本文選題：病證模型 + 2型糖尿病��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：“方證相關(guān)”不僅是中醫(yī)方劑學(xué)中的一個重要命題,也是辨證論治原理的邏輯基礎(chǔ),近年來已成為中醫(yī)藥研究領(lǐng)域的熱點和重點。目前圍繞“方證相關(guān)”的研究基本上還是在證的靜態(tài)或空間分布的角度上對方證關(guān)系進行探討,基于中醫(yī)證候演變特性,對以病為背景的中醫(yī)證候進行動態(tài)干預(yù)的方證關(guān)系的評價尚未有見。之前,本學(xué)科在參考國外研究的基礎(chǔ)上,采用高脂高糖喂飼5周后一次性腹腔注射小劑量鏈脲菌素(STZ)成功誘導(dǎo)出大鼠T2DM模型,觀察到該模型發(fā)展中表現(xiàn)出中醫(yī)不同證候類型,即以IR為病理背景,以氣陰兩虛為基本病機,先后出現(xiàn)氣陰兩虛、氣陰兩虛兼痰濁、氣陰兩虛兼痰瘀的病機演變趨勢,提示該模型可能是T2DM病理發(fā)展中中醫(yī)證候隨時相變化的一個非常有用的病證結(jié)合模型。本課題基于T2DM的現(xiàn)代研究背景知識、中醫(yī)證候的某些現(xiàn)代內(nèi)涵及中醫(yī)防治糖尿病的有效方藥,從系統(tǒng)生物學(xué)角度,采用整體多系統(tǒng)指標(biāo),在探討該模型階段性病理生理演變規(guī)律與中醫(yī)證候關(guān)聯(lián)的基礎(chǔ)上進一步考查相關(guān)方藥對模型不同時相證候的干預(yù)效應(yīng),探討基于T2DM病理背景的中醫(yī)證候演變的現(xiàn)代內(nèi)涵和方證關(guān)聯(lián)的生物學(xué)基礎(chǔ)及有效干預(yù)方藥的作用機制。本文分為文獻綜述和實驗研究兩大部分。文獻綜述主要包括2型糖尿病發(fā)病及機制的研究進展；2型糖尿病大鼠模型中醫(yī)證候分型及其與現(xiàn)代病生理關(guān)系的研究兩方面。實驗研究主要包括2型糖尿病大鼠模型不同時相的中醫(yī)證候演變；基于數(shù)據(jù)分析對2型糖尿病演變中不同時相的中醫(yī)證候內(nèi)涵表征的探討；2型糖尿病大鼠模型不同時相動態(tài)干預(yù)的方藥效應(yīng)比較三個部分。研究一2型糖尿病大鼠模型不同時相的中醫(yī)證候演變方法：健康雄性SD大鼠150只,隨機分為正常組75只和造模組75只。其中正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),造模大鼠給予高脂高糖飼料,連續(xù)5w。第6w,造模組給予一次性腹腔注射STZ溶液。之后第三天,尾靜脈采血檢測大鼠空腹血糖,選擇FPG≥11.1mmol/L的大鼠正式納入模型組。分別從正常組和模型組中隨機挑選12只大鼠,麻醉經(jīng)腹主動脈采血,待測相關(guān)指標(biāo)：血清胰島素(Fins)、血清胰島素降解酶(IDE)、血清胰高血糖素(GC)、血清生長抑素(SS)、一氧化氮合酶(iNOS)、瘦素(Leptin)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、腎素(Renin)、視黃醇結(jié)合蛋白(RPB4)、血漿環(huán)磷酸腺苷/環(huán)磷酸鳥苷(cAMP/cGMP)、超氧化物歧化酶(SOD)、游離脂肪酸(FFA)、載脂蛋白(Apo-A)、纖維蛋白原(FIB)、血漿血栓素(TXB2)、血漿6-酮-前列環(huán)素Flα(6-keto-PGF1α)以及紅細胞膜鈉-鉀-ATP酶(Na+-K+-ATPASE);迅速分離相關(guān)臟器組織檢測相關(guān)指標(biāo)：肌肉胰島素受體數(shù)量(Ins R)、肌肉葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)、肝臟胰島素受體數(shù)量(Ins R)、肝臟葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)、脂肪胰島素受體數(shù)量(Ins R)、脂肪葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)。