本文選題：脊髓損傷 + 脫細(xì)胞脊髓支架��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的本研究旨在應(yīng)用脫細(xì)胞技術(shù),在徹底去除細(xì)胞的前提下,盡量保持細(xì)胞外基質(zhì)的完整性,最大限度的保持其天然三維空間立體結(jié)構(gòu),成功制備出脫細(xì)胞脊髓支架,采用制備好的脫細(xì)胞脊髓支架與大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),觀察細(xì)胞在支架材料上的生長情況,為今后進(jìn)行脫細(xì)胞脊髓支架移植治療脊髓損傷提供了依據(jù)。方法1.取SPF級(jí)Wistar雌性大鼠10只,采用化學(xué)萃取法制備脫細(xì)胞脊髓支架。采用HE染色、髓鞘染色、掃描電鏡觀察脫細(xì)胞脊髓表面結(jié)構(gòu),將大鼠脊髓支架組織DNA提取,并進(jìn)行DNA含量分析以明確大鼠脊髓支架是否成功脫掉細(xì)胞成分。2.取實(shí)驗(yàn)用幼年SD鼠2只,麻醉后取出脊髓組織并剪碎,置入裝有細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)采用酶消化法對細(xì)胞進(jìn)行分離純化。細(xì)胞在體外增殖,傳代后,對其用NSE免疫組化染色進(jìn)行鑒定,并觀察生長狀況,繪制生長曲線。傳至第2代后,將神經(jīng)元細(xì)胞收集并與脫細(xì)胞脊髓支架共培養(yǎng)24小時(shí),MTT觀察細(xì)胞存活情況。3.將脫細(xì)胞脊髓支架消毒后修整為0.5cm的小段,取第三代大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞共基培養(yǎng)。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,利用HE染色觀察神經(jīng)元脫細(xì)胞脊髓支架結(jié)合生長情況,利用NSE、NEUN染色鑒定共培養(yǎng)細(xì)胞是否為神經(jīng)元細(xì)胞,利用掃描電鏡觀察整體空間三維結(jié)構(gòu)。結(jié)果1.采用化學(xué)萃取法制備的大鼠脫細(xì)胞脊髓支架,Wistar大鼠脫細(xì)胞脊髓支架呈乳白色,半透明狀,扁圓柱形,直徑和長度均略微變短,質(zhì)地柔軟,韌性增大,無異味。HE染色、髓鞘染色顯示大鼠脫細(xì)胞脊髓支架橫切面上呈現(xiàn)大小不等的網(wǎng)孔狀結(jié)構(gòu),細(xì)胞成分基本完全去除,未見細(xì)胞核藍(lán)色顆粒和紅色細(xì)胞質(zhì)存在,軸突和髓鞘均已去除,網(wǎng)孔壁由均質(zhì)粉紅染色的細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成,網(wǎng)孔內(nèi)外均未見細(xì)胞殘留,髓鞘掃描電子顯微鏡顯示大鼠脫細(xì)胞脊髓支架呈不規(guī)則網(wǎng)孔狀結(jié)構(gòu),細(xì)胞外基質(zhì)呈層狀排列,形成不規(guī)則圓形空腔,具備優(yōu)秀的三維立體網(wǎng)孔狀結(jié)構(gòu),孔壁較薄,表面積較大,孔洞間相互連通,經(jīng)DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測后未見DNA條帶,大鼠脫細(xì)胞脊髓支架脫細(xì)胞完全,不含脫氧核糖核酸類物質(zhì),細(xì)胞已完全除去。2.制備的大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞免疫組化NSE抗體染色結(jié)果顯示細(xì)胞胞體呈棕褐色,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,該細(xì)胞呈典型的神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài),即所制備的細(xì)胞為大鼠脊髓神經(jīng)原細(xì)胞。3.大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞與大鼠脫細(xì)胞脊髓支架共培養(yǎng)后HE染色結(jié)果顯示大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞粘附于大鼠脫細(xì)胞脊髓支架生長,細(xì)胞生長狀態(tài)良好。掃描電鏡顯示大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞在三維通道中充分生長,形成聚集的細(xì)胞區(qū)域,不影響大鼠脫細(xì)胞脊髓支架空間結(jié)構(gòu),NEUN染色及NSE顯示神經(jīng)元細(xì)胞軸突生長狀態(tài)良好,形態(tài)結(jié)構(gòu)完整,說明大鼠脫細(xì)胞脊髓支架與大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞具備良好的生物相容性與適應(yīng)性。結(jié)論1.采用化學(xué)萃取法制備的大鼠脫細(xì)胞脊髓支架在徹底去除細(xì)胞的前提下,盡量保持細(xì)胞外基質(zhì)的完整性,最大限度的保持其天然三維空間立體結(jié)構(gòu)。2.將大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞與大鼠脫細(xì)胞脊髓支架共培養(yǎng),大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞生長狀態(tài)良好,在脫細(xì)胞脊髓支架的空間通道中聚集生長,細(xì)胞軸突生長狀態(tài)良好形態(tài)結(jié)構(gòu)完整,并且脫細(xì)胞脊髓支架空間結(jié)構(gòu)保存完整,大鼠神經(jīng)元細(xì)胞在脫細(xì)胞脊髓支架中緊密排列,大鼠神經(jīng)元細(xì)胞和大鼠脫細(xì)胞脊髓支架具備良好的生物相容性。
[Abstract]:The purpose of this study was to study the growth of rat spinal cord by means of HE staining , myelin staining and scanning electron microscope ( SEM ) . The results showed that the cells of the spinal cord neurons of the rats were fully grown in the three - dimensional channels without affecting the space structure of the rat spinal cord .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.2;R318.08

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本文編號(hào)：1941256