發(fā)布時(shí)間：2017-03-26 21:12

  本文關(guān)鍵詞：日糧多不飽和脂肪酸對(duì)中華條頸龜脂質(zhì)代謝的影響及其與卵黃發(fā)生的關(guān)系，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：龜類的人工繁殖被國際龜類保護(hù)組織(IUCN/SSC,TFTSG和TCF)列為目前挽救龜類慘遭滅絕的最急迫也是最有效的方法之一,但龜類中大多數(shù)種類的人工繁殖問題仍未得到解決。通過營養(yǎng)學(xué)途徑改善龜類親體的繁殖性能,提高性腺發(fā)育質(zhì)量和產(chǎn)卵量為解決龜類的人工繁殖問題提供了可能的途徑。目前生殖營養(yǎng)學(xué)的理論研究在魚類和蝦類中開展的較多,但在龜類中相關(guān)研究幾乎處于空白。PUFAs是卵黃蛋白原(VTG)和胚胎細(xì)胞生物膜的重要成分之一,顯著影響動(dòng)物的生殖性能(性腺發(fā)育、產(chǎn)卵力、卵的質(zhì)量等),是其生命過程中不可缺少的營養(yǎng)因子之一。但迄今為止,國內(nèi)外關(guān)于PUFAs對(duì)龜類卵巢發(fā)育的影響及機(jī)理研究鮮有報(bào)道。通過研究龜類的脂質(zhì)代謝與卵黃發(fā)生的關(guān)系,以便在不同的卵黃發(fā)生期為中華條頸龜提供合適的脂質(zhì)營養(yǎng),為解決人工養(yǎng)殖條件下龜類的性腺發(fā)育和繁殖的問題奠定前期基礎(chǔ),現(xiàn)選取雌性成體中華條頸龜(四齡,體重1557±307 g)馴養(yǎng)于海南師范大學(xué)養(yǎng)殖室。兩周后,開始正式試驗(yàn),按日糧中豆油和魚油的添加比例不同隨機(jī)分成4組,分別命名為3S∶0F組(豆油∶魚油,3∶0)、2S∶1F組(豆油∶魚油,2∶1)、1S∶2F組(豆油∶魚油,1∶2)和0S∶3F組(豆油∶魚油,0∶3)。每周喂食兩次,為期一年;每兩個(gè)月從每組中隨機(jī)選取6只,低溫冷凍麻醉后解剖,取血液測量卵黃蛋白原(VTG)含量、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC);取肝臟測量脂肪酸組成、肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)基因表達(dá)量、肝脂酶(HL)活力、脂蛋白脂酶(LPL)活力、脂肪酸合成酶(FAS)活力和激素敏感性脂肪酶(HSL)活力;取肌肉測量脂肪酸組成;取十二指腸測量胰脂肪酶(PL)活性和十二指腸組織結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果如下:1.通過測定不同卵黃發(fā)生期血清VTG含量,研究日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜卵黃募集的影響。VTG含量在不同卵黃發(fā)生期與處理間的交互效應(yīng)顯著(F=1.969,df=25,P=0.0190.05)。卵黃發(fā)生前期,日糧PUFAs對(duì)VTG含量影響不顯著(P0.05)。卵黃發(fā)生中后期,PUFAs尤其是n-3 PUFAs提升血清VTG含量效果顯著(P0.05),中期的0S∶3F組的VTG含量均在3S∶0F組的2倍以上;而后期0S∶3F組的VTG含量都在混合油組的1.5倍以上,甚至達(dá)到了3S∶0F組的3倍左右(P0.05)。在產(chǎn)卵期,VTG含量總體明顯下降,0S∶3F組均在3S∶0F組的3倍以上(P0.05)。綜上所述,卵黃發(fā)生中后期以外源性卵黃合成為主,受日糧PUFAs影響較大,日糧中不飽和脂肪酸含量越高,血清中VTG含量亦高。2.為了揭示pufas影響卵黃募集的途徑和機(jī)理,本研究進(jìn)一步探討了日糧pufas對(duì)不同卵黃發(fā)生期中華條頸龜脂質(zhì)代謝的影響:(1)對(duì)脂質(zhì)吸收過程的影響卵黃發(fā)生前期,胰脂肪酶(pl)活力較低,此時(shí)外源脂質(zhì)吸收較少;中期,pl活力明顯上升,峰值出現(xiàn)在11月份,幾乎是卵黃發(fā)生前期3倍以上,外源脂質(zhì)的吸收在中期達(dá)到高峰;而后期pl的活力整體降至最低,且各處理組之間的pl活力差異不顯著(p0.05),這與限制脂質(zhì)過量攝入有關(guān);產(chǎn)卵期,pl活力又逐漸升高,這是對(duì)脂質(zhì)消耗的補(bǔ)充作用。不同卵黃發(fā)生期,3s∶0f組和1s∶2f組pl活力均高于其余組,且3s∶0f組pl活力在卵黃發(fā)生前期、中期和產(chǎn)卵期均為0s∶3f組2.2倍以上,其中前期甚至達(dá)到了0s∶3f組4.4倍(p0.01),說明n-3pufas對(duì)pl具有顯著的抑制作用。通過觀察腸道組織結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),3s∶0f組腸絨毛長度變短,僅為其余處理組的7/9左右(p0.05),1s∶2f組絨毛長/隱窩深(v/c)幾乎是3s∶0f組1.4倍(p0.05),說明pufas可以通過提高十二指腸絨毛長度和v/c值,來提高十二指腸上皮細(xì)胞的成熟度,從而增強(qiáng)脂質(zhì)的吸收能力。