【摘要】：背景:近年來隨著癌癥的發(fā)病率逐年上升,發(fā)病年齡低齡化,癌癥已經(jīng)成為威脅人們生命健康的幾種主要疾病之一。除白血病之外,大多數(shù)腫瘤都以腫瘤塊實(shí)體的形式存在。當(dāng)腫瘤體積生長到一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)腫瘤腔,腫瘤腔內(nèi)各組分共同構(gòu)成腫瘤間質(zhì),實(shí)體瘤便是由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)構(gòu)成。腫瘤實(shí)質(zhì)的主要細(xì)胞成分為癌細(xì)胞,而腫瘤間質(zhì)的細(xì)胞成分較腫瘤實(shí)質(zhì)則更為復(fù)雜,主要由被癌細(xì)胞浸潤的結(jié)締組織、誘導(dǎo)的新生血管以及眾多浸潤性的白細(xì)胞細(xì)胞群構(gòu)成,腫瘤間質(zhì)細(xì)胞同時(shí)具有癌細(xì)胞和正常細(xì)胞的部分特性。腫瘤間質(zhì)通過新生的血管為腫瘤的生長提供充足的氧和營養(yǎng),其內(nèi)部的腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞群也具有抑制機(jī)體腫瘤免疫的功能。此外,腫瘤間質(zhì)的血管集群也是腫瘤實(shí)質(zhì)上脫落下來的癌細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)的橋梁,從原發(fā)腫瘤上脫落下來的游離性細(xì)胞也由腫瘤間質(zhì)中的血管進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)從而發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤實(shí)質(zhì)與間質(zhì)具有不同程度的致瘤能力,但產(chǎn)生這種差異的原因有待進(jìn)一步研究。目的:通過原位移植的方法建立4T1-GFP小鼠乳腺癌模型以獲取腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞與腫瘤間質(zhì)細(xì)胞。對(duì)腫瘤相關(guān)基因趨化因子受體、Toll樣受體以及整合素在兩種腫瘤中的表達(dá)水平及變化和兩種腫瘤重新接種后二者的致瘤能力進(jìn)行分析,研究腫瘤間質(zhì)細(xì)胞在腫瘤生長以及轉(zhuǎn)移中的作用。方法:(1)4T1-GFP荷瘤小鼠建模:通過將體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞接種到小鼠乳腺脂肪墊中,構(gòu)建荷瘤小鼠模型。(2)對(duì)趨化因子受體、Toll樣受體和整合素等腫瘤相關(guān)基因在各腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量變化進(jìn)行檢測(cè)分析。(3)將各腫瘤細(xì)胞重新接種到小鼠乳腺脂肪墊,觀察各組小鼠腫瘤生長曲線、轉(zhuǎn)移情況以及小鼠的生存曲線狀況。結(jié)果:(1)在接種腫瘤細(xì)胞1周后接種部位可觀測(cè)到有腫瘤生成,在接種兩周后處死部分移植鼠和健康對(duì)照組,發(fā)現(xiàn)與正常小鼠相比移植組小鼠脾臟明顯變大。統(tǒng)計(jì)腫瘤體積并繪制生長曲線發(fā)現(xiàn)腫瘤呈近似S型生長。在第六周處死解剖移植小鼠發(fā)現(xiàn),肺部與肝部有轉(zhuǎn)移瘤生成。(2)半定量PCR測(cè)定各基因家族(趨化因子受體、Toll受體、整合素)在不同腫瘤中表達(dá)量的變化發(fā)現(xiàn),不同腫瘤各基因表達(dá)水平不同,腫瘤間質(zhì)中CCR6、CXCR4、CXCR7、TLR2、ITGav等表達(dá)水平較高,腫瘤實(shí)質(zhì)部分TLR1、TLR3表達(dá)水平較高。(3)根據(jù)觀測(cè)到的各組腫瘤小鼠體內(nèi)腫瘤生長曲線發(fā)現(xiàn),移植腫瘤間質(zhì)細(xì)胞組腫瘤轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng),小鼠腫瘤生長較為迅猛,且存活時(shí)間較短;移植腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞組小鼠腫瘤生長緩慢,且小鼠存活時(shí)間較長。結(jié)論:通過乳腺脂肪墊接種腫瘤細(xì)胞的方法,成功建立4T1-GFP乳腺癌荷瘤小鼠模型;通過半定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞與腫瘤間質(zhì)的各基因表達(dá)水平有所差異;成功證實(shí)相比腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞,腫瘤間質(zhì)細(xì)胞具有更強(qiáng)的致瘤性,且成瘤后腫瘤細(xì)胞增殖能力和轉(zhuǎn)移能力更強(qiáng),從而為腫瘤治療提供更明確地靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1.1 腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞構(gòu)成Figure 1.1 Cell composition of tumor microenvironment注：腫瘤相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞具有不同的細(xì)胞構(gòu)成。已發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞（TASC）至少 6 種不同的類群：成纖維細(xì)胞，周細(xì)胞，骨髓 MSC，脂肪細(xì)胞，已發(fā)生內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的內(nèi)皮細(xì)胞（EndMT）或已成腫瘤細(xì)胞上皮至間充質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）。這些細(xì)胞的表型通過可溶性因子、微小 RNA、外來體的作用行轉(zhuǎn)換，形成 TASC 特有亞型如 EMT，或 EndMT、與癌癥相關(guān)的脂肪細(xì)胞（CAA）或癌癥相關(guān)內(nèi)皮（CAEC）(Midgley et al. 2013)。大量證據(jù)表明，在腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞可以進(jìn)行“轉(zhuǎn)分化”，從基質(zhì)細(xì)胞應(yīng)性基質(zhì)細(xì)胞以及從腫瘤相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞。最常見的細(xì)胞分化是在反應(yīng)性基質(zhì)期間成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成為活化的肌成纖維細(xì)胞(Midgley et al. 2013)。有證明，這種現(xiàn)象既是一種再分化進(jìn)程(Untergasseretal.2005)，也是一種轉(zhuǎn)分化(Midgley et al. 2013)，這取決于具體情況。其他臨床病例也有周細(xì)胞轉(zhuǎn)分化皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞的證據(jù)，證明其能夠形成腫瘤相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞（TAS(Deruiter et al. 1997)。另一方面，有證據(jù)表明癌細(xì)胞能夠促進(jìn)基質(zhì)樣細(xì)胞轉(zhuǎn)以促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。Scully 等人(Scully et al. 2012)發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞樣能夠轉(zhuǎn)分化為基底樣內(nèi)皮細(xì)胞以促進(jìn)血管的生成。Twist1 通過 Jagged1/KLF

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文劑的用量約為 55μL，，則麻醉劑的用量此時(shí)的麻醉效果最好。模型的評(píng)價(jià)細(xì)胞約 1 周后，在接種位點(diǎn)出現(xiàn)了疑似增長趨勢(shì)較為平穩(wěn)，接種第 2 周，麻醉剖取脾臟通過與正常對(duì)照組小鼠對(duì)比觀細(xì)胞一段時(shí)間后，脾臟體積明顯大于正數(shù)發(fā)現(xiàn)移植腫瘤細(xì)胞后荷瘤小鼠脾指接種 3 周后腫瘤塊生長速度明顯加快，小鼠出現(xiàn)腹腔積水的情況，小鼠較為萎變化繪制成小鼠腫瘤生長曲線（圖 2-3瘤小鼠，可觀察到部分移植組小鼠腫瘤乳腺癌荷瘤小鼠模型構(gòu)建成功
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R73-3

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本文編號(hào)：2669759