【摘要】：目的：建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH subarachnoid hemorrhage）后早期腦損傷模型，并研究tBHQ對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷是否具有保護(hù)作用。 方法：48只正常的健康、雄性SD大鼠，隨機(jī)分成對(duì)照組，SAH組，安慰劑組以及tBHQ處理組，抽取大鼠股動(dòng)脈自體血，并注入視交叉池，以建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。tBHQ通過(guò)胃內(nèi)灌注給藥，劑量為12.5mg/kg，分別在SAH后2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)給藥，并在蛛網(wǎng)膜下腔出血后48處死，取大鼠血凝塊周圍的皮層腦組織（額顳底）做標(biāo)本，測(cè)定水腫指數(shù)和血腦屏障的變化。探討tBHQ對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后的早期腦損傷是否具有保護(hù)作用。 結(jié)果：48小時(shí)后測(cè)定的SAH組的水腫百分?jǐn)?shù)達(dá)82.50%，測(cè)定的腦組織EB含量為21.9ng/mg；而tBHQ治療后，tBHQ組的腦水腫百分?jǐn)?shù)為80.60%，腦組織的EB含量為13.6ng/mg；SAH與安慰劑組則無(wú)明顯差異。 結(jié)論：1.通過(guò)建立SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，可以監(jiān)測(cè)到SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后48小時(shí)后腦組織水腫指數(shù)明顯增加，血腦屏障明顯破壞，說(shuō)明SD大鼠在蛛網(wǎng)膜下腔出血后48小時(shí)存在早期腦損傷。2.tBHQ治療后，能顯著降低蛛網(wǎng)膜下腔出血后的腦水腫指數(shù)，改善血腦屏障。提示tBHQ對(duì)SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后的早期腦損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。 目的：建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH subarachnoid hemorrhage）模型，研究tBHQ對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響。 方法：40只成年健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為四組：正常組、SAH組、安慰劑組和tBHQ治療組，方法同前。觀察SD大鼠行為功能變化，進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，在SAH后48小時(shí)開始進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)測(cè)試大鼠的認(rèn)知功能。 結(jié)果：1.與對(duì)照組相比，SAH組大鼠的神經(jīng)認(rèn)知功能、食欲及活動(dòng)能力明顯下降（P0.01）；tBHQ組與安慰劑組相比，神經(jīng)認(rèn)知功能、食欲及活動(dòng)能力明顯增強(qiáng)（P0.01）；SAH組和安慰劑組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。2.在Morris水迷宮試驗(yàn)中，SAH組及安慰劑組比對(duì)照組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能明顯下降（P0.01），而SAH組及安慰劑組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；tBHQ治療后，大鼠的學(xué)習(xí)認(rèn)知能力顯著增強(qiáng)（P0.01）。 結(jié)論：SAH后大鼠的認(rèn)知功能明顯下降，tBHQ能改善SAH后大鼠的認(rèn)知功能。 目的：研究SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后顳底皮層中Keap1/Nrf2/ARE通路及其下游的表達(dá)產(chǎn)物的變化以及tBHQ對(duì)此傳導(dǎo)通路的影響，進(jìn)一步探討tBHQ對(duì)SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：參照第二部分。SAH后48小時(shí)后再次麻醉大鼠，取顳底皮層組織做標(biāo)本，采用TUNEL和FJB技術(shù)測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞凋亡、壞死指數(shù)；采用Western blot法測(cè)定Keap1、Nrf2、HO-1的表達(dá)情況；EMSA法測(cè)定Nrf2的結(jié)合活性；采用免疫組化法檢測(cè)Keap1、Nrf2、HO-1的表達(dá)；RT-PCR測(cè)定HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表達(dá)；酶活性檢測(cè)NQO1、GST-α1、MDA、SOD和GSH-Px的水平。 結(jié)果：TUNEL和FJB測(cè)定的神經(jīng)細(xì)胞凋亡、壞死指數(shù)顯示：對(duì)照組中神經(jīng)細(xì)胞存在凋亡、壞死，與對(duì)照組相比，SAH組中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、壞死指數(shù)明顯升高（P0.01）；SAH組與安慰劑組相比較，無(wú)明顯差異（P0.05）；tBHQ治療組中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、壞死指數(shù)明顯低于SAH與安慰劑組（P0.01）。Western blot法測(cè)定結(jié)果顯示對(duì)照組中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表達(dá)較弱；與對(duì)照組相比，SAH組中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的水平明顯增高（P0.05）；SAH組與安慰劑組相比，則無(wú)明顯差異（P0.05）；而tBHQ組中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表達(dá)水平比SAH和安慰劑組進(jìn)一步增高（P0.05）。EMSA結(jié)果顯示：Nrf2的結(jié)合活性在對(duì)照組中較低；與對(duì)照組相比，Nrf2的結(jié)合活性在SAH組中明顯增高（P0.05）；安慰劑組與SAH組相比無(wú)明顯差別（P0.05）；tBHQ治療后，Nrf2的結(jié)合活性比SAH組進(jìn)一步增高（P0.05）。免疫組化結(jié)果顯示對(duì)照組的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的陽(yáng)性率（細(xì)胞漿棕黃色染色表示陽(yáng)性）較低；與對(duì)照組相比，SAH組中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的陽(yáng)性率顯著增高（P0.05）；SAH組與安慰劑組相比，無(wú)明顯差異（P0.05）；而tBHQ治療組中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的陽(yáng)性率相比SAH組和安慰劑組進(jìn)一步增高（P0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示對(duì)照組中HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表達(dá)水平較弱；SAH組與對(duì)照組相比，HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表達(dá)水平明顯升高（P0.05）；SAH組與安慰劑組相比較，無(wú)明顯差異（P0.05）；而tBHQ治療組中的HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表達(dá)水平明顯高于SAH組（P0.05）。酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示對(duì)照組中NQO1和GST-α1的酶活性較低；SAH組和安慰劑組中NQO1和GST-α1的酶活性則顯著高于對(duì)照組（P0.05）；SAH組與安慰劑組無(wú)明顯差異（P0.05）；tBHQ組中NQO1和GST-α1的酶活性明顯高于SAH組（P0.05）。與對(duì)照組相比，SAH組中MDA的水平明顯增高（P0.05），而SOD和GSH-Px的水平則顯著下降（P0.05）；SAH組與安慰劑組無(wú)明顯差異（P0.05）；在tBHQ治療組中，，MDA水平比SAH組顯著降低（P0.05），而SOD和GSH-Px的水平比SAH組明顯增高(SOD, P 0.01; GSH-Px, P 0.05)。 結(jié)論：1.SAH后早期能激活Keap1/Nrf2/ARE傳導(dǎo)通路，并激活此通路下游的表達(dá)產(chǎn)物從而起到神經(jīng)保護(hù)作用；2.tBHQ能進(jìn)一步激活Keap1/Nrf2/ARE傳導(dǎo)通路，從而對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后的早期腦損傷起到神經(jīng)保護(hù)作用。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.35

【參考文獻(xiàn)】

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1 任會(huì)榮,錢令嘉;線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞色素C與細(xì)胞凋亡[J];生命的化學(xué);2002年04期

2 劉玲;NF-κB的活化與神經(jīng)細(xì)胞凋亡[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2003年06期

本文編號(hào)：2388106