(2)對(duì)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過程的影響脂質(zhì)被吸收進(jìn)入到血液之后,被相應(yīng)的脂肪分解酶分解,在轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白的作用下,被轉(zhuǎn)運(yùn)至不同的組織,從而影響血脂水平。在卵黃發(fā)生前期,肝臟中的hl和lpl的活力到達(dá)峰值,hl和lpl的活力與日糧中n-6pufas含量的變化呈正相關(guān),最大活力均出現(xiàn)在2s∶1f組。hl活力在2s∶1f組幾乎是0s∶3f組的3倍(p0.05),而lpl最大活力組幾乎是0s∶3f組的4倍(p0.01),說明n-3pufas具有抑制hl和lpl活力的作用。此時(shí)hsl的活力降至最低,0s∶3f組的hsl活力顯著高于其余組,幾乎達(dá)到3s∶0f組的1.4倍(p0.05),說明pufas具有提升hsl活力的作用。綜合上述分解酶活力的變化,說明前期主要以內(nèi)源性的脂質(zhì)動(dòng)員為主。血清中hdl-c水平在前期降至最低,而ldl-c則升至峰值,大量的脂質(zhì)在前期從肝臟等部位被轉(zhuǎn)運(yùn)到卵巢,最終造成血清血脂水平的下降(特別是tg,下降到最低)。但pufas對(duì)hdl-c,ldl-c和tg的影響均不顯著,0s∶3f組的tc含量顯著低于3s∶0f組和1s∶2f組(p0.05)。n-3pufas會(huì)促使tc通過糞固醇等途徑排出體外,同時(shí)減少tc合成以應(yīng)對(duì)機(jī)體對(duì)tg需求的減少。在卵黃發(fā)生中后期,hl和lpl的活力均保持在前期的2/3左右,其中中期的9月份hl和lpl的活力不到前期的1/2,hsl的活力達(dá)到峰值,這標(biāo)志著外源脂質(zhì)分解增強(qiáng),內(nèi)源脂質(zhì)分解減弱。hl和lpl在中期的9月份和后期受日糧影響顯著,而hsl在整個(gè)中后期均顯著受到日糧的影響,說明中后期外源性的脂質(zhì)攝入是機(jī)體的主要脂質(zhì)營養(yǎng)來源。hdl-c含量逐漸升高,并在后期達(dá)到峰值,但受日糧的影響不顯著(p0.05)。ldl-c的含量在中期的9月份降至最低,不到前期的1/6。中期的9月份,日糧pufas顯著提高了l-fabp的表達(dá)量,其中0s∶3f組均在其余組的2倍以上(p0.05)。日糧的pufas通過直接抑制ldl-c對(duì)脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn),顯著提高l-fabp的表達(dá)量,間接提高h(yuǎn)dl-c的含量,使肝臟積累更多的脂質(zhì)以進(jìn)行外源性的卵黃合成。ldl-c的含量在卵黃發(fā)生中期的11月份和后期恢復(fù)并保持在一個(gè)較高的水平,脂質(zhì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織而減少肝臟脂質(zhì)過量積累。血脂水平在中期顯著上升,并在11月份達(dá)到峰值,尤其是tg,幾乎是前期的5.5倍以上,大量外源性脂質(zhì)的攝入是造成這一結(jié)果的主要原因。后期外源性卵黃合成活動(dòng)減弱,脂質(zhì)攝入減少,血脂水平略有降低。產(chǎn)卵期,日糧pufas對(duì)肝臟hl和lpl的活力以及l(fā)-fabp的影響均不顯著。hsl的活力逐漸降低,且受日糧的影響顯著。hdl-c和ldl-c的含量則逐漸降低,血脂水平也在產(chǎn)卵后期降至最低。這與產(chǎn)卵期的卵黃發(fā)生基本停止,機(jī)體對(duì)能量需求大大降低有關(guān)。(3)對(duì)脂質(zhì)轉(zhuǎn)化利用過程的影響卵黃發(fā)生前期,肝臟fas活力最低,魚油添加組顯著高于3s∶0f組;卵黃發(fā)生中后期,fas活力逐漸升高,峰值出現(xiàn)在中期的9月份,達(dá)到前期的1.5倍以上,說明此時(shí)肝臟的脂質(zhì)合成代謝活躍,中期的11月份,0s∶3f組顯著高于1s∶2f組(p0.05);0s∶3f組fas活力在卵黃發(fā)生后期,顯著高于其余組(p0.05)。說明卵黃發(fā)生的中后期,肝臟從頭合成的能力受日糧pufas的影響顯著。日糧pufas對(duì)肌肉脂肪酸成分的影響較肝臟要顯著,在肝臟中受日糧pufas影響的只有c12∶0、c18∶2n6t、c22∶1n9、epa和n-3/n-6pufas,而在肌肉中除了c18∶2n6c,c18∶3n3,c23∶0和n-3/n-6pufas外,均受到日糧的顯著影響(p0.05)。肌肉中epa,dpa,dha,n-3pufas,mufas和sfas的最高含量均出現(xiàn)在0s∶3f組,是其余組的1.5倍以上(p0.05);肝臟中0s∶3f組的epa和n-3/n-6pufas均在其余組的2倍左右(p0.05)。肝臟中積累了大量的mufas(以c18∶1n9c為主)和sfas(以c16∶0為主),且肝臟中的脂肪酸種類要多于日糧和肌肉。綜上所述,在本研究中使用豆油替代魚油一定程度上是可行的,最適宜的替代比例組是2s∶1f組,在卵黃發(fā)生中后期,尤其是中期添加pufas最合適。
