【摘要】：花椒可以藥食兩用,不僅是實用的中草藥,還是倍受人民大眾喜歡的重要食用型香料,被譽為中國“八大調(diào)味料”之一�；ń芳捌涮崛∥锞哂形⑷醵拘�,能對胃癌、肺癌等細胞周期產(chǎn)生阻滯,具有鎮(zhèn)痛,止疼等功效,還具有抗氧化,降低人體內(nèi)脂質(zhì)含量等廣泛、優(yōu)良的生物學(xué)功效,花椒以其天然、低毒、高效而備受關(guān)注。花椒麻素是花椒中一類獨特的生物活性成分,具有抗炎鎮(zhèn)痛、麻醉、殺蟲、除皺、調(diào)節(jié)胃腸道系統(tǒng)等功能,可應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品行業(yè)。但是,目前關(guān)于花椒麻素對肝細胞的藥用作用及效果的研究深入不夠,尤其是作用機制尚不清楚。因此,本研究以HepG2細胞為載體開展了花椒麻素對肝細胞生理功效及機理的探索。研究的內(nèi)容分為三個部分,主要研究結(jié)果如下： 1、研究花椒麻素抗氧化功效。采用體外抗氧化實驗,檢測不同劑量花椒麻素的還原能力,FRAP總抗氧化能力,對羥自由基和DPPH自由基的清除作用；以人肝癌細胞HepG2為實驗?zāi)Ｐ?花椒麻素作用HepG2細胞24h,研究細胞內(nèi)生理特性下,細胞內(nèi)SOD活力和MDA含量的變化。結(jié)果表明：花椒麻素具有一定的還原力、抗氧化力,呈現(xiàn)濃度劑量關(guān)系(p0.05)；對DPPH、羥自由基的清除率作用稍弱。Fe還原力和FRAP法測得的花椒麻素抗氧化能力的相關(guān)性最高(p0.01),Fe還原力與.OH的相關(guān)性最低。隨著藥物濃度增加,SOD活力是呈先下降隨后上升的趨勢,差異顯著(p0.05)；花椒麻素濃度達到50μg/mL后,MDA含量開始下降。總體上說明花椒麻素是一類潛在的抗氧化物質(zhì),但在清除特異自由基方面能力不強。 2、研究花椒麻素抗腫瘤功效,誘導(dǎo)肝癌HepG2細胞凋亡。用MTT法檢測不同劑量的花椒麻素對HepG2細胞增殖活性的影響,然后進一步用倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察細胞形態(tài)變化,流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期變化,DAPI核染、線粒體膜電位變化,單細胞凝膠電泳,RT-PCR以及RT-qPCR檢測P53、Caspase-3基因的表達以及Western blot檢測P53n Caspase-3蛋白的表達。結(jié)果表明：花椒麻素對HepG2細胞抑制率明顯(p0.05),且抑制作用呈濃度和時間依賴性；100μg/mL花椒麻素作用HepG2細胞后,電子掃描電鏡觀察到細胞凋亡現(xiàn)象明顯；同時FCM的分析結(jié)果亦可見細胞出現(xiàn)凋亡峰,產(chǎn)生S期阻滯；呈典型的凋亡彗星尾形狀,線粒體膜電位下降；RT-PCR和Westernblot結(jié)果表明HepG2細胞內(nèi)的P53、Caspase-3基因和蛋白的表達均有明顯的上調(diào)趨勢(p0.05)。花椒麻素引起的形態(tài)學(xué)上的細胞凋亡是由于相應(yīng)分子所引起,即控制凋亡的分子通路觸發(fā)的結(jié)果。 3、研究花椒麻素降膽固醇生理功效。肝臟是膽固醇代謝的主要器官。選用肝癌HepG2細胞作為研究對象,在高膽固醇模型中探討不同劑量的花椒麻素對細胞降膽固醇效果的影響,以及膽固醇代謝相關(guān)基因表達的作用機理和[Ca2+]i影響效果。以特異性拮抗劑TRPV1拮抗劑和TRPA1拮抗劑)作為干預(yù)手段研究TRPV1受體和TRPA1受體在花椒麻素(激動劑)影響機體膽固醇代謝環(huán)節(jié)中的作用。結(jié)果表明：花椒麻素處理24h可呈劑量依賴性地降低HepG2細胞和培養(yǎng)基中的總膽固醇,增加培養(yǎng)基中的總膽汁酸含量,其中20μg/mL的花椒麻素效果較好。花椒麻素降低肝細胞中膽固醇可能的機制是：低劑量的花椒麻素主要通過下調(diào)HMG-CoA還原酶的表達,減少肝臟中內(nèi)源膽固醇的合成；中、高劑量的花椒麻素不僅下調(diào)HMG-CoA還原酶的表達,還能上調(diào)CYP7A1的表達,促進膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。TRPV1特異性拮抗劑和TRPAl拮抗劑能阻斷花椒麻素對膽固醇代謝相關(guān)基因表達的影響,故此可推斷花椒麻素可能是通過同時激活TRPV1和TRPA1受體調(diào)節(jié)膽固醇代謝的相關(guān)基因。
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【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R285;R273

【參考文獻】

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本文編號：2285125