【摘要】：花椒可以藥食兩用,不僅是實(shí)用的中草藥,還是倍受人民大眾喜歡的重要食用型香料,被譽(yù)為中國“八大調(diào)味料”之一�；ń芳捌涮崛∥锞哂形⑷醵拘�,能對(duì)胃癌、肺癌等細(xì)胞周期產(chǎn)生阻滯,具有鎮(zhèn)痛,止疼等功效,還具有抗氧化,降低人體內(nèi)脂質(zhì)含量等廣泛、優(yōu)良的生物學(xué)功效,花椒以其天然、低毒、高效而備受關(guān)注�；ń仿樗厥腔ń分幸活惇�(dú)特的生物活性成分,具有抗炎鎮(zhèn)痛、麻醉、殺蟲、除皺、調(diào)節(jié)胃腸道系統(tǒng)等功能,可應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品行業(yè)。但是,目前關(guān)于花椒麻素對(duì)肝細(xì)胞的藥用作用及效果的研究深入不夠,尤其是作用機(jī)制尚不清楚。因此,本研究以HepG2細(xì)胞為載體開展了花椒麻素對(duì)肝細(xì)胞生理功效及機(jī)理的探索。研究的內(nèi)容分為三個(gè)部分,主要研究結(jié)果如下： 1、研究花椒麻素抗氧化功效。采用體外抗氧化實(shí)驗(yàn),檢測(cè)不同劑量花椒麻素的還原能力,FRAP總抗氧化能力,對(duì)羥自由基和DPPH自由基的清除作用；以人肝癌細(xì)胞HepG2為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?花椒麻素作用HepG2細(xì)胞24h,研究細(xì)胞內(nèi)生理特性下,細(xì)胞內(nèi)SOD活力和MDA含量的變化。結(jié)果表明：花椒麻素具有一定的還原力、抗氧化力,呈現(xiàn)濃度劑量關(guān)系(p0.05)；對(duì)DPPH、羥自由基的清除率作用稍弱。Fe還原力和FRAP法測(cè)得的花椒麻素抗氧化能力的相關(guān)性最高(p0.01),Fe還原力與.OH的相關(guān)性最低。隨著藥物濃度增加,SOD活力是呈先下降隨后上升的趨勢(shì),差異顯著(p0.05)；花椒麻素濃度達(dá)到50μg/mL后,MDA含量開始下降�？傮w上說明花椒麻素是一類潛在的抗氧化物質(zhì),但在清除特異自由基方面能力不強(qiáng)。 2、研究花椒麻素抗腫瘤功效,誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡。用MTT法檢測(cè)不同劑量的花椒麻素對(duì)HepG2細(xì)胞增殖活性的影響,然后進(jìn)一步用倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期變化,DAPI核染、線粒體膜電位變化,單細(xì)胞凝膠電泳,RT-PCR以及RT-qPCR檢測(cè)P53、Caspase-3基因的表達(dá)以及Western blot檢測(cè)P53n Caspase-3蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明：花椒麻素對(duì)HepG2細(xì)胞抑制率明顯(p0.05),且抑制作用呈濃度和時(shí)間依賴性；100μg/mL花椒麻素作用HepG2細(xì)胞后,電子掃描電鏡觀察到細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯；同時(shí)FCM的分析結(jié)果亦可見細(xì)胞出現(xiàn)凋亡峰,產(chǎn)生S期阻滯；呈典型的凋亡彗星尾形狀,線粒體膜電位下降；RT-PCR和Westernblot結(jié)果表明HepG2細(xì)胞內(nèi)的P53、Caspase-3基因和蛋白的表達(dá)均有明顯的上調(diào)趨勢(shì)(p0.05)�；ń仿樗匾鸬男螒B(tài)學(xué)上的細(xì)胞凋亡是由于相應(yīng)分子所引起,即控制凋亡的分子通路觸發(fā)的結(jié)果。 3、研究花椒麻素降膽固醇生理功效。肝臟是膽固醇代謝的主要器官。選用肝癌HepG2細(xì)胞作為研究對(duì)象,在高膽固醇模型中探討不同劑量的花椒麻素對(duì)細(xì)胞降膽固醇效果的影響,以及膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的作用機(jī)理和[Ca2+]i影響效果。以特異性拮抗劑TRPV1拮抗劑和TRPA1拮抗劑)作為干預(yù)手段研究TRPV1受體和TRPA1受體在花椒麻素(激動(dòng)劑)影響機(jī)體膽固醇代謝環(huán)節(jié)中的作用。結(jié)果表明：花椒麻素處理24h可呈劑量依賴性地降低HepG2細(xì)胞和培養(yǎng)基中的總膽固醇,增加培養(yǎng)基中的總膽汁酸含量,其中20μg/mL的花椒麻素效果較好�；ń仿樗亟档透渭�(xì)胞中膽固醇可能的機(jī)制是：低劑量的花椒麻素主要通過下調(diào)HMG-CoA還原酶的表達(dá),減少肝臟中內(nèi)源膽固醇的合成；中、高劑量的花椒麻素不僅下調(diào)HMG-CoA還原酶的表達(dá),還能上調(diào)CYP7A1的表達(dá),促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。TRPV1特異性拮抗劑和TRPAl拮抗劑能阻斷花椒麻素對(duì)膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響,故此可推斷花椒麻素可能是通過同時(shí)激活TRPV1和TRPA1受體調(diào)節(jié)膽固醇代謝的相關(guān)基因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285;R273

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2285125