,濕疹,蕁麻疹,癰瘡腫毒,瘡瘍?nèi)站貌挥系劝Y。近代醫(yī)學(xué)研究表明,紅背葉根中含大量生物堿和酚性物質(zhì),具有止咳、祛痰作用,抗乙酰膽堿作用和輕度抑制金黃色與白色葡萄球菌作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)其水提物及水提醇沉提取的浸膏具有抗肝炎病毒和抗肝纖維化的作用,可在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化。課題組的研究結(jié)果表明紅背葉根可顯著抑制CCL4復(fù)合因素及酒精性肝纖維化大鼠血清中TGF-β1和TIMP-1,且能顯著降低血清中HA、PCⅢ、ALT、AST水平。臨床應(yīng)用試驗(yàn)表明慢性乙型肝炎患者給予紅背葉根20克,水煎服,每日一次。治療4周后,患者臨床癥狀均有一定的改善,尤其是緩解肝區(qū)不適感較明顯,患者肝功能均有不同程度改善；治療12周后,治療組與對(duì)照組比較,AST和改善蛋白代謝方面較為明顯(P0.05)。課題組研究了紅背葉根對(duì)卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用,結(jié)果表明紅背葉根可顯著改善免疫性肝損傷小鼠的胸腺、肝臟、脾臟系數(shù),降低血清中ALT、AST、NO的活性以及肝組織勻漿中TNF-α、IL-1β的含量,提示紅背葉根對(duì)免疫性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用。紅背葉根能顯著降低肝纖維化大鼠全血黏度150/s切變率、30/s切變率、5/s切變率、1/s切變率、紅細(xì)胞壓積、HA、LN、PCⅢ、CⅣ、ALT和AST,改善纖維化大鼠舌下及耳廓絡(luò)脈的循環(huán)狀態(tài),從而提示“活血通絡(luò)”可能是其抗纖維化的主要病機(jī)之一。更進(jìn)一步研究紅背葉根水提物、醇提物和紅背葉根總生物堿對(duì)CCL4致小鼠肝損傷的作用機(jī)制發(fā)現(xiàn)：紅背葉根水提物、醇提物和總生物堿均能明顯降低模型小鼠血清中ALT、AST及總膽紅素水平,減輕肝細(xì)胞變性、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及壞死等病變,但其保肝機(jī)制及總生物堿的分離純化有待進(jìn)一步研究。本課題組前期研究了紅背葉根3個(gè)有效部位,分別是石油醚有效部位,乙酸乙酯有效部位,正丁醇有效部位對(duì)Con-A誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷,可降低小鼠血清ALT、AST、TNF-α、INF-γ及肝組織MDA含量,提高肝組織SOD活力,并可改善肝臟的組織形態(tài),其乙酸乙酯及正丁醇有效部位有體外抑制HBsAg和HBeAg作用。紅背葉根乙酸乙酯有效部位體外實(shí)驗(yàn)還表明乙酸乙酯有效部位可以抑制HCV的復(fù)制,為抗HCV RNA表達(dá)的活性部位。并且在預(yù)實(shí)驗(yàn)中,我們通過對(duì)紅背葉根醇提物、正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物對(duì)肝纖維化大鼠的作用比較得出,三種有機(jī)溶劑對(duì)肝纖維化作用均不如總醇提物效果好。這提示我們紅背葉根抑制肝纖維化的作用是多種成分共同作用的結(jié)果。綜合文獻(xiàn)參考及課題組前期研究成果,我們對(duì)紅背葉根中藥材進(jìn)行提取和分離有效部位和有效單體進(jìn)行深入研究,探知其保肝作用的有效成分并探討其起效的機(jī)制。具體實(shí)驗(yàn)方法擬通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩部分進(jìn)行。研究方法1.紅背葉根醇提物的制備工藝及質(zhì)量控制本課題組根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)分析的核磁共振氫譜(H-NMR)和碳譜(13C-NMR),結(jié)合HPLC等方法分析,結(jié)果顯示本課題組從紅背葉根中所分離的單體化合物主要為為酚酸類物質(zhì)與皂苷類物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)研究建立了紫外分光光度法分別測(cè)定紅背葉根中藥材中總酚酸、總皂苷、總黃酮的含量。并采用RP-HPLC法建立了單一有效成分沒食子酸的質(zhì)量控制方法學(xué),并檢測(cè)了紅背葉根中丁香酸、p-谷甾醇、羽扇豆醇及沒食子酸乙酯等單體化合物的含量,初步探索了紅背葉根藥材的物質(zhì)基礎(chǔ)。還篩選了指紋圖譜研究的最優(yōu)系統(tǒng)洗脫條件。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為兩部分。