本文選題：消痰化瘀利竅方 + 慢性間歇性低氧��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)主要是以睡眠中上呼吸道障礙造成的呼吸不暢或者呼吸暫停為特征,引起慢性間歇性低氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH),使血氧飽和度降低和睡眠結(jié)構(gòu)紊亂。OSAS是一個公共健康問題,在男性和女性中的患病率分別為3-7%和2-5%。研究發(fā)現(xiàn),OSAS是增加許多心血管疾病發(fā)病率和死亡率的一個重要風(fēng)險(xiǎn)因素,可誘發(fā)肺動脈高壓、糖尿病、認(rèn)知功能障礙、心肌缺血、腦卒中等并發(fā)癥,尤其是高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因素�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對OSAS患者一般采用藥物干預(yù)治療、口腔矯治器治療、呼吸機(jī)持續(xù)氣道正壓通氣(Continuous positive airway pressure,CPAP)治療以及外科手術(shù)治療等,然而,到目前為止,各種治療措施療效并不十分理想。OSAS屬于祖國醫(yī)學(xué)“鼾癥”范疇,消痰化瘀利竅方是我校OSAS中醫(yī)針?biāo)幏乐螆F(tuán)隊(duì)根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的治療脾虛失運(yùn)、肺氣失宣、痰阻血瘀型鼾癥的經(jīng)驗(yàn)方,經(jīng)過臨床驗(yàn)證能有效緩解患者癥狀,預(yù)防各種并發(fā)癥的發(fā)生。本研究主要觀察中藥消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈內(nèi)皮功能的保護(hù)作用,并探討Rho A/ROCK信號通道在消痰化瘀利竅方保護(hù)內(nèi)皮損傷過程中的作用機(jī)制。目的:研究消痰化瘀利竅方對CIH誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用。通過對尾動脈壓(SBP)、血清中NO、血漿中ET-1、主動脈內(nèi)皮細(xì)胞組織病理學(xué)改變的檢測來判斷消痰化瘀利竅方對CIH誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用。利用Western blot檢測ET-1、e NOS、p-e NOS、Rho A、ROCK、p-MYPT-1的蛋白表達(dá)水平,探討消痰化瘀利竅方對CIH誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮損傷的潛在機(jī)制。方法:成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重180-220g,購于河北醫(yī)科大學(xué)動物中心,大鼠隨機(jī)分成5組(n=10):常氧對照組(Normoxia)、慢性間歇性低氧組(CIH)、消痰化瘀利竅方低劑量組(XL+CIH)、消痰化瘀利竅方中劑量組(XM+CIH)、消痰化瘀利竅方高劑量組(XH+CIH)。除常氧對照組外,其他組暴露于CIH環(huán)境中,低、中、高劑量組分別給予不同濃度(生藥量24 g/kg,48 g/kg,96 g/kg)的消痰化瘀利竅方灌胃,每天在上艙前半個小時進(jìn)行。慢性間歇性低氧艙系統(tǒng)運(yùn)作:前1.5 min向艙內(nèi)充入100%氮?dú)馐筄2濃度降低到9%,后1.5 min充入醫(yī)用氧(99.5%)使O2濃度逐漸恢復(fù)到21%,每一低氧復(fù)氧循環(huán)的時間為3 min,每天8小時,一共暴露21天。造模結(jié)束后,取大鼠主動脈進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。造模前一天17時測量尾動脈收縮壓(SBP),每周測量一次,記錄每只大鼠的SBP。造模結(jié)束后,SD大鼠禁食禁水12小時后,股動脈取血,用于檢查血液的各項(xiàng)指標(biāo)。接著用25%烏拉坦腹腔注射麻醉,腹部表面用75%乙醇滅菌,然后進(jìn)行垂直切口以暴露腹腔和胸部,定位主動脈弓,沿著脊柱分離血管,并將其與結(jié)締組織分離。取一部分主動脈放于4%多聚甲醛中固定,其余組織保存于-80℃冰箱中。采用生物化學(xué)技術(shù)檢測血清中NO、血漿中ET-1的含量。對主動脈組織進(jìn)行HE染色。利用Western blot測定主動脈組織中ET-1、e NOS、p-e NOS、Rho A、ROCK、p-MYPT-1的蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:1消痰化瘀利竅方對CIH大鼠尾動脈壓的影響與常氧對照組(147±1.48 mm Hg)相比,CIH組在造模第21天結(jié)束后尾動脈壓顯著升高至158±3.44 mm Hg(P0.01)。與CIH組相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組均可有效降低CIH誘導(dǎo)的尾動脈壓升高,至造模結(jié)束血壓分別為148±2.65 mm Hg(P0.05),149±3.43 mm Hg(P0.05),149±3.57 mm Hg(P0.05)。