【摘要】：目的:目前臨床上常用的經(jīng)典抗抑郁藥,因其較長(zhǎng)的起效時(shí)間或較多的不良反應(yīng),遠(yuǎn)不能滿足臨床治療需求。氯胺酮的快速抗抑郁作用為快速抗抑郁藥的研究提供了新方向。研究表明,腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受體在氯胺酮的抗抑郁機(jī)制中發(fā)揮作用。異氟烷作為一種揮發(fā)性麻醉劑,早在上世紀(jì)80年代,已被臨床報(bào)道具有明顯的抗抑郁效用。有研究表明在健康小鼠中,異氟烷能夠激活BDNF的受體酪氨酸激酶B(the tyrosine receptor kinase B,Trk B),產(chǎn)生一定的抗抑郁樣作用,但其對(duì)Trk B的激活不依賴于BDNF的含量增加,這與氯胺酮的作用有所不同。此外,氯胺酮能夠在短時(shí)間內(nèi)提高健康小鼠腦中樹突棘的密度,而異氟烷在健康小鼠不能產(chǎn)生同樣的作用,并且這一結(jié)果未在抑郁疾病模型上得到驗(yàn)證。本課題旨在建立慢性不可預(yù)知溫和刺激(chronic unpredictable mild stimulation,CUMS)抑郁模型小鼠的基礎(chǔ)上,探究異氟烷是否具有快速的抗抑郁作用,并進(jìn)一步探究BDNF/Trk B及其下游信號(hào)通路在異氟烷抗抑郁研究中的作用,為快速抗抑郁藥的研發(fā)提供新的研究方向和數(shù)據(jù)支持。方法:1.四個(gè)周慢性不可預(yù)知溫和刺激建立抑郁動(dòng)物模型,通過行為學(xué)測(cè)試進(jìn)行抑郁樣小鼠的篩選:糖水偏好測(cè)試(sucrose preference test,SPT),新奇環(huán)境抑制進(jìn)食測(cè)試(novelty-suppressed feeding test,NSFT)和強(qiáng)迫游泳測(cè)試(forced swim test,FST)。2.課題組成:第一部分:探究異氟烷對(duì)CUMS模型小鼠的抗抑郁作用。主要應(yīng)用行為學(xué)測(cè)試和免疫印跡法(western blot,WB)來評(píng)價(jià)動(dòng)物在行為學(xué)和蛋白分子水平上的變化。第二部分:應(yīng)用Trk B受體抑制劑K252a預(yù)處理,觀察異氟烷的抗抑郁作用在行為學(xué)及蛋白水平上的變化。第三部分:應(yīng)用高爾基銀染法(Golgi Staining)觀察異氟烷對(duì)海馬和前額葉皮層中的錐體神經(jīng)元的樹突棘密度的影響。3.實(shí)驗(yàn)分組:第一部分:空白對(duì)照組(Control),陰性對(duì)照組(CUMS)、陽(yáng)性對(duì)照氯胺酮組(ketamine,KET)、異氟烷組(ISO,包括兩組:麻醉治療結(jié)束當(dāng)天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)為ISO0d,麻醉治療結(jié)束后第三天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)為ISO3d)。第二部分,將抑郁小鼠分為陰性對(duì)照組(CUMS),異氟烷組(ISO),異氟烷+抑制劑K252a組(ISO+K252a)。第三部分:將接受異氟烷麻醉治療的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為當(dāng)天組(ISO0d),第三天組(ISO3d),第七天組(ISO7d)。結(jié)果:1.經(jīng)過4周的CUMS成功建立抑郁動(dòng)物模型。與陰性對(duì)照CUMS組小鼠相比,異氟烷能顯著提高抑郁小鼠的糖水偏好度(p0.01),并能縮短在NSFT中的攝食延遲時(shí)間(p0.001)和在FST中的不動(dòng)時(shí)間(p0.01)。取海馬和前額葉皮層進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與陰性對(duì)照CUMS組小鼠相比,異氟烷在給藥后2 h能提高HC和PFC中的m BDNF和pro BDNF水平(p0.05),并且能夠顯著提高Trk B、蛋白激酶B(Akt)和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶標(biāo)蛋白(m TOR)(p0.01)的磷酸化水平。2.BDNF受體Trk B抑制劑K252a取消了異氟烷對(duì)抑郁小鼠行為缺陷的逆轉(zhuǎn)作用。WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)K252a能夠明顯抑制HC和PFC中Trk B和Akt的磷酸化(p0.01);對(duì)于m TOR,K252a僅能顯著降低PFC中的磷酸化(p0.001),對(duì)于HC中的磷酸化水平?jīng)]有影響。3.異氟烷提高海馬和腹內(nèi)側(cè)前額葉皮層(medial prefrontal cortex,m PFC)中錐體神經(jīng)元的樹突棘密度。高爾基染色數(shù)據(jù)表明,與陰性對(duì)照CUMS組小鼠相比,異氟烷并沒有迅速提高海馬腦區(qū)的樹突棘密度,僅提高了m PFC中的樹突棘密度(p0.001)。給藥后第三天、第七天進(jìn)行的Golgi Staining得到的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),異氟烷能提高兩個(gè)腦區(qū)中的樹突棘密度(p0.05)。結(jié)論:1.異氟烷具有快速的抗抑郁作用(給藥后2 h),能恢復(fù)CUMS造模引起的行為缺陷。并且能夠提高海馬(HC)和前額葉皮層(PFC)中BDNF水平,促進(jìn)Trk B、Akt和m TOR的磷酸化。2.應(yīng)用K252a,發(fā)現(xiàn)異氟烷的行為學(xué)改善效用消失,異氟烷促進(jìn)Trk B、Akt和m TOR磷酸化的效用亦被K252a抑制。這提示我們,BDNF/Trk B信號(hào)通路參與異氟烷的快速抗抑郁機(jī)制中。3.異氟烷能夠提高海馬和腹內(nèi)側(cè)前額葉皮層的樹突棘密度,表明其對(duì)于神經(jīng)元可塑性有一定的調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R749.41

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本文編號(hào)：2655783