本文選題：吡格列酮 + 糖尿病腎病�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:1.研究不同劑量鹽酸吡格列酮(PIO)對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠腎組織nephrin表達水平的影響;2.進一步觀察PIO對2型糖尿病患者尿nephrin排泄的影響,了解PIO保護糖尿病腎損害的作用并探討其機制。方法:1.動物實驗部分:將健康清潔級雄性大鼠(n=50)隨機分為正常對照組(NC組)和實驗組。NC組8只,實驗組42只。一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,48-72 h后空腹采大鼠尾外周血,血糖≥16.7mmol/L并出現(xiàn)多尿多飲等表現(xiàn)者即造模成功。造模成功的實驗組隨機分為4組:糖尿病模型對照組(DM組,n=8)和3組PIO干預組(分別為DR1,DR2,DR3組,PIO干預劑量分別為:10、20、30 mg/kg/d,各組n=8)。造模成功后第7天即0周,于0,4,8周末測大鼠尾外周血血糖,收集大鼠尿液,測定尿白蛋白(UAlb)、尿肌酐(UCr)和尿nephrin(Unep)水平。實驗中定期監(jiān)測大鼠血糖,8周末麻醉大鼠后從腹主動脈取血,測空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、糖化血紅蛋白A1c(HbA1c)、血肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平。處死大鼠留取左側腎臟,計算腎臟肥大指數(shù)(KI),觀察腎臟病理變化,計算腎小球平均體積(MGV)、平均腎小球截面積(MGA)、腎小球基底膜厚度(GBMT)及足突融合率(FPFR)。應用免疫組化和逆轉錄聚合酶鏈反應檢測腎組織nephrin蛋白含量及mRNA水平。2.臨床試驗部分:2012年9月至2014年9月在合肥市第二人民醫(yī)院內(nèi)分泌科住院和門診的糖尿病患者114例,納入標準:所有糖尿病患者符合1999年WHO糖尿病的診斷標準,已口服二甲雙胍和/或a糖苷酶抑制劑降糖,但血糖控制不佳(靜脈空腹血糖在7-10mmol/L),根據(jù)尿白蛋白/肌酐比值分3組:(1)正常白蛋白尿組(DM組,n=25例),尿ACR30mg/g;(2)微量白蛋白尿組(DN1組,n=61例),30mg/g≤ACR300mg/g;(3)大量白蛋白尿組(DN2組,n=28例),ACR≥300mg/g。同期選擇在我院體檢中心健康體檢人群30例為健康對照組(NC組),對照組空腹靜脈血糖均小于5.6mmol/L。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測所有入選者尿中nephrin表達水平。同時將微量白蛋白尿組(dn1組)61例患者隨機分成兩組:對照組(a組=29例,在原有口服降糖藥物二甲雙胍和/或a糖苷酶抑制劑的基礎上加用磺脲類藥物)、吡格列酮組(b組=32例,在原有口服降糖方案二甲雙胍和/或a糖苷酶抑制劑基礎上加用吡格列酮15-30mg/日),連續(xù)口服12周,分別于治療前及治療后測定尿nephrin、尿白蛋白及尿肌酐水平。結果1.動物實驗部分:(1)stz誘導的4組糖尿病大鼠(dm組、dr1、dr2和dr3組)的外周血血糖和8周末hba1c水平與nc組相比顯著升高,具有統(tǒng)計學差異(p0.01);而4組糖尿病大鼠各組間上述指標無統(tǒng)計學差異(p0.05);8周末各pio干預組tg均明顯低于dm組(p0.05),dr2、dr3組hdl-c水平明顯高于dm組(p0.05)。(2)0周時各組(nc組、dm組、dr1、dr2和dr3組)間尿白蛋白肌酐比(uacr)水平無統(tǒng)計學差異;8周末時,4組糖尿病大鼠uacr均顯著高于nc組(p0.01),pio干預組各組uacr均明顯低于dm組(p0.01),且dr2,dr3兩組uacr均低于dr1組(p0.05)。(3)與nc組相比,8周末各糖尿病組電鏡下見到腎小球毛細血管基底膜模糊不清,有不規(guī)則性增厚,且有足突破壞及融合,基底膜厚度(gbmt)及足突融合率(fpfr)均顯著高于nc組(p0.01);各pio干預組gbmt和fpfr均顯著高于nc組(p0.05和p0.01),卻顯著低于dm組(p0.01);且dr2及dr3組gbmt和fpfr明顯低于dr1組(均p0.01)。(4)與nc組相比,8周末4組糖尿病組大鼠的ki、mgv和mga均顯著高于nc組(p0.01)。與dm組相比,pio各干預組(dr1組、dr2和dr3組)的ki和mga均明顯降低(p0.05),且pio干預組三組間相比較,dr2組、dr3組的ki和mga明顯低于dr1組(p0.05);dr1組的mgv略低于dm組,無統(tǒng)計學意義差異(p0.05),而dr2、dr3組與dm組相比,mgv明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。