模型繼續(xù)高脂喂養(yǎng),于第8w、第10w和第12w禁食8小時后分別從正常組、模型組各取12只大鼠,腹腔麻醉,經(jīng)腹主動脈采血,待測Fins、糖化血紅蛋白(HbAlc)、IDE、GC、SS、iNOS、Leptin、CRP、NF-κB、 TC、TG、HDL-C、LDL-C、Hcy、Renin、RPB4、抵抗素(Resistin)、肌肉素(Musclin)、胰淀素(Amylin)、皮質(zhì)醇(CORT)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH),血漿cAMP/cGMP、 SOD、FFA、Apo-A、FIB、TXB2、6-keto-PGF1α以及Na+-K+-ATPase,迅速分離相關(guān)臟器組織檢測相關(guān)指標(biāo)：肌肉Ins R與GLUT4、肝臟Ins R與GLUT2、脂肪Ins R與GLUT4。每周觀測并記錄造模中各組大鼠的毛發(fā)色澤、行為狀態(tài)、舌、尾、體重、抓握力、血壓、飲食、飲水、大便及小便量等外觀行為方面的變化。結(jié)果：(1)T2DM外觀表征指標(biāo)變化：與正常組相比,模型組大鼠體重、抓握力在10-12w時顯著性降低(P0.01),血壓在5w+3d-12w顯著性升高；大鼠飲食量、飲水量、大便量、小便量在5w+3d-12w均顯著性升高(P0.01)。與正常組相比,模型組大鼠皮膚毛發(fā)、行為狀態(tài)、情緒反應(yīng)、舌質(zhì)、臀尾色澤變化積分在5w+3d-12w時均呈顯著性升高(P0.01)。(2)T2DM模型基礎(chǔ)指標(biāo)變化：與正常組相比,模型組大鼠FPG、IRI在5w+3d-12w均顯著性升高(P0.01),Fins、HbA1c在8w-12w均顯著性升高(P0.01),IAI在5w+3d-12w均顯著性降低(P0.01)。(3)胰島素調(diào)節(jié)因子變化：與正常組相比,模型組大鼠IDE、GC在5w+3d有升高趨勢(P0.05),在8w-12w均顯著性升高(P0.01),血清SS在8w-12w顯著性降低(P0.01)。(4)脂代謝變化：與正常組相比,模型組血清TG、TC、LDL-C在10w-12w均顯著性升高(P0.01),HDL-C在8w-12w均顯著性降低(P0.01),血清FFA在5w+3d-12w均顯著性升高(P0.01),Aop-A在10w-12w均顯著性降低(P0.01)。(5)血液相關(guān)酶變化：與正常組相比,模型組大鼠Na+-K+-ATPase、SOD在5w+3d-12w均顯著性降低(P0.01),iNOS在5w+3d-12w均顯著性升高(P0.01)。 (6)細胞因子變化：與正常組相比,模型組大鼠CRP、Leptin在5w+3d-12w均顯著性升高(P0.01),血清RPB4在10w-12w均顯著性升高(P0.01),NF-κB在8-12w均顯著性升高(P0.01)。(7)血液及血管調(diào)節(jié)因子變化：與正常組相比,模型組血清Hcy、血漿FIB在10w-12w均顯著性升高(P0.01),血漿TXB2、血清Renin在12w顯著性升高(P0.01),血漿6-keto-PGF1α在1 2w顯著性降低(P0.05)。(8)HPA軸變化：與正常組相比,模型組血清ACTH、CORT在8-12w均顯著性升高(P0.01)。 (9)其他指標(biāo)變化：與正常組相比,模型組血漿cAMP在8w-12w顯著性降低(P0.01),cGMP、cAMP/cGMP在8w-12w均顯著性升高(P0.01)；血清Resistin、musclin在8-12w均顯著性升高(P0.01)。 (10)IR相關(guān)指標(biāo)變化：與正常組相比,模型組肝臟GLUT2和InsR在5w+3d-12w顯著降低(P0.01)；脂肪GLUT4在10w-12w顯著性降低(P0.05或P0.01),脂肪InsR數(shù)量在5w+3d、10w-12w顯著降低(P0.01)；組肌肉GLUT4、InsR數(shù)量在12w顯著降低(P0.01)。結(jié)論：采用高脂飼料喂養(yǎng)+小劑量STZ腹腔注射的方法復(fù)制的2型糖尿病大鼠模型具有典型的臨床糖尿病特點：并先后出現(xiàn)“三多一少”、高血糖、高胰島素血癥、高胰高血糖素、高血脂、高血壓,且伴有抓握力的降低；模型大鼠在造模期間先后出現(xiàn)靶器官肝臟→脂肪→肌肉的IR。該模型同時具有中醫(yī)證候階段性變化的特點,即出現(xiàn)中醫(yī)證候及其相應(yīng)的病生理學(xué)指標(biāo)的改變,其階段性的中醫(yī)證候病機演變規(guī)律為中醫(yī)氣陰兩虛證→氣陰兩虛兼痰濁證→氣陰兩虛兼痰濁、血瘀證。研究二基于數(shù)據(jù)分析對2型糖尿病演變中不同時相的中醫(yī)證候內(nèi)涵表征的探討方法：采用直觀比較、決策樹和信息增益／信息熵分析法對2型糖尿病模型的實驗指標(biāo)及數(shù)據(jù)進行不同緯度的分析。