實(shí)驗(yàn)一為紅背葉根活性成分篩選實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物分組(共13組)為：空白對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱空白組),紅背葉根乙醇提取物高、中、低劑量組,正丁醇提取物高、中、低劑量組,乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組,石油醚提取物高、中、低劑量組。實(shí)驗(yàn)二為紅背葉根乙醇提取物抗肝纖維化的機(jī)制研究。動(dòng)物分組為：空白對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱空白組)、模型組、秋水仙堿對(duì)照組及紅背葉根醇提物(AE)組。2.2動(dòng)物模型的制備與給藥選用SPF級(jí)雄性SD大鼠,除去空白對(duì)照組外,其余各組按2mL/kg體重,腹腔注射40%CCL4花生油溶液(2：3,v/v),每周2次。正常飲食飲水,每周日稱體重并記錄,連續(xù)8周。正常組與模型組用生理鹽水灌胃,干預(yù)組組分別給予相應(yīng)藥液灌胃,灌胃體積為2mL/只。2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣品制備各組大鼠模型完成后,用10%水合氯醛麻醉大鼠(0.3ml/100g),經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,4℃低溫靜置6小時(shí)后,3000rpm離心15分鐘,分離上層血清,-80℃保存?zhèn)溆?用于檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT/AST)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、三型前膠原(PCⅢ)、四型膠原(CⅣ),以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子betal (TGF-β1)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)水平；然后取出大鼠肝臟,觀察其大體形態(tài),稱肝臟濕重計(jì)算肝臟指數(shù)。并于肝左葉中部取新鮮肝臟組織后立即用10%中性福爾馬林固定后進(jìn)行病理切片處理(石蠟切片),HE染色及Masson染色,繼而進(jìn)行各種免疫組化檢測(cè)(IHC),觀察肝臟組織病理學(xué)變化,同時(shí)檢測(cè)肝組織中alpha-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)及凋亡相關(guān)蛋白(Cleaved Caspase3)的表達(dá)情況；同時(shí)取相同部位的肝臟做肝組織勻漿,用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot analysis),檢測(cè)肝組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)改變。3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)3.1細(xì)胞毒性測(cè)試將正常肝細(xì)胞(L02)和人源性肝星狀細(xì)胞(hHSC)分別接種于96孔板,用不同濃度的含紅背葉根醇提物(AE)培養(yǎng)基(0.0,0.3125,0.625,1.25,2.5,5.0,10.0,20.0μg/ml)培養(yǎng)24小時(shí),加MTT液孵育4小時(shí),去上清后加DMSO溶解甲擹顆粒,測(cè)OD值,計(jì)算細(xì)胞半數(shù)抑制率,確定紅背葉根對(duì)正常細(xì)胞的毒性范圍以及對(duì)HSC的最佳藥物濃度。3.2活化hHSC模型實(shí)驗(yàn)用TGF-β1細(xì)胞因子誘導(dǎo)人源性肝星狀細(xì)胞(hHSC)活化,再用含不同濃度紅背葉根AE培養(yǎng)基孵育24小時(shí)后,收集上清液做其他檢測(cè),收集細(xì)胞爬片做免疫組化染色,收集細(xì)胞提取蛋白做Western blot。4.統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 13.0以及Graph Pad Prism 5.0軟件統(tǒng)計(jì)分析并作圖,實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)不同采用不同的統(tǒng)計(jì)方法：各組間均數(shù)比較采用one-way ANOVA,方差齊性時(shí)采用LSD法進(jìn)行組間多重比較,方差不齊時(shí)采用Welch法,組間多重比較采用Dunnett's T3法；重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)采用repeated measures分析統(tǒng)計(jì),滿足球形檢驗(yàn)時(shí)采用Sphericity Assumed,不滿足球形檢驗(yàn)時(shí)采用Greenhouse-Geisser校正系數(shù)；相關(guān)性分析采用Spearman's rank correlation test。