發(fā)布時(shí)間：2019-02-15 21:51

【摘要】：研究目的： 1、觀察正常空白對(duì)照組、單純糖尿病組、糖尿病缺血性足部潰瘍組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組6組大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白的表達(dá)水平。 2、探討esRAGE基因轉(zhuǎn)染OECs進(jìn)行細(xì)胞移植的同時(shí)提高局部esRAGE水平對(duì)糖尿病缺血性足部潰瘍的治療作用。 方法： SD雄性大鼠60只，體重260-300g，隨機(jī)分為6組：正�？瞻讓�(duì)照組（N組）10只，，單純糖尿病組（DM組）10只；糖尿病缺血性足部潰瘍組（DFU組）10只；糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組（DFU+OECs組）10只；糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組（DFU+esRAGE+OECs組）10只；糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組（DFU+DMEM組）10只。實(shí)驗(yàn)組大鼠給予1％鏈脲佐菌素（50毫克/公斤）腹腔注射，對(duì)照組予以等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射�？崭寡�(FBG)≥16.7mmol/L視為糖尿病造模成功。一周后，每只大鼠以10％水合氯醛按3.0m/k g腹腔注射麻醉，沿左側(cè)腹股溝中點(diǎn)至膝內(nèi)側(cè)作約1.5cm長(zhǎng)的切口，分離出股動(dòng)脈及其分支并結(jié)扎，同時(shí)結(jié)扎乆動(dòng)脈。DFU+OECs組、DFU+esRAGE+OECs組分別進(jìn)行細(xì)胞移植，DFU+DMEM組用相同方法注射DMEM培養(yǎng)液作對(duì)照。沿股動(dòng)脈至乆動(dòng)脈走向于內(nèi)收肌至腓腸肌選取6個(gè)點(diǎn)，每隔2mm用麻醉針頭肌肉注射移植液體50uL，共0.3mL（細(xì)胞總數(shù)5×105個(gè)）。DFU+OECs組注射未轉(zhuǎn)染OECs，DFU+esRAGE+OECs組注射轉(zhuǎn)染后OECs，DFU+DMEM組注射DMEM培養(yǎng)液。細(xì)胞移植完畢后用剪刀在左側(cè)下肢足部背側(cè)造成穿透全層皮膚的傷口，剪下5mm×5mm面積的皮膚。移植后大鼠在同等條件下飼養(yǎng)4周，同時(shí)觀察傷口愈合情況。于第4周末頸椎脫臼處死大鼠，取細(xì)胞移植處肌肉組織，采用HE染色檢測(cè)毛細(xì)血管分布密度及內(nèi)皮細(xì)胞增生情況。通過使用TUNEL方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的表達(dá)。采用熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)組織RAGE、NF-κB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： 與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中NF-κB表達(dá)強(qiáng)度比較，DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織NF-κB表達(dá)減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與DFU+OECs組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠NF-κB表達(dá)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中RAGE表達(dá)強(qiáng)度比較，DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGE表達(dá)減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與DFU+OECs組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGE表達(dá)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中TGF-β1表達(dá)強(qiáng)度比較，DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織TGF-β1表達(dá)增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與DFU+OECs組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠TGF-β1表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 與DFU組、DFU+DMEM組、DFU+OECs組三組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠VEGF蛋白表達(dá)量稍有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細(xì)胞凋亡量比較，DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織凋亡減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細(xì)胞凋亡量較正常對(duì)照組及DM組大鼠增多(P0.01)；與DFU+OECs組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠細(xì)胞凋亡量減少且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）； 與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中RAGEmRNA表達(dá)強(qiáng)度比較，DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGEmRNA表達(dá)增強(qiáng)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與DFU+OECs組相比，DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGEmRNA表達(dá)量降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； 結(jié)論： 1、esRAGE基因修飾的OECs移植大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB蛋白的表達(dá)和RAGEmRNA含量水平、細(xì)胞凋亡量均低于糖尿病缺血性足部潰瘍大鼠。 2、esRAGE基因修飾的OECs移植大鼠肌肉組織TGF-β1、VEGF蛋白表達(dá)均高于糖尿病缺血性足部潰瘍大鼠。 3、.esRAGE基因修飾的OECs移植對(duì)糖尿病大鼠缺血性足部潰瘍的修復(fù)可能有促進(jìn)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 劉愛東;王s

本文編號(hào)：2423730