2消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈內(nèi)皮組織形態(tài)學(xué)改變的影響通過HE染色觀察,常氧對照組主動脈結(jié)構(gòu)正常,內(nèi)膜光滑,內(nèi)皮細(xì)胞完整、排列有序。CIH組大鼠主動脈內(nèi)皮不光滑,內(nèi)皮細(xì)胞部分剝脫,胞體縮小,核小深染。與CIH組相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組中主動脈內(nèi)皮細(xì)胞組織損傷減輕。3消痰化瘀利竅方對CIH大鼠血清NO、血漿ET-1含量的影響與常氧對照組(38.1±2.10?mol/L)相比,CIH組大鼠血清NO含量顯著性降低至28.9±2.23?mol/L(P0.05)。與CIH組大鼠相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組血清NO含量增加,分別為35.7±1.72?mol/L(P0.05),36.7±1.22?mol/L(P0.05),38.5±1.15?mol/L(P0.01),具有劑量依賴性。與常氧對照組(79.4±4.05 pg/m L)相比,CIH組大鼠血漿ET-1含量顯著性升高至97.9±3.24 pg/m L(P0.05)。與CIH組大鼠相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組血漿ET-1含量降低,分別為85.8±1.75 pg/m L(P0.05),83.9±3.5 pg/m L(P0.05),82.1±4.4 pg/m L(P0.05),具有劑量依賴性。4消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈ET-1蛋白表達(dá)的影響與常氧對照組(0.350±0.0295)相比,CIH組大鼠主動脈ET-1表達(dá)顯著增加至1.04±0.0667(P0.01)。與CIH組大鼠相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組ET-1表達(dá)降低,分別為0.831±0.0254(P0.05),0.814±0.0275(P0.05),0.684±0.0232(P0.01),具有劑量依賴性。5消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈e NOS蛋白及其磷酸化水平表達(dá)的影響e NOS的磷酸化作為e NOS活性的標(biāo)志物。與常氧對照組(e NOS:1.10±0.0954,p-e NOS:0.670±0.0443)相比,CIH大鼠主動脈中e NOS蛋白表達(dá)顯著降低至0.411±0.0266(P0.05);p-e NOS蛋白表達(dá)顯著降低至0.267±0.0128(P0.01));與CIH組相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組e NOS蛋白表達(dá)明顯增加,分別為0.567±0.0444(P0.05),0.602±0.0223(P0.01),0.736±0.0250(P0.01);p-e NOS蛋白表達(dá)明顯增加,分別為0.324±0.0120(P0.05),0.424±0.0216(P0.01),0.578±0.0286(P0.01),具有劑量依賴性。6消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈Rho A/ROCK信號通道蛋白表達(dá)的影響與常氧對照組(Rho A:0.508±0.0638,ROCK:0.174±0.0316)相比,CIH組大鼠主動脈組織中Rho A 1.29±0.0341(P0.01);ROCK表達(dá)升高至1.10±0.0499(P0.01)。與CIH組相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組能夠降低Rho A蛋白表達(dá),分別為0.955±0.0796(P0.05),0.831±0.104(P0.05),0.6594±0.0710(P0.01);顯著降低ROCK蛋白表達(dá),分別為0.834±0.0624(P0.05),0.586±0.0395(P0.01),0.310±0.0652(P0.01),具有劑量依賴性。7消痰化瘀利竅方對CIH大鼠主動脈p-MYPT-1蛋白表達(dá)的影響因?yàn)镸YPT-1是Rho A/ROCK信號通道的最主要的一個下游通道介導(dǎo)Ca2+的敏感性和調(diào)節(jié)肌球蛋白輕鏈(MLC)的活性。通過檢測MYPT-1的磷酸化水平來判斷Rho A/ROCK信號通道的活化情況。與常氧對照組(0.339±0.0656)相比,CIH組大鼠主動脈組織中p-MYPT-1表達(dá)升高至1.03±0.0241(P0.01)。與CIH組相比,消痰化瘀利竅方低、中、高劑量組能夠降低p-MYPT-1表達(dá)0.705±0.0213(P0.01),0.506±0.0170(P0.01),0.359±0.0251(P0.01),有明顯的劑量依賴性。結(jié)論:消痰化瘀利竅方可顯著降低CIH大鼠血壓,并可有效干預(yù)內(nèi)皮功能損傷,其內(nèi)皮保護(hù)機(jī)制可能與抑制CIH誘發(fā)的Rho A/ROCK信號通路激活,調(diào)節(jié)e NOS,p-e NOS,NO,ET-1有關(guān)。
[Abstract]:闃誨鎬х潯鐪犲懠鍚告殏鍋滅患鍚堝緛(Obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)涓昏鏄互鐫＄湢涓笂鍛煎惛閬撻殰紕嶉，

本文編號：1849570