【摘要】：背景salusins是由編碼人類(lèi)扭轉(zhuǎn)應(yīng)力障礙基因(torison dystonia, TOR2A)的mRNA選擇性剪接(alternative splicing)的產(chǎn)物。salusins包括兩個(gè)活性單體：含有28個(gè)氨基酸的salusin-α和含有20個(gè)氨基酸的salusin-β。salusin-β對(duì)心室肌表現(xiàn)為負(fù)性肌力作用。Salusin-β樣免疫陽(yáng)性細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)存在于視交叉、視上核和室旁核(paraventricular nucleus, PVN),在垂體后葉也發(fā)現(xiàn)了salusin-β陽(yáng)性神經(jīng)纖維的末稍。我們前期的實(shí)驗(yàn)研究表明：在兩腎一夾(two-kidney, one-clip,2K1C)高血壓大鼠的PVN微量注射salusin-β可以增強(qiáng)腎交感神經(jīng)活動(dòng)(renal sympathetic nerve activity, RSNA)、平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure, MAP)和心率(heart rate, HR),其機(jī)制與循環(huán)和延髓頭端腹外側(cè)部(rostral ventrolateral medulla, RVLM)的精氨酸加壓素(arginine vasopressin, AVP)有關(guān)。RVLM涉及多種類(lèi)型的高血壓模型的血壓升高的機(jī)制。在RVLM微量注射AVP的V1受體拮抗劑(dTyr(CH2)5(Me)AVP, AAVP)可以阻斷PVN中應(yīng)用salusin-β對(duì)RSNA和HR的效應(yīng),但是僅僅減弱了salusin-β對(duì)MAP的效應(yīng)。然而,至今還不清楚RVLM中是否同樣有salusin-β的表達(dá),RVLM中的salusin-β是否參與了高血壓大鼠心血管活動(dòng)的調(diào)節(jié)。因此本研究采用兩腎一夾的方法制作腎血管性高血壓大鼠模型,探討高血壓大鼠的RVLM中的salusin-β是否對(duì)交感神經(jīng)活動(dòng)和血壓起調(diào)控作用及其下游分子機(jī)制。目的1探討salusin-β是否在大鼠的RVLM中表達(dá)。2探討高血壓大鼠RVLM中的salusin-β是否參與血壓和交感神經(jīng)活動(dòng)的調(diào)控。3探討高血壓大鼠的RVLM中的salusin-β調(diào)控血壓和交感神經(jīng)活動(dòng)的下游分子機(jī)制。方法腎血管性高血壓大鼠的模型采用兩腎一夾的方法制作,對(duì)照組大鼠實(shí)施同樣的手術(shù),只是不放U形夾。以尾動(dòng)脈收縮壓大于或等于160 mmHg作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。用免疫組織化學(xué)的方法研究RVLM中salusin-β陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)；用免疫熒光雙染的細(xì)胞共定位技術(shù)確定RVLM中salusin-β表達(dá)的細(xì)胞類(lèi)型；急性實(shí)驗(yàn)在2K1C手術(shù)或者假手術(shù)實(shí)施四周后在烏拉坦和a-氯醛糖的麻醉下進(jìn)行。在機(jī)械通氣的情況下,采用PowerLab信號(hào)采集系統(tǒng)記錄RSNA, MAP和HR；用大鼠腦立體定位儀定位以及雙側(cè)RVLM微量注射藥物；用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定RVLM中salusin-β的含量,以及RVLM和血漿中AVP的含量；用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定RVLM中NAD(P)H氧化酶活性和超氧陰離子水平；用二氫乙啶(dihydroethidium, DHE)熒光探針原位撿測(cè)salusin-β對(duì)RVLM部位的超氧陰離子生成的影響。結(jié)果1.RVLM中有salusin-β樣陽(yáng)性細(xì)胞的分布,與Sham組相比,2K1C大鼠的salusin-β樣陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。2.用ELISA法測(cè)定RVLM中salusin-β的含量,2K1C組也高于Sham組。3.用免疫熒光雙染的細(xì)胞共定位技術(shù)檢測(cè)到RVLM中的salusin-β的熒光與神經(jīng)元特異性標(biāo)記物神經(jīng)元核蛋白(neuronal nuclear antigen, NeuN)的熒光重疊。4.在Sham組大鼠的RVLM微量注射不同劑量的salusin-β對(duì)血壓和交感神經(jīng)活動(dòng)無(wú)明顯影響。但在2K1C大鼠則可引起劑量依賴(lài)性的RSNA增強(qiáng)、MAP升高和HR加快。5. Sham組大鼠的RVLM微量注射anti-salusin-β IgG (SIgG)對(duì)基礎(chǔ)的RSNA、MAP無(wú)明顯影響,但在2K1C大鼠的RVLM微量注射SIgG減弱基礎(chǔ)的RSNA、降低MAP。在2K1C大鼠的RVLM微量注射CIgG預(yù)處理對(duì)salusin-β對(duì)RSNA、MAP和HR的效應(yīng)無(wú)明顯影響,但在RVLM微量注射SIgG預(yù)處理幾乎可以完全阻斷salusin-β 對(duì) RSNA、MAP和HR的效應(yīng),但是CIgG卻無(wú)此效應(yīng)。鑒于salusin-β和SIgG在Sham組大鼠均無(wú)作用,因此,接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)僅僅在2K1C大鼠上進(jìn)行。6. RVLM微量注射超氧陰離子清除劑PEG-SOD或tempol或NAD(P)H氧化酶抑制劑apocynin可以減弱基礎(chǔ)的RSNA、降低MAP和減慢HR,并且可以阻斷salusin-β增強(qiáng)RSNA.升高M(jìn)AP和加快HR的效應(yīng)。7. RVLM微量注射salusin-β增高2K1C大鼠RVLM中超氧陰離子水平,增強(qiáng)NAD(P)H氧化酶的活性,并且這種效應(yīng)可以被SIgG預(yù)處理所阻斷。微量注射SIgG有使超氧陰離子水平降低、NAD(P)H氧化酶活性減弱的趨勢(shì),但還沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。8.用DHE探針原位檢測(cè)salusin-β對(duì)超氧陰離子生成的影響發(fā)現(xiàn)：2K1C大鼠的RVLM微量注射salusin-β與salil e相比,salusin-β明顯增加RVLM區(qū)域的熒光密度。9.RVLM微量注射AAVP對(duì)基礎(chǔ)的R SNA、MAP和HR幾乎無(wú)影響也不能阻斷salusin-β在RVLM的效應(yīng)。10.靜脈給予AAVP可降低基礎(chǔ)的RSNA、MAP和HR,但是對(duì)RVLM 微量注射salusin-β的效應(yīng)卻無(wú)影響。11.與saline相比,RVLM微量注射salusin-β對(duì)血漿和RVLM中AVP的水平幾乎無(wú)影響；同樣的,與CIgG相比,RVLM微量注射SIgG對(duì)血漿和RVLM中AVP的水平幾乎無(wú)影響。結(jié)論：與Sham組大鼠相比,2K1C大鼠RVLM中的salusin-β陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)目和含量明顯增多；在Sham組大鼠的RVLM應(yīng)用salusin-β對(duì)血壓和交感神經(jīng)活動(dòng)無(wú)顯著影響,在2K1C大鼠的RVLM應(yīng)用salusin-β可增強(qiáng)交感神經(jīng)活動(dòng)、升高血壓并且加快心率；其效應(yīng)是由NAD(P)H氧化酶源性的超氧陰離子介導(dǎo)的而非循環(huán)或RVLM中的AVP或其V1受體介導(dǎo)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1

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本文編號(hào)：2293119