結(jié)果：(1)直觀比較法：模型組和正常組比較有顯著差異的：在5w+3d, BP、Food、 Water、Defecation、Urine、FPG、IAI、IRI、FFA、Leptin、iNOS、Na+ -K+ -ATPase、SOD、 CRP、IDE、Liver-GLUT2、Liver-InsR、TC、Fat-Ins R;在第8w, BP、Food、Water、 Defecation、Urine、FPG、IAI、IRI、FFA、Leptin、iNOS、Na+-K+-ATPase、SOD、CRP、 Liver-GLUT2、Liver-InsR、Fins、GC、cAMP/cGMP、NF-κB、HbA1c、COR、Resistin、 Musclin、ACTH、IDE、SS;在第10w, BP、Food、Water、Defecation、Urine、FPG、 IAI、IRI、FFA、Leptin、iNOS、Na+-K+-ATPase、SOD、CRP、Liver-GLUT2、Liver-InsR、 Fins、GC、cAMP/cGMP、NF-κB、HbA1c、CORT、Resistin、Musclin、ACTH、IDE、 SS、Fat-Ins R、weight、Grip、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A、FIB、Hcy、RPB4、 Fat-GLUT4;第12w, BP、Food、Wate、Defecation、Urine、FPG、IAI、IRI、FFA、 Leptin、iNOS、Na+-K+-ATPase、SOD、CRP、Liver-GLUT2、Liver-InsR、Fins、GC、 cAMP/cGMP、NF-κB、HbA1c、CORT、Resistin、Musclin、ACTH、IDE、SS、Fat-Ins R、 weight、Grip、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A、FIB、Hey、RPB4、Fat-GLUT4、 TXB2、6-keto-PGF1a、Renin、Muscle-InsR、Muscle-GLUT4、Amylin。模型組內(nèi)與前一階段比較：1)與5w+3d比,第8w模型組有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)有BP、Weight、Water、 Urine、IAI、IRI、SOD、Liver-InsR、Defecation、cAMP/cGMP、iNOS、FPG、Fins、Renin、 Food;2)與8w比,第10w模型組有統(tǒng)計學(xué)意義的是Weight、BP、Grip、Water、Food、 Urine、IAI、IRI、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A、FIB、SOD、Liver-InsR; 3) 與10w比,第12w模型組有統(tǒng)計學(xué)意義的是BP、Grip、TXB2、LDL-C、Fat-GLUT4、Muscle-Ins R、Muscle- GLUT4、Amylin。(2)決策樹分析：正常組和模型決策樹共有4個節(jié)點,涉及到的指標(biāo)是IAI、BP、tizhong (Weight)和cAMP/cGMP。其中,IAI可以很好的區(qū)分正常組和4個模型組；IAI和cAMP/cGMP可以較好地區(qū)分模型第一階段(M1)和模型第2階段(M2); IAI、BP和Weight可以較好地區(qū)分模型第2階段(M2)和模型第三階段(M3)；IAI和BP可以較好地區(qū)分模型第三階段(M3)和模型第四階段(M4)。經(jīng)計算其正確分類實例率達98.75%,具有可信度。模型各個階段決策樹共有3個節(jié)點,涉及到的指標(biāo)是BP和Weight。其中BP可以很好的區(qū)分M1和M4,BP和Weight可以很好區(qū)分M2和M3。