(5)8周末,各pio干預組尿nephrin肌酐比(uner)排泄均顯著低于dm組(p0.05),dr2和dr3組uner較dr1組顯著降低(p0.05),而dr2和dr3組兩組間差異不明顯(P0.05)。(6)8周末,免疫組化結果顯示腎臟nephrin蛋白IOD值:NC組各PIO組DM組(P0.05),各PIO干預組間IOD無統(tǒng)計學差異;RT-PCR結果顯示與NC組比較,DM組及PIO干預組nephrin mRNA水平均明顯增高(P0.05),且PIO干預組低于DM組(P0.05)),但各PIO干預組間無明顯差異。(7)相關性分析顯示UNER與UACR和KI呈顯著正相關(r值分別為0.881和0.833,P0.01)。2.臨床試驗部分:(1)糖尿病組患者尿液中均可檢測到nephrin,而NC組患者尿中未檢測到nephrin排泄。DN組患者僅檢測到微量nephrin排泄,DN2組(大量白蛋白尿組)尿nephrin/尿肌酐比值(UNER)顯著高于DN1組(微量白蛋白尿組)(P0.01)。(2)A組和B組糖尿病患者治療前一般臨床資料(年齡、BMI、WHR、FBG、SBP、DBP、HbAlc)比較,均無統(tǒng)計學差異(P0.05);治療后A組和B組的FBG、HbAlc較治療前明顯降低(P0.01),兩組間相比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)A組治療前后UNER及UACR均無明顯變化(p0.05);B組治療后UNER及UACR均較治療前下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)相關性分析顯示尿UNER與UACR呈正顯著相關(r=0.624,P0.01)。結論:(1)糖尿病狀態(tài)下腎組織nephrin表達,尿nephrin排泄增加。(2)吡格列酮可改善STZ誘導的糖尿病大鼠腎組織nephrin mRNA及蛋白表達,降低尿nephrin排泄,且不依賴于降血糖作用。(3)吡格列酮對STZ誘導的糖尿病大鼠足細胞的有一定保護作用,并具有一定的劑量依賴性,該作用其可能與抑制尿nephrin排泄、調(diào)節(jié)腎組織nephrin mRNA及蛋白表達水平有關。(4)2型糖尿病患者尿nephrin排泄明顯增加,且與尿白蛋白排泄增加有關,吡格列酮可通過降低2型糖尿病患者尿nephrin的排泄而發(fā)揮直接的腎臟保護作用。
[Abstract]:Objective : 1 . To study the effects of different doses of pioglitazone on the expression of nephrin in diabetic rats induced by streptozocin . Methods : 1 . The experimental group of rats was divided into 4 groups randomly : control group ( NC group ) and experimental group ( n = 8 ) . The levels of nephrin protein and urinary nephrin ( BUN ) were measured at 0 , 4 and 8 weeks after the success of the model . In the experiment , the blood glucose of rats was measured and the levels of urinary albumin ( UALB ) , urinary creatinine ( UCr ) and urine nephrin ( BUN ) were measured . There was no significant difference in the levels of nephrin mRNA ( P < 0.05 ) between group A and group B ( P < 0.05 ) . The results showed that the ratio of urinary nephrin / urine creatinine ( UNER ) was significantly higher in diabetic group than in group B ( P 0.01 ) . Conclusion : ( 1 ) In diabetic rats , nephrin expression and nephrin excretion increase .
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻】

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本文編號：1940800