【摘要】：目的:1.研究氣體全麻藥物地氟醚對小鼠中樞及外周腎臟、肝臟組織時鐘基因表達量的影響及其作用機制;2.研究靜脈全麻藥物丙泊酚對細胞時鐘基因整體生物鐘的影響;方法:1.用不同濃度(3%,4%,6%,7%,9%)的地氟醚麻醉C57BL/6J(C57)小鼠,通過翻正反射確定地氟醚的有效作用濃度。2.將C57小鼠分為空氣對照組和地氟醚實驗組,實驗組在ZT2時用前述確定的地氟醚濃度(7%)處理,對照組同時通入空氣,2小時后采用qPCR檢測各組小鼠下丘腦、腎臟和肝臟組織時鐘基因Per1、Per2、Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表達量的變化。3.提取待鑒定基因型小鼠的DNA,進行PCR鑒定。反應(yīng)產(chǎn)物加入瓊脂糖凝膠電泳檢測。4.將Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠分為空氣對照組和地氟醚實驗組,實驗組在ZT2時用前述確定的地氟醚濃度(7%)處理,對照組同時通入空氣,2小時后采用qPCR檢測各組小鼠下丘腦、腎臟和肝臟組織時鐘基因Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表達量的變化。5.將U2OS細胞的DMEM培養(yǎng)基更換為XM培養(yǎng)基,根據(jù)丙泊酚終濃度梯度(1.5μM、6μM、12μM、50μM),各皿分別加入對應(yīng)體積的丙泊酚,對照組加入等體積PBS溶液。放入Lumicycle光度測定儀記錄細胞中時鐘基因的長時生物鐘。結(jié)果:1.3%地氟醚處理后無小鼠達到翻正反射消失;4%、6%、7%、9%地氟醚處理后達到翻正反射消失的小鼠比例分別為16.7%、50%、100%和100%,因此確定實驗中使用地氟醚的作用濃度為7%。2.與對照組相比,7%地氟醚麻醉C57小鼠2小時后,下丘腦組織時鐘基因Per2的表達量顯著降低(P0.05),其余五個時鐘基因的表達量無顯著性改變(P0.05);腎臟組織中時鐘基因Per1的表達量顯著升高,時鐘基因Bmal1、Dbp的表達量顯著降低(P0.05),另外三個時鐘基因的表達量無顯著性改變(P0.05);肝臟組織時鐘基因Per1的表達量顯著升高(P0.05),其余五個時鐘基因的表達量無顯著性改變(P0.05)。3.所得條帶在440bp處表示為Per1~(-/-)小鼠,條帶在320bp處表示為Per2~(-/-)小鼠,在440bp和320bp處均有條帶表示為Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠,在416bp處有條帶表示為Per1~(+/+)小鼠,在388bp處有條帶表示為Per2~(+/+)小鼠,在416bp和388bp處均有條帶表示為Per1~(+/+)/Per2~(+/+)小鼠。將基因組在440bp和320bp處均有條帶的小鼠視為Per1~(-/-)/Per2~(-/-)純合子。4.與對照組相比,7%地氟醚麻醉Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠2小時后,下丘腦組織時鐘基因Bmal1、Clock、Dbp的表達量顯著降低(P0.05);肝臟組織和腎臟組織時鐘基因Cry1、Clock的表達量顯著降低(P0.05),Bmal1、Dbp的表達量無顯著性改變(P0.05)。5.相比于對照組,1.5μM丙泊酚導致細胞時鐘基因Per2的振幅增加,但丙泊酚處理濃度增加后,時鐘基因Per2的振幅降低,且降低程度具有濃度依賴性,而對照組和加藥組U2OS細胞時鐘基因Per2的節(jié)律周期均在22-23小時之間波動,無顯著性改變(P0.05)。結(jié)論:1.氣體麻醉藥地氟醚顯著影響小鼠中樞及外周組織的生物鐘,但不直接通過Per基因產(chǎn)生作用;2.靜脈麻醉藥物丙泊酚降低細胞中時鐘基因Per2的振幅。
【圖文】：

陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文 結(jié) 果地氟醚麻醉后小鼠翻正反射是否消失用于判斷小鼠是否達到全身麻醉水平。結(jié)3%地氟醚處理，無小鼠達到翻正反射消失狀態(tài)；4%地氟醚處理，達到翻正反小鼠比例為 16.7%；6%地氟醚處理，，達到翻正反射消失的小鼠比例為 50%；處理，達到翻正反射消失的小鼠比例為 100%；9%地氟醚處理，達到翻正反射鼠比例為 100%（圖 1）。即 7%及以上濃度地氟醚可完全達到小鼠的全身麻醉水%地氟醚是達到小鼠麻醉狀態(tài)的臨界作用濃度。

陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文基因 Per1、Per2、Dbp、Bmal1、Clock、Cry1 的表達量。結(jié)果顯示，相比對照組，7%地氟醚組 C57BL/6J 小鼠腎臟組織時鐘基因 Per1 的表達量顯著性升高，而時鐘基因Bmal1、Dbp 的表達量均顯著性降低（P＜0.05，圖 3A)。肝臟組織時鐘基因 Per1 的表達量顯著性升高（P＜0.01，圖 3B)。
【學位授予單位】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R614

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本文編號：2635512