【摘要】：研究背景：腎移植已經(jīng)成為終末期腎病患者的主要治療手段之一。隨著強(qiáng)有效的移植免疫研究及新型免疫抑制劑藥物的持續(xù)開發(fā),使移植物的短期存活時(shí)間獲得了很大程度的提高,然而移植物長期存活率并沒有得到根本改善。影響移植腎存活的因素很多,主要分為移植前、后兩方面因素。移植前的因素主要包括腦死亡及器官缺血時(shí)間；移植后的因素中主要包括再灌注損傷、感染、排斥反應(yīng)、腎毒性等。而導(dǎo)致上述相矛盾性結(jié)果的主要原因可能是1.等待腎移植的患者數(shù)量逐年增加導(dǎo)致供體腎臟總體質(zhì)量下降；2.免疫抑制劑藥物的腎毒性；3.急性排斥反應(yīng)或者慢性排斥反應(yīng)發(fā)生的亞臨床癥狀的隱匿性增加等。其中急性排斥反應(yīng)是腎移植術(shù)后最為常見的并發(fā)癥。移植腎功能的喪失意味著受者需要再次接受移植治療,這無疑會(huì)加重器官極度短缺的現(xiàn)狀及浪費(fèi)更多的衛(wèi)生資源。所以如果移植前腎損傷因素相同的情況下,移植后腎損傷應(yīng)該降低到最低。因此,移植術(shù)后的實(shí)時(shí)監(jiān)測特別是急性排斥反應(yīng)的前期、及時(shí)監(jiān)測與發(fā)現(xiàn)對改善移植腎臟功能、延長患者的長期存活以及降低醫(yī)療費(fèi)用等能提供重要意義。目前腎移植術(shù)后腎功能的監(jiān)測方法主要是1.通過常規(guī)檢查血清肌酐值,但是血清肌酐值的變化已經(jīng)晚于移植腎功能相關(guān)蛋白的前期變化；2.細(xì)針穿刺活檢仍然是移植腎臟急性排斥反應(yīng)診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是,移植腎臟前期急性排斥反應(yīng)的病理變化不明顯,因此病理診斷落后于移植腎臟本身前期已經(jīng)發(fā)生的分子變化,這無疑會(huì)延誤患者的病情診斷及對受者術(shù)后有效性的干擾治療同時(shí)細(xì)針穿刺存在很多局限性,包括1.在短期內(nèi)不能反復(fù)進(jìn)行；2.可能導(dǎo)致移植腎臟急性損傷的發(fā)生；3.穿刺部位不準(zhǔn)確導(dǎo)致的誤診及損傷鄰近器官；4.同時(shí)不利于受者的動(dòng)態(tài)隨訪觀察。所以臨床醫(yī)生急需尋找一種無創(chuàng)、前期、安全、有效的方法來替代目前的檢查方法從而更準(zhǔn)確的判斷急性排斥反應(yīng)的發(fā)生并指導(dǎo)術(shù)后免疫抑制藥物的治療。針對這一需求,通過檢測受者血清及尿中相關(guān)標(biāo)記物己成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。無創(chuàng)性標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)可能彌補(bǔ)上述不足,提供對移植術(shù)后免疫反應(yīng)、組織損傷、免疫藥用治療等實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測。以往報(bào)道中大部分的研究都集中在細(xì)胞毒性T細(xì)胞的效應(yīng)蛋白及相關(guān)免疫分子上。然而,參與腎急性排斥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制還有待于進(jìn)一步闡明,可能還存在著其它因素的共同參與,比如炎癥、腎小管急性損傷、氧化應(yīng)激等等。本課題主要通過監(jiān)測同種異體腎移植大鼠模型中血清的NGAL, KIM-1, CRP, MDA以及sHLA-DR的變化,并試圖找出它們在腎移植大鼠中血清的表達(dá)與腎急性排斥反應(yīng)早期發(fā)生的相關(guān)性,從而對大鼠早期腎急性排斥反應(yīng)發(fā)生進(jìn)行預(yù)警作用。 而針對初學(xué)者而言如何快速、簡單、有效的建立大鼠腎急性排斥反應(yīng)模型對于今后整個(gè)實(shí)驗(yàn)的研究開展是至關(guān)重要的,也是整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中首要的。