本文關鍵詞：基于p38MAPK通路研究益氣活血法對糖尿病大鼠血管病變的作用機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察丹蛭降糖膠囊對糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)模型大鼠氧化抗氧化系統(tǒng)及血管組織的影響,著重基于p38絲裂原活化的蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinas,p38MAPK)信號傳導通路了解丹蛭降糖膠囊對DM血管病變的影響并闡述其機制。方法將104只大鼠適應性喂養(yǎng)1周后隨機分成2大組:正常組12只、高脂組92只,各組間體重無顯著性差異,明暗周期12/12h,自由覓食。實驗過程中,正常組飼料為普通大鼠飼料,高脂組飼料為專用高脂高糖飼料(其中含10%的豬油、20%的蔗糖、1%的膽固醇、0.5%的膽酸鈉)。4星期后,高脂組大鼠按30mg·kg-1體重的劑量腹腔注射鏈尿佐菌素(Streptozotocin,STZ),不合格者再依據(jù)25 mg·kg-1體重注射STZ。DM模型成功標志為,隨機血糖(random blood sugar,RBS)16.7mmol·L-1,共有77只符合診斷標準。重新將已成DM模型的大鼠隨機分為6組:模型組12只,丹蛭降糖膠囊(DZ)高組13只,DZ中組13只,DZ低組13只,吡格列酮(PT)組13只、丹蛭吡格列酮(DP)組13只。給藥:模型組與正常組予生理鹽水5 mL·kg-1·d-1灌胃。DT高組1.08g·kg-1·d-1,DT中組0.72g·kg-1·d-1,DT低組0.54g·kg-1·d-1(分別按成人公斤體重折算劑量的12,8,6倍給予丹蛭降糖膠囊);PT組大鼠依文獻給予吡格列酮膠囊量10 mg·kg-1·d-1。DP組用丹蛭降糖膠囊1.08 g·kg-1·d-1加上吡格列酮10 mg·kg-1·d-1懸液灌胃;于每天上午八點灌藥,共給藥8周。期間觀察及記錄各組大鼠一般精神狀況,飲水、進食、活動、毛色變化情況,每星期測量1次尾靜脈血糖,稱體重及記錄。實驗結束時,禁食12小時后,將所有實驗大鼠麻醉、腹主動脈采血,并剪取腹主動脈組織留樣備存,完善相應的檢測。結果實驗結束時共有19只大鼠死亡,各藥物組大鼠一般情況較模型組改善。其中DZ高,DZ中劑量組精神萎靡、皮損等一般情況較DT組及DP組良好。降糖作用中,DZ組與DP組效果相當。(1)大鼠氧化應激系統(tǒng)活性:灌胃8周后,和模型組相比,各藥物組DM模型大鼠血清過氧化脂質(Lipid peroxidation,LPO)、用鄰苯三酚自氧化法測定超氧化物歧化酶(Superoxide Dlismutase,SOD)、用改良的Hafeman法測定谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase,gsh-px)、用過硼酸鹽作底物滴定法測定過氧化氫酶(catalase,cat)、用3,3,-二氨基聯(lián)苯胺顯色法測定過氧化物酶(peroxidase,pod)活性均提高,其差異統(tǒng)計有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(2)westernblot法:模型組大鼠腹主動脈絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogenactivatedproteinkinasephosphatase-1,mkp-1)蛋白表達水平明顯下調,磷酸化p38絲裂原活化的蛋白激酶(p-p38mitogenactivatedproteinkinase,p-p38mapk)、絲裂原活化的蛋白激酶3/6(mitogenactivatedproteinkinasekinasse3/6,mkk3/6)、核轉錄因子camp反應元件結合蛋白1(campresponseelement-bingdingprotein1,creb1)、環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase2,cox2)、細胞間粘附分子-1(intercellularcelladhesionmolecule1,icam-1)蛋白表達水平明顯上調,和正常組比較,其差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。經(jīng)藥物治療后,各藥物組p-p38mapk、mkk3/6、creb1、cox2、icam-1蛋白表達水平下調,mkp-1蛋白表達水平上調,與模型組大鼠相比,其差異統(tǒng)計有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(3)免疫組化法:與正常組大鼠相比,大鼠腹主動脈p-p38mapk表達在模型組中表達顯著增強,和模型組大鼠相比,大鼠p38mapk的表達在藥物組中顯著下降,表達量由低到高按次序為pt組,dz高組,dp組,dz中組,dz低組。(4)rt-pcr檢測示:藥物治療后,各藥物組大鼠趨化蛋白因子-1(monocytechemoattractantprotein-1,mcp-1)mrna、抵抗素mrna的表達下降,與模型組大鼠比較,其差異有統(tǒng)計學意義(p0.01),其中,dz高、dz中組、pt組間大鼠mcp-1、抵抗素mrna表達水平未見明顯變化,無統(tǒng)計學意義。與模型組大鼠相比,氧化物酶體增殖物激活受體-γ(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor-γ,ppar-γ)統(tǒng)計,其差異無統(tǒng)計學意義;(5)透射電鏡圖像:模型組大鼠腹主動脈細胞內膜增厚情況顯著,管腔變窄,泡沫細胞顯量形成,提示dm模型血管病變較為成功。灌胃給藥8星期后,各藥物組圖像顯示內膜增厚,內彈性膜出現(xiàn)斷裂,線粒體腫脹,粗面內質網(wǎng)擴張等情況,與模型組比較得到一定改善,提示兩種藥物都能減輕dm大鼠腹主動脈血管細胞受損,其中dz高組改善最為明顯。(6)蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,he)染色可見:正常組:血管內膜結構清晰,表面光滑,內皮細胞形態(tài)規(guī)則,無脫落;模型組:內膜明顯增厚,表面粗糙,內皮細胞形態(tài)不規(guī)則,泡沫細胞堆積,中膜增厚,平滑肌細胞排列雜亂;與模型組相比,藥物組組織形態(tài)變化都有不同程度的減輕。結論益氣活血方丹蛭降糖膠囊能明顯改善DM模型大鼠精神狀態(tài),減輕皮損、多飲等癥狀,提示丹蛭降糖膠囊在防治、延緩DM大鼠血管病變方面相對吡格列酮有優(yōu)勢。丹蛭降糖膠囊可抑制DM模型大鼠制氧化應激損傷,調節(jié)或糾正氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡狀態(tài);模型組DM大鼠p38MAPK通路中相關蛋白的表達活性改變,提示p38 MAPK通路在DM血管病變形成過程中有密切關系;藥物丹蛭降糖膠囊灌胃后,DM模型大鼠p38MAPK通路相關蛋白的表達可得到較好的糾正恢復;同時,益氣活血法方藥丹蛭降糖膠囊可改善DM模型大鼠血管組織病理形態(tài),降低病變細胞泡l潭

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