【摘要】：活體儲(chǔ)運(yùn)已經(jīng)成為了水產(chǎn)品尤其是內(nèi)陸淡水魚儲(chǔ)運(yùn)的主要趨勢(shì)。冰溫理論認(rèn)為經(jīng)過(guò)低溫馴化的魚貝類,即使環(huán)境溫度低于生態(tài)冰溫零點(diǎn),也能保持冬眠狀態(tài)而不死亡。處于冰溫冬眠的魚貝類,呼吸和新陳代謝極低,為無(wú)水活運(yùn)提供了條件。溫度降低,呼吸和新陳代謝也降低,同時(shí)減少氧氣消耗,使魚體離水存活時(shí)間越長(zhǎng)。作為變溫動(dòng)物,魚類的生理活動(dòng)如生殖、攝食及生長(zhǎng)等均受到溫度影響。酶活力的變化是魚類對(duì)溫度適應(yīng)的一種機(jī)制。適應(yīng)通常通過(guò)提高代謝酶的活力,即通過(guò)增加酶的濃度,或者通過(guò)改變酶可替換結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生最適的熱性質(zhì)。機(jī)體應(yīng)對(duì)溫度的變化存在調(diào)節(jié)機(jī)制,酶活性的變化可以作為一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)。綜合國(guó)內(nèi)外研究情況,對(duì)魚類低溫研究以長(zhǎng)期適應(yīng)或冷休克脅迫為主,在降溫的過(guò)程中的生理變化缺少監(jiān)控,對(duì)短期暫養(yǎng)及期間降溫速率的研究匱缺,同時(shí)低溫對(duì)水產(chǎn)品機(jī)體影響的機(jī)理研究薄弱;魚類儲(chǔ)運(yùn)的研究集中在改變儲(chǔ)運(yùn)條件與存活時(shí)間長(zhǎng)短的關(guān)系上,而過(guò)程中各項(xiàng)生理指標(biāo)的變化以及各項(xiàng)儲(chǔ)運(yùn)條件之間、各條件與生理指標(biāo)的交互關(guān)系需要更細(xì)致的研究。本課題從影響鯽魚離水儲(chǔ)運(yùn)的條件出發(fā),通過(guò)對(duì)酶活力及生理指標(biāo)的研究,解釋溫度變化及休眠方式與機(jī)體各項(xiàng)指標(biāo)的關(guān)系,揭示鯽魚儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中的生理變化規(guī)律。根據(jù)回歸模型探討影響魚類儲(chǔ)運(yùn)存活的因素。為此課題開展了以下工作:1.解剖得到鯽魚離體組織:腦、鰓、肝胰臟、肌肉以及血液,使用差示掃描量熱技術(shù)測(cè)定組織器官在20℃-60℃的熱性質(zhì),其中腦水分含量最高,同時(shí)可凍結(jié)水含量多,鰓及腹部肌肉凍結(jié)水含量較少。各組織中血液比熱值較小,有利于快速調(diào)節(jié)各組織溫度,有助于平衡魚體溫度變化。同時(shí)與凍結(jié)法測(cè)得魚體整體冰點(diǎn)進(jìn)行比較,鯽魚魚體不同部位凍結(jié)溫度差異較大,0～-0.2℃是鯽魚整體活體保存的臨界溫度,作為生態(tài)冰溫區(qū)間。2.通過(guò)設(shè)置兩種降溫速率:以5℃/h和1℃/h降溫,觀察短期降溫對(duì)鯽魚幼魚血糖、糖原、游離氨基酸以及腦線粒體膜脂流動(dòng)性等生理指標(biāo)的影響,兩組降溫降溫速率中都觀察到血糖在正常水平上隨溫度波動(dòng),肝糖原值在儲(chǔ)藏過(guò)程中持續(xù)降低。