P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1. 以沒食子酸為對(duì)照品做紫外分光光度法測(cè)得紅背葉根中藥材中總酚酸含量高達(dá)16.7%,以人參皂苷為對(duì)照品測(cè)得總皂苷含量達(dá)11.7%,以蘆丁為對(duì)照品測(cè)得總黃酮含量是15.2%。并用反相高效液相色譜法檢測(cè)了紅背葉根中的沒食子酸(0.98%)、丁香酸(0.92%)、β-谷甾醇(0.78%),沒食子酸乙酯和羽扇豆醇因含量較低峰值過小測(cè)定值不穩(wěn)定。并且以沒食子酸為對(duì)照品對(duì)紅背葉根建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及方法學(xué)研究包括：精密度試驗(yàn)(RSD=0.71%)、穩(wěn)定性試驗(yàn)(RSD=1.35%)、重現(xiàn)性試驗(yàn)(RSD=0.8%)和準(zhǔn)確度試驗(yàn)(RSD=1.23%)。并探索了建立紅背葉根的HPLC指紋圖譜的實(shí)驗(yàn)條件：乙醇可以作為溶解紅背葉根藥材的溶劑；加熱回流方法比超聲提取方法得到的HPLC圖形分離度和飽和度更優(yōu),故以加熱回流提取法為提取方法;HPLC圖譜的最大吸收波長(zhǎng)為228nnm、273nm;流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)。2.高劑量與中劑量的紅背葉根乙醇提取物有保護(hù)肝細(xì)胞、降低血清轉(zhuǎn)氨酶和抑制肝臟中膠原沉積的作用,并且該作用比正丁醇、乙酸乙酯、石油醚提取物的作用顯著。低劑量正丁醇提取物也有改善轉(zhuǎn)氨酶的作用,但對(duì)抑制膠原沉積作用不明顯。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,紅背葉根醇提物的有效劑量至少是0.2 g/ml。3.紅背葉根醇提物對(duì)正常肝細(xì)胞的毒性很小。MTT結(jié)果顯示AE在10.05μg/ml濃度時(shí)對(duì)HSC則具有半數(shù)抑制作用,但對(duì)L02在20μg/ml其抑制率僅有大約0.2�？梢夾E對(duì)正常肝細(xì)胞的毒性非常小但對(duì)HSC敏感。用TGF-β1誘導(dǎo)HSC活化后再用不同濃度AE含藥培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞western blot結(jié)果顯示AE對(duì)活化的HSC的調(diào)節(jié)與濃度相關(guān),在極低濃度(0.625μg/ml)和高于5.0μg/ml時(shí),AE能抑制TIMP-1表達(dá)和誘導(dǎo)HSC凋亡,表現(xiàn)為Cleaved Caspase3 (CC3)的表達(dá)升高。4.CCL4腹腔注射造肝纖維化動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)方法是可靠的。經(jīng)過8周注射后,模型組的大鼠出現(xiàn)了精神萎靡,毛發(fā)枯暗,體重下降,轉(zhuǎn)氨酶升高,肝細(xì)胞脂肪變性,壞死,炎細(xì)胞浸潤(rùn)及條索狀的纖維沉積。5.紅背葉根可以抑制肝纖維化的慢性進(jìn)展過程。CCL4腹腔注射8周后,模型組肝臟的三型(P=0.003)和四型(P=0.001)膠原含量明顯升高,紅背葉根灌胃后可以降低肝臟中的透明質(zhì)酸和Ⅳ型膠原,其效果和秋水仙堿差異不大。不同時(shí)間點(diǎn)(即給藥前、給藥2周、4周、6周、8周)動(dòng)物體重差異具有顯著性(F=115.489,P=0.000),不同給藥組間(即空白組、模型組、秋水仙堿組和紅背葉根組)的差異也具有顯著性(F=12.271,P=0.000),不同治療方法與給藥時(shí)間之間具有交互作用(F=8.331,P=0.000),提示不同治療方法隨時(shí)間的增加,體重變化趨勢(shì)不同。進(jìn)一步分析單獨(dú)效應(yīng),結(jié)果顯示各時(shí)間點(diǎn)內(nèi)四組比較有顯著差異性(P0.05),以模型組體重變化差異最大(P0.01)。另外,從HE染色與Masson染色結(jié)果可見紅背葉根與能減輕肝臟中的膠原沉積和肝細(xì)胞變性壞死的情況。6.紅背葉根可以減輕肝細(xì)胞凋亡和肝損傷。與模型組相比,紅背葉根(PALT=0.001; PAST=0.001)與秋水仙堿(PALT=0.001; PAST=0.001)都可以明顯地降低轉(zhuǎn)氨酶水平。