此外,選擇大鼠同種異體腎移植模型有許多優(yōu)點(diǎn)：它容易獲取,研究費(fèi)用低,便于管理,且可以進(jìn)行同源基因移植研究等。但是選擇大鼠同種異體腎移植模型也有不足,它表現(xiàn)為大鼠個(gè)體小,血管吻合難度大,一般需經(jīng)過至少3個(gè)月的顯微外科訓(xùn)練,限制了其研究應(yīng)用,尤其是對初學(xué)者而言面臨著更大挑戰(zhàn)。我們通過文獻(xiàn)的學(xué)習(xí)以及多次反復(fù)的訓(xùn)練改進(jìn),本課題還同時(shí)對大鼠同種異體腎移植模型方法進(jìn)行了改進(jìn)與評(píng)估,特別是供受體之間結(jié)合硬膜外導(dǎo)管內(nèi)支架技術(shù)進(jìn)行腎靜脈端端吻合,并與目前推薦的腎靜脈吻合方法進(jìn)行比較。我們建立了一種穩(wěn)定的、簡單、有效的大鼠腎移植模型,尤其是初學(xué)者容易掌握學(xué)習(xí)。 目的： 1、尋找一種穩(wěn)定的、簡單、有效的大鼠同種異體腎移植模型,尤其適合初學(xué)者掌握學(xué)習(xí),為大鼠腎移植急性排斥反應(yīng)的研究開展提供首要的條件。 2、探討同種異體腎移植大鼠模型中血清的NGAL、KIM-1、CRP、MDA以及sHLA-DR的變化,從而尋找出它們與大鼠早期腎急性排斥反應(yīng)發(fā)生預(yù)警作用的關(guān)系。為大鼠早期腎急性排斥反應(yīng)的監(jiān)測及早期防治提供依據(jù)。 方法： 1.正常SD雄性大鼠為供體,Wistar雄性大鼠為受體,建立穩(wěn)定的同種異體腎移植大鼠模型。。腎動(dòng)脈采用端、側(cè)連續(xù)縫合,腎靜脈采用端端連續(xù)與間斷縫合,輸尿管采用膀胱瓣連續(xù)縫合,進(jìn)行供、受體左側(cè)同種異體大鼠原位腎移植。對大鼠同種異體腎移植術(shù)后第3、4個(gè)月連續(xù)進(jìn)行45次手術(shù)進(jìn)行評(píng)估。 2.雄性Wistar大鼠分別作為供者和受者,進(jìn)行大鼠同種異體原位腎移植模型的建立。我們采用腎靜脈內(nèi)置入硬膜外導(dǎo)管作為內(nèi)支架進(jìn)行端端吻合的方法,并進(jìn)行方法改進(jìn),同時(shí)記錄同種異體腎移植大鼠移植后的生存率、熱缺血時(shí)間、腎靜脈吻合時(shí)間以及術(shù)中、術(shù)后的并發(fā)癥進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,并與目前多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的大鼠供、受體之間腎靜脈吻合方法進(jìn)行比較。并由兩個(gè)初學(xué)者參與實(shí)驗(yàn),每個(gè)初學(xué)者分別采用兩種方法連續(xù)進(jìn)行30臺(tái)實(shí)驗(yàn)。 3.分別采用Brown-Norway (BN)原位腎移植到Lewis大鼠中作為實(shí)驗(yàn)組以及Lewis大鼠原位腎移植到Lewis大鼠中作為對照組。并分別在同種異體腎移植術(shù)后第3、5、7天處死大鼠,每個(gè)亞組共重復(fù)五只,同時(shí)留取各組大鼠的血清標(biāo)本用于檢測血清NGAL、KIM-1、CRP、MDA以及sHLA-DR的表達(dá)水平以及肌酐值,同時(shí)對移植物進(jìn)行組織病理學(xué)切片染色。此外,我們還對移植物的NGAL蛋白進(jìn)行評(píng)估分析。 結(jié)果： 1.按照文獻(xiàn)報(bào)道大鼠同種異體腎移植術(shù)后存活3天以上認(rèn)為腎移植造模成功。統(tǒng)計(jì)第3、4個(gè)月造模練習(xí)結(jié)果,兩個(gè)月總共連續(xù)移植45次供受體手術(shù)。其中存活超過3天以上的受體為52只,成功率達(dá)86.7%；術(shù)后3天內(nèi)死亡的受體數(shù)量為6只,分別為麻醉意外1只、低血容量1只、血栓2只、低體溫2只。受體腎動(dòng)脈吻合時(shí)間(15±1.5min),腎靜脈吻合時(shí)間(15±1min),總時(shí)間(30±2min)。 2.與目前推薦的大鼠腎靜脈吻合術(shù)相比較,初學(xué)者采用硬膜外導(dǎo)管的改良技術(shù)進(jìn)行大鼠同種異體原位腎移植建�？