在15℃時(shí),兩組降溫組線粒體膜脂流動(dòng)性提升,同時(shí)多種游離氨基酸含量上升,包括生糖氨基酸含量大量增加,反映出與溫度變化速率無(wú)關(guān),在15°℃時(shí)與能量代謝相關(guān)的各種酶活性提高,物質(zhì)利用速率增加。表明鯽魚在能量利用調(diào)控中存在溫度閾值。3.為研究低溫馴化及儲(chǔ)藏溫度對(duì)鯽魚活體離水后儲(chǔ)藏的影響,將鮮活鯽魚經(jīng)5℃/h及1℃/h低溫馴化后,在4℃同0℃冷庫(kù)中離水儲(chǔ)藏,以代謝酶及抗氧化酶變化反映魚體的生理狀態(tài)及損傷程度。1℃/h降溫有利于乳酸脫氫酶(LDH)活力的保存。低溫及離水條件下肝臟內(nèi)的有氧代謝受到了抑制,同時(shí)較低的溫度儲(chǔ)藏對(duì)有氧代謝酶活力有一定的保護(hù)作用。腦琥珀酸脫氫酶(SDH)的活力在各組之間無(wú)明顯差異,作為線粒體內(nèi)膜上的酶,其酶活力的穩(wěn)定反應(yīng)了膜脂流動(dòng)性在馴化及離水低溫條件下保持穩(wěn)定;低溫儲(chǔ)藏中血液過(guò)氧化氫酶(CAT)集聚而肝臟CAT活力未表現(xiàn)出明顯變化。氨基酸代謝,腦組織脂類過(guò)氧化主要受儲(chǔ)藏溫度影響。4.采用僵硬指數(shù)作為離水后鯽魚的活力指數(shù),并通過(guò)比較冰溫及冷藏(4℃)保鮮鯽魚的氨基酸變化分析了冰溫技術(shù)對(duì)鯽魚營(yíng)養(yǎng)吸收及口感的影響。結(jié)果顯示5℃/h降溫后鯽魚在離水條件下僵硬指數(shù)上升較快,存活率較低;水解氨基酸結(jié)果顯示4°C冷藏對(duì)Leu含量影響最大,其含量平均值較鮮活魚提高26.56%;而Asp作為鮮味氨基酸之一在4℃冷藏后提高26.3%;其中Asp、Leu、Phe、Trp在冰溫儲(chǔ)藏后較4℃冷藏鯽魚提高12～14%;人體所需的八種必須氨基酸之中,Thr、Phe、Met、Trp、Leu、Val平均值較鮮活魚大幅提高,顯示鯽魚冰溫離水儲(chǔ)藏后較高的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。經(jīng)冰溫技術(shù)處理后,游離氨基酸Ala、Val、Leu、Trp、Pro含量有明顯升高。鮮味氨基酸中Ala變化較大,其平均值較鮮活魚大幅提高反映出鯽魚冰溫儲(chǔ)藏后其鮮味的提升。多種疏水游離氨基酸含量也有所提高,對(duì)魚體耐寒能力有提升作用。5.通過(guò)使用間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(MS-222)、丁香酚同低溫休眠對(duì)比,比較研究長(zhǎng)時(shí)間浸泡麻醉對(duì)鯽魚成魚的代謝抑制作用。高濃度MS-222,丁香酚均能使鯽魚快速達(dá)到深度麻醉,高濃度的麻醉劑(30 mg/mL MS-222和30 mg/mL 丁香酚)對(duì)血糖含量的升高有明顯的抑制作用,而丁香酚麻醉組顯示較高的肝臟CAT水平,相同濃度的丁香酚對(duì)腦丙二醛(MDA)水平具有更好的抑制作用。低溫對(duì)鯽魚的鎮(zhèn)定效果較慢,其麻醉程度較淺,與之相對(duì)的,其復(fù)蘇恢復(fù)時(shí)間也較短。冰溫儲(chǔ)藏的鯽魚乳酸濃度升高較快,并且一直保持在較高水平。低溫誘導(dǎo)休眠導(dǎo)致腦MDA積聚。腦MDA含量,肝臟CAT活力與20 h后鯽魚呼吸頻率正相關(guān),其中主要由腦MDA含量水平?jīng)Q定。