(3)信息增益/信息熵分析：正常組與模型組比較各階段有強區(qū)分力的指標(biāo)：1)IRI、IAI和FGP對于M1和N1具有很好的區(qū)分力,而SOD、CRP、Leptin、Water、 Gripe、iNOS和Defecation對于M1和N1具有也較好的區(qū)分力；2)IRI、HbA1c、IAI、BP、 FPG、cAMP/cGMP對于M2和N2具有很好的區(qū)分力,而Resistin、CORT、FFA、iNOS、 CRP、SOD、Musclin、Leptin、Fins、NF-κB、Gripe、Defecation、Na+-K+-ATPase、Urine、 Food、Water對于M2和N2具有也較好的區(qū)分力；3) IRI、BP、Weight、IAI、CORT、 CRP、HbA1c、FPG、cAMP/cGMP對于M3和N3具有很好的區(qū)分力,而iNOS、Resistin、 Leptin、TG、FIB、FFA、LDL、NF-κB、HDL、TC、Gripe、Apo-A、Food、Na+-K+-ATPase、 SOD、Urine、Defecation、Water對于M3和N3具有也較好的區(qū)分力；4) IRI、BP、IAI、 HbA1c、Weight、FPG對于M4和N4具有很好的區(qū)分力,而Resistin、GC、Fins、TC、CORT、 cAMP/cGMP、Fat-GLUT4、TXB2、TG、Fat-InsR、iNOS、SOD、FFA、Liver-GLUT2、 Muscle- InsR、IDE、Muscle-GLUT4、Defecation、Urine、Water、Gripe、Food、Na+-K+-ATPase、 FIB、Apo-A對于M4和N4具有也較好的區(qū)分力。模型組內(nèi)各階段間的指標(biāo)區(qū)分力：cAMP/cGMP對于M1和M2具有很好的區(qū)分力,而BP、Weight、FPG、IRI、Urine、Food、 Gripe、IAI、Water對于M1和M2具有較好的區(qū)分力；Weight對于M2和M3具有很好的區(qū)分力,而FPG、Apo-A、TG、LDL、FIB、Gripe、Urine、Water對于M2和M3具有較好的區(qū)分力；BP、Muscle-GLUT4、Muscle-InsR對于M3和M4具有較好的區(qū)分力。結(jié)論：綜合三種分析結(jié)果,從疾病的病生理角度可以概括出該模型的表征：即該模型以伴有多食-多飲-多尿及高血壓為主要表現(xiàn),以糖脂代謝異常、氧化應(yīng)激和神經(jīng)-內(nèi)分泌異常為基本病理,同時出現(xiàn)早期以氧化應(yīng)激損傷-副交感與腎上腺皮質(zhì)激活(早期)-肝臟IR,中期以脂代謝-凝血功能異常-體重降低-脂肪IR,后期以胰島功能損傷-血管調(diào)節(jié)異常-肌肉組織IR等為主要病變的先后病理演變進程。研究三2型糖尿病大鼠模型不同時相動態(tài)干預(yù)的方藥效應(yīng)比較方法：健康雄性SD大鼠300只,隨機分為正常組60只和造模組240只。其中正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),造模大鼠給予高脂高糖飼料,連續(xù)5w。第6w,造模組給予一次性腹腔注射STZ溶液。注射STZ后第三天,尾靜脈采血檢測大鼠空腹血糖,選擇空腹血糖≥11.1mmol/L的大鼠正式納入模型組。分別從正常組和模型組中隨機挑選12只大鼠,麻醉經(jīng)腹主動脈采血,待測相關(guān)指標(biāo)。給藥第1階段(7-8w)：從正常組隨機挑選12只大鼠,模型組隨機挑選60只大鼠,隨機分為模型組、中藥A方組、中藥B方組、中藥C方組和西藥組,中藥三組分別給于A方、B方、C方灌胃；西藥組給予鹽酸吡格列酮灌胃,于第8w末禁食8小時后腹腔麻醉,經(jīng)腹主動脈采血檢測相關(guān)指標(biāo)。給藥第2階段(9-10w)：從正常組隨機挑選12只大鼠,模型組隨機挑選60只大鼠,隨機分為模型組、中藥A方組、中藥B方組、中藥C方組和西藥組,中藥三組分別給于A方、B方、C方灌胃；西藥組給予鹽酸吡格列酮灌胃,于第10w末禁食8小時后腹腔麻醉,經(jīng)腹主動脈采血檢測相關(guān)指標(biāo)。給藥第3階段(11-12w)：從正常組隨機挑選12只大鼠,模型組隨機挑選60只大鼠,隨機分為模型組、中藥A方組、中藥B方組、中藥C方組和西藥組,中藥三組分別給于A方、B方、C方灌胃；西藥給予鹽酸吡格列酮灌胃,于第12w末禁食8小時后腹腔麻醉,經(jīng)腹主動脈采血檢測相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果：第一階段,與正常組相比,模型組大鼠BP顯著升高,飲食、飲水、大便、小便量顯著增加；FGB、Fins、IRI顯著升高,IAI顯著性降低；IDE、GC顯著升高,SS顯著降低；Na+-K+-ATPase、SOD顯著降低,iNOS顯著升高；CRP、Leptin、FFA顯著升高；cGMP顯著升高,cAMP、cAMP/cGMP顯著降低。