【關(guān)鍵詞】：PUFAs 魚油 豆油 中華條頸龜 脂質(zhì)代謝 卵黃發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：海南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S966.5
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 部分縮寫對(duì)照14-15
• 前言15-17
• 第一章 文獻(xiàn)綜述17-27
• 1.1 PUFAs對(duì)脂質(zhì)代謝的影響17-22
• 1.1.1 PUFAs簡介17
• 1.1.2 PUFAs主要功能17-18
• 1.1.3 PUFAs對(duì)脂質(zhì)代謝吸收的影響18-19
• 1.1.4 PUFAs對(duì)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響19-21
• 1.1.5 PUFAs對(duì)脂質(zhì)利用能力的影響21-22
• 1.2 PUFAs對(duì)動(dòng)物性腺發(fā)育的影響及其調(diào)節(jié)機(jī)制22-23
• 1.3 卵黃發(fā)生及其與脂質(zhì)營養(yǎng)的關(guān)系23-27
• 第二章 日糧的配制，成分分析及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)27-31
• 2.1 日糧的配制27
• 2.2 日糧成分分析27-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)28
• 2.4 日糧脂肪酸成分28-31
• 第三章 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜卵黃發(fā)生的影響31-35
• 3.1 材料和方法31-32
• 3.2 結(jié)果32
• 3.3 討論32-35
• 第四章 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期脂質(zhì)吸收的影響35-41
• 4.1 材料和方法35-36
• 4.2 結(jié)果36-38
• 4.2.1 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期十二指腸胰脂肪酶活性的影響36-37
• 4.2.2 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期十二指腸組織結(jié)構(gòu)的影響37-38
• 4.3 討論38-41
• 第五章 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的影響41-55
• 5.1 材料和方法41-46
• 5.2 結(jié)果46-51
• 5.2.1 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期血脂含量的影響46-48
• 5.2.2 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期脂質(zhì)代謝酶活的影響48-50
• 5.2.3 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜L-FABP基因片段組織表達(dá)量的影響50-51
• 5.3 討論51-55
• 第六章 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期脂質(zhì)合成利用的影響55-63
• 6.1 材料和方法55-56
• 6.2 結(jié)果56-59
• 6.2.1 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜不同卵黃發(fā)生期肝臟脂肪酸合成酶活力的影響56
• 6.2.2 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜對(duì)肝臟脂肪酸成分的影響56-58
• 6.2.3 日糧PUFAs對(duì)中華條頸龜肌肉脂肪酸成分的影響58-59
• 6.3 討論59-63
• 結(jié)論63-65
• 參考文獻(xiàn)65-79
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果79-81
• 致謝81-82
• 附件82

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