肝損傷后肝細(xì)胞出現(xiàn)腫脹,膠原沉積等,使模型組(P=0.001)紅背葉根組(P=0.035)和秋水仙堿組(P=0.001)的肝臟指數(shù)明顯比空白組增高,但紅背葉根(P=0.233)與秋水仙堿治療組(P=0.004)的肝臟指數(shù)均比模型組下降,而秋水仙堿組下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝組織切片中CC3免疫組化染色顯示模型組肝細(xì)胞凋亡情況明顯比空白組嚴(yán)重(P=0.006),而使用紅背葉根組(P=0.108)與秋水仙堿組(P=0.035)的CC3表達(dá)與模型組下調(diào),秋水仙堿組下調(diào)趨勢(shì)更顯著,Western blot結(jié)果也顯示模型組(P0.001)、秋水仙堿組(P0.001)和紅背葉根組(P0.001)的CC3表達(dá)均較空白組顯著增高,但紅背葉根組的CC3下降與模型組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006)。7.紅背葉根可以抑制α-SMA在肝臟中的表達(dá)和血清TGF-β1水平。與空白組相比,CCL4造模后模型組血清中的TGP-β1顯著升高(P0.001),而紅背葉根組(P=0.104)與秋水仙堿組(P=0.143)的TGF-β1水平與空白組差異不大,但紅背葉根組(P0.001)與秋水仙堿組(P0.001)的TGF-β1水平與模型組相比則明顯降低。肝臟中的α-SMA表達(dá),免疫組化結(jié)果顯示模型組(P=0.041)比空白組顯著升高,而秋水仙堿組(P=0.221)和紅背葉根組(P=0.066)的α-SMA都與空白組差異不大,提示纖維化的肝臟中HSC被激活并大量增殖。8.紅背葉根可以抑制肝臟中TIMP-1的表達(dá),促進(jìn)MMP-3的釋放。TGF-β1能激活HSC分泌TIMP-1,故而模型組血清中的TIMP-1水平身高,而用過秋水仙堿(P=1.000)和紅背葉根(P=0.828)組則呈下降趨勢(shì),但該差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們又對(duì)肝組織勻漿做了western blot,結(jié)果顯示模型組肝臟中TIMP-1明顯升高(P0.001),而秋水仙堿(P=0.001)和紅背葉根組(P=0.041)中的TIMP-1比空白組明顯減低,并且與模型組相比,兩種藥物的TIMP-1下降水平均顯著(P紅背葉根0.001；P秋永仙堿0.001),肝臟勻漿中的TIMP-1蛋白表達(dá)的整體趨勢(shì)與血清中的TIMP-1水平大致相符。同時(shí),模型組肝臟中MMP-3也異常升高(P0.001),但秋水仙堿組(P0.001)與紅背葉根組(P=0.125)的MMP-3表達(dá)也比空白組上升,但均比模型組低(P紅背葉根0.001；P秋水仙堿0.001),但紅背葉根組的MMP-3水平則比秋水仙堿組高(P=0.005),并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論紅背葉根乙醇提取物具有保肝降酶,抑制肝纖維化的作用,其機(jī)制可能是通過抑制正常肝細(xì)胞凋亡,并抑制肝星狀細(xì)胞的活化增殖和促進(jìn)其凋亡,從而減少細(xì)胞外基質(zhì)的合成和促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解。并且紅背葉根醇提物中含有酚酸、皂苷和黃酮類物質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１．邋ＣＣＬ４腹腔注射制備大鼠肝纖維化模型的結(jié)果。腹腔注射０：＾４后，大鼠出逡逑現(xiàn)毛色枯黃無光澤，萎頓懶動(dòng)，活動(dòng)度下降，喜好群體滕縮在一起（如圖１－１邋Ａ）。逡逑各實(shí)驗(yàn)姐大鼠的初始體重差異性不顯著，但經(jīng)過ＣＣＸ４腹腔注射后，模型組、逡逑紅背葉根組和秋水仙堿組的體重均比空白姐增長(zhǎng)緩慢（圖１－２）。病理結(jié)果也提逡逑示ＣＣｋ造模后的大鼠肝臟中膠原呈條索狀沉巧，肝細(xì)胞脂肪變性、壞死，周逡逑圍炎細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖１－１邋Ｂ），血清學(xué)檢測(cè)也提示造模８周后大鼠外周血中的ＡＬＴ、逡逑ＡＳＴ水平和肝纖維化指標(biāo)（ＨＡ、ＰＣｍ和ＣＩＶ）均顯著升高（如圖１－３，１－４）。逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邐＿＿＾之逡逑Ｂ邐２００Ｘ邐４００Ｘ逡逑謂W逡逑圖１－１邋ＣＣＬ４注射可ｌｉｌ造成肝纖維化動(dòng)物模型。（Ａ）邋ＣＯＬ４腹腔注射后出現(xiàn)大鼠毛色枯黃無逡逑１６逡逑

邐博擊學(xué)位論文邐逡逑圖１－４各組大鼠肝纖四項(xiàng)結(jié)果的比較逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏ凸邋ｏｆ邋ＨＡ，ＬＮ，ＰＣＩＩＩ邋ａｎｄ邋ＣＩＶ邋山邋ｓｅｒｕｍ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑５．紅背葉根不同極性洛劑萃取物對(duì)肝臟病理的影響與空白組相比，模型組與逡逑各干預(yù)組巧臟病理學(xué)均顯示出大量脂肪空泡形成，肝細(xì)施壞死，肝臟結(jié)構(gòu)遭到逡逑破壞，ＨＡＥ、ＭＡＥ和ＬＡＥ沮肝臟結(jié)構(gòu)破壞程度較輕，可見成片的正常肝細(xì)胞逡逑結(jié)構(gòu)，脂肪變性比其余組減少（圖１－５）。逡逑

本文編號(hào)：2730454