中藥A方可改善模型組顯著變化的BP、FGB、Fins、IRI; IDE、GC; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS; CRP、Leptin、 FFA; cAMP、cGMP、cAMP/cGMP;中藥B方可改善模型組顯著變化的BP; Fins、IRI、 IDE; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS; CRP; cGMP、cAMP/cGMP;中藥C方可改善模型組顯著變化的BP、FGB、IRI、Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS、CRP、cGMP、cAMP/cGMP。第二階段,與正常組相比,模型組大鼠體重、抓握力顯著降低、BP顯著升高,飲食、飲水、大便、小便量顯著增加；FGB、Fins、IRI顯著升高,IAI顯著性降低；IDE、GC顯著升高,SS顯著降低；Na+-K+-ATPase、SOD顯著降低,iNOS顯著升高；CRP、 Leptin顯著升高；TG、TC、LDL-C、RPB4、FFA顯著升高,HDL-C、apo-A顯著降低；FIB、Hcy顯著升高；cGMP顯著升高cAMP、cAMP/cGMP顯著降低。中藥A方可改善模型組顯著變化的體重、BP、Fins、IRI; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS; CRP。中藥B方可改善模型組顯著變化的體重、飲食量、BP; FGB、Fins、IRI、IDE、SS; Na+-K+-ATPase、 SOD、iNOS；CRP、Leptin；TG、TC、LDL-C、HDL-C、RPB4、FFA、apo-A; Hcy; cGMP、cAMP/cGMP。中藥C方可改善模型組顯著變化的體重、BP; Fins、IRI、IAI、 IDE、SS; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS; CRP、Leptin; TG、TC、LDL-C、FFA; cGMP。第三階段,與正常組相比,模型組大鼠體重、抓握力顯著降低、BP顯著升高,飲食、飲水、大便、小便量顯著增加；FGB、Fins、IRI顯著升高,IAI顯著性降低；IDE、GC顯著升高,SS顯著降低；Na+-K+-ATPase、SOD顯著降低,iNOS顯著升高；CRP、Leptin顯著升高；TG、TC、LDL-C、RPB4、FFA顯著升高,HDL-C、apo-A顯著降低；TXB2、 FIB、Hey顯著升高,6-Keto-PGF1c顯著降低；cGMP顯著升高cAMP、cAMP/cGMP顯著降低。中藥A方可改善模型組顯著變化的BP、抓握力、飲食、飲水量；FGB、IRI; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS。中藥B方可改善模型組顯著變化的BP、抓握力、飲食、飲水、大便、小便量；FGB、Fins、IRI、IAI; Na+-K+-ATPase、SOD、iNOS; TG、TC、 FIB; cGMP、cAMP/cGMP。中藥C方可改善模型組顯著變化的體重、BP、抓握力、飲食、飲水、大便、小便量；FGB、Fins、IRI、IAI; IDE、GC、SS; Na+-K+-ATPase、SOD、 iNOS; Leptin; TG、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、apo-A; TXB2、FIB、Hcy,6-Keto-PGF1c; cAMP、cGMP、cAMP/cGMP。結(jié)論：A、B、C三方對模型發(fā)展中三個階段的證候均有一定的干預(yù)效果,其中A方對第一階段的作用最好,B方對第二階段的作用最好,C方對第三階段的干預(yù)效果最好。結(jié)果表明,A、B、C三方的防治效果因證有異,三方與模型不同階段中的三證均存在一定的關(guān)聯(lián),但其關(guān)聯(lián)程度有所不同。A、B、C方分別與模型第一、第二和第三階段的證候有更高的關(guān)聯(lián)性,與實驗前針對三個階段設(shè)定的A、B、C三個目標(biāo)方的作用預(yù)期相符,也與中醫(yī)益氣養(yǎng)陰與氣陰兩虛證、益氣養(yǎng)陰化痰與氣陰兩虛兼痰濁證、益氣養(yǎng)陰化痰祛瘀與氣陰兩虛兼痰瘀證的經(jīng)驗是一致的。推論中醫(yī)因證立法、選方用藥的辨治經(jīng)驗有其充分的合理性和豐富的科學(xué)內(nèi)涵。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R259;R-332

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本文編號：1849627