6.應(yīng)用丁香酚及低溫誘導(dǎo)休眠對(duì)鯽魚成魚進(jìn)行離水儲(chǔ)藏,比較休眠方式及儲(chǔ)藏溫度對(duì)無(wú)水儲(chǔ)運(yùn)鯽魚的影響。不同休眠方式對(duì)復(fù)蘇時(shí)間沒(méi)有明顯影響(P = 0.86),即采用降溫休眠同丁香酚麻醉后離水儲(chǔ)藏的鯽魚其存活能力沒(méi)有區(qū)別。各項(xiàng)參數(shù)的優(yōu)勢(shì)比中,儲(chǔ)藏溫度影響最大,其值表示每升高1°℃鯽魚復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)一個(gè)等級(jí)的幾率增大1.42倍。冰溫儲(chǔ)藏較其他兩種儲(chǔ)藏溫度可以極大地提高鯽魚離水儲(chǔ)藏的存活能力。較高的儲(chǔ)藏溫度導(dǎo)致腦MDA含量升高,血清中乳酸含量及CAT活力升高。皮質(zhì)醇的水平升高。結(jié)果指出離水后對(duì)鯽魚的生理功能的保護(hù)可進(jìn)一步提高存活能力。鯽魚離水后正常生理功能的穩(wěn)定有助于提高其存活能力。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)用魚采集天津本地養(yǎng)殖鯽魚，體重５０邋ｇ左右，暫養(yǎng)２周后，禁食２４邋ｈ后，５０逡逑條幼魚以密度５條／１０邋Ｌ放置于１０個(gè)１０邋Ｌ玻璃水箱中，平均分為兩組分別放置于兩座逡逑電腦控溫冰溫冷庫(kù)中（冷庫(kù)溫度波動(dòng)為±0．２°Ｃ，圖３－１）。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)選取５條鯽魚作逡逑為初始值實(shí)驗(yàn)。由室溫２５°Ｃ分別采用每小時(shí)５°Ｃ，１°Ｃ速率進(jìn)行降溫至０°Ｃ，，采用溫度巡逡逑檢儀（ＭＸ１００，日本恒河產(chǎn)）與ＨＰｔ熱電阻（精度±０．邋１２°Ｃ）監(jiān)控水體溫度，降溫過(guò)程過(guò)逡逑慢時(shí)以冰塊調(diào)節(jié)。分別在２５°Ｃ、２０°Ｃ、１５°Ｃ、１０°Ｃ、５°Ｃ、０°Ｃ時(shí)各取５條鯽魚。使用逡逑ＭＳ－２２２麻醉，在冰上解剖。分離腦、肝胰臟、背部肌肉，凍于＿８０°Ｃ超低溫冰箱內(nèi)待測(cè)。逡逑血液采集使用５號(hào)針頭及注射器，采用心臟取血，使用肝素鈉抗凝小管收集后４°Ｃ待測(cè)。逡逑線粒體膜制備采用差速離心法：腦稱重后，使用ｐＨ邋＝邋７．４磷酸緩沖鹽溶液清洗，加入逡逑蔗糖提取液（0■邋２５邋Ｍ邋ｓｕｃｒｏｓｅ，邋３邋ｍＭ邋Ｔｒｉｓ－ＨＣ１邋（ｐＨ邋７．邋４），０■邋２９邋ｍｇ／Ｌ邋ＥＤＴＡ）破碎逡逑細(xì)胞，勻漿后，６００Ｘｇ離心取上清，７邋０００Ｘｇ離心取沉淀，在３４２ｍｇ／Ｌ同５４７邋ｍｇ／Ｌ蔗逡逑

３．邋２．邋３降溫速率對(duì)腦線粒體膜脂流動(dòng)性的影響逡逑Ｐ值大小與膜脂流動(dòng)性負(fù)相關(guān)，即較低的Ｐ值反映出膜脂流動(dòng)性升高。實(shí)驗(yàn)觀察到兩逡逑組鯽魚在降溫到１５°Ｃ左右時(shí)膜脂均流動(dòng)性上升（戶＜０．邋０５）（
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TS254.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2646227