梢垣@得較短的學(xué)習(xí)曲線。同時(shí),兩種大鼠同種異體原位腎移植靜脈吻合術(shù)的術(shù)中并發(fā)癥及術(shù)后并發(fā)癥也進(jìn)行評(píng)估分析。采用目前推薦的大鼠腎移植方法中,兩名初學(xué)者出現(xiàn)的并發(fā)癥分別為靜脈狹窄6例,血栓形成9例,吻合口滲漏7例,血管痙攣4例,腎靜脈損傷3例。而采用改良后的技術(shù)可以很好的減少上述并發(fā)癥的發(fā)生率。兩名初學(xué)者采用改良后的技術(shù)進(jìn)行大鼠腎移植是發(fā)生的并發(fā)癥概率分別為腎靜脈狹窄0例,血栓形成3例,吻合口滲漏0,血管痙攣3例和腎靜脈血管1例。初學(xué)者采用兩種方法進(jìn)行的大鼠腎移植中腎靜脈吻合并發(fā)癥的發(fā)生率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。 3.在對照組中腎移植術(shù)后血清中NGAL、KIM-1水平第5、7天的值與第3天相比較,有所降低,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但是在實(shí)驗(yàn)組中,大鼠同種異體腎移植術(shù)后血清中第3、5、7天NGAL和KIM-1水平較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),并且在實(shí)驗(yàn)組第3、5、7天中它們的血清水平組內(nèi)比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 大鼠同種異體腎移植術(shù)后對照組中血清CRP及MDA表達(dá)水平在腎移植術(shù)后第3、5、7天之間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而在實(shí)驗(yàn)組中大鼠同種異體腎移植術(shù)后血清中第3、5、7天CRP及MDA表達(dá)水平較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。此外,在本研究中,大鼠同種異體腎移植術(shù)后實(shí)驗(yàn)組與對照組中血清HLA-DR水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但是它的血清表達(dá)有一定的波動(dòng)性。 結(jié)論： 1.我們推薦初學(xué)者進(jìn)行大鼠同種異體腎移植模型的建立組合是：腎動(dòng)脈采用腹主動(dòng)脈套囊端、側(cè)連續(xù)縫合,腎靜脈結(jié)合硬膜外導(dǎo)管以及端、端連續(xù)及間斷縫合,輸尿管采用膀胱瓣連續(xù)縫合,進(jìn)行供、受體左側(cè)原位大鼠腎移植。它是一種穩(wěn)定的、簡單的、有效的大鼠腎移植模型,初學(xué)者容易掌握學(xué)習(xí)。 2.通過供受體之間的腎靜脈管腔內(nèi)插入3mm長度硬膜外導(dǎo)管充當(dāng)腎靜脈內(nèi)支架管這一技術(shù)是一種簡單的、可靠的、有效的大鼠同種異體腎移植模型。它可以有效的縮短初學(xué)者對大鼠同種異體原位腎移植的學(xué)習(xí)曲線。此外,腎靜脈管腔內(nèi)插入3mm長度硬膜外導(dǎo)管充當(dāng)靜脈支架管的技術(shù)還可能應(yīng)用到其他動(dòng)物器官移植模型的腎靜脈吻合。 3.通過檢測大鼠同種異體腎移植模型血清中NGAL、KIM-1、CRP和MDA含量的表達(dá)水平可能對大鼠同種異體移植模型中前期腎急性排斥反應(yīng)進(jìn)行提前預(yù)警。它們在血清中的異常表達(dá)要早于大鼠同種異體腎移植急性排斥反應(yīng)組織病理學(xué)上的變化及其肌酐的變化。從而可以讓我們在早期就可以對大鼠同種異體急性排斥反應(yīng)的發(fā)生進(jìn)行提前干預(yù),進(jìn)一步減少急性排斥反應(yīng)帶給大鼠同種異體腎移植物的損害,從而增加大鼠同種異體移植腎的存活率及其早期預(yù)防移植術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R699.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2395058