本文選題：盲腸結(jié)扎穿孔 + 膿毒癥　； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：膿毒癥（sepsis）是感染引起的、以全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatoryresponse syndrome, SIRS)為特征的、證實(shí)有細(xì)菌存在或有高度可疑感染灶的疾病，是外科重癥監(jiān)護(hù)室（Intensive Care Unit, ICU）的主要死亡原因。研究表明，ICU中約40%的患者患有膿毒癥，病死率高達(dá)36%。近年來，膿毒癥發(fā)病呈上升趨勢，住院費(fèi)用極昂貴，尚缺乏有效的救治手段。因此，尋找安全、有效、經(jīng)濟(jì)的救治策略具有十分重要的意義。高氧和麻醉濃度的異氟醚已經(jīng)被證實(shí)對膿毒癥動物有保護(hù)效應(yīng)。氧氣和異氟醚在臨床上已被廣泛應(yīng)用，但高濃度氧長時間吸入會產(chǎn)生過量氧自由基，可能導(dǎo)致氧毒性的發(fā)生，而麻醉劑量的異氟醚會引起病人麻醉，重癥病人不能耐受，因此，兩者在臨床應(yīng)用會受到病人情況的限制。我們最近的研究表明，0.5最低肺泡有效濃度（minimum alveolar concentration, MAC）異氟醚復(fù)合60%氧吸入對酵母多糖所致小鼠膿毒癥具有保護(hù)作用。因此，本課題采用臨床公認(rèn)的膿毒癥模型---盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture, CLP）法誘導(dǎo)小鼠膿毒癥及脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）誘導(dǎo)離體細(xì)胞膿毒癥模型，證實(shí)0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧吸入對膿毒癥具有保護(hù)作用，并通過芯片研究說明miRNA調(diào)控的免疫炎癥機(jī)制可能在其中發(fā)揮重要作用。 材料與方法 根據(jù)隨機(jī)表法把雄性昆明小鼠（25-30g，無病原）隨機(jī)分為6組，“膿毒癥+空氣”組、“膿毒癥+100%氧氣”組、“膿毒癥+0.5MAC異氟醚+60%氧氣”組、“假手術(shù)+空氣”組、“假手術(shù)+100%氧氣”組、“假手術(shù)+0.5MAC異氟醚+60%氧氣”組。給予動物CLP誘導(dǎo)膿毒癥模型，動物單純開腹關(guān)腹作為對照模型。氧醚治療：膿毒癥模型制作后1h、6h分別給動物100%氧吸入或0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧氣吸入1h；對照組動物吸入空氣。CLP后連續(xù)7天觀察各組動物存活率。取全血分離血清檢測血生化指標(biāo)、血清C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein, CRP）、血乳酸、炎癥因子等指標(biāo)，取心、肺、肝和腎各臟器，計算肺濕干比、觀察各臟器病理損傷并進(jìn)行病理評分。進(jìn)行肺泡灌洗，檢測肺蛋白滲出。提白細(xì)胞，檢測白細(xì)胞miRNA表達(dá)譜。 RAW264.7巨噬細(xì)胞系，隨機(jī)分為6組，“脂多糖”組、“脂多糖+100%氧氣”組、“脂多糖+0.5MAC異氟醚+60%氧氣”組、“安慰劑”組、“安慰劑+100%氧氣”組、“安慰劑+0.5MAC異氟醚+60%氧氣”組。 LPS刺激誘導(dǎo)細(xì)胞膿毒癥模型，，脂多糖溶劑DMED培養(yǎng)基作為陰性對照。氧醚治療：CLP后即刻給細(xì)胞100%氧或0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧環(huán)境處理。處理結(jié)束后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液、抽提細(xì)胞核蛋白和（或）取爬片的細(xì)胞，檢測炎癥因子及核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）的活化。 結(jié)果 1．CLP后24h，膿毒癥小鼠心、肺、肝和腎臟發(fā)生顯著病理性改變，血乳酸和血生化水平顯著高于對照組小鼠，血中炎癥因子水平顯著增高，7天存活率僅為40%。造模后1h和6h分別吸入1h的100%氧或0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧，可顯著減輕CLP所致膿毒癥小鼠各指標(biāo)的異常變化。 2．造模后不同時間點(diǎn)，膿毒癥小鼠血中炎癥因子發(fā)生顯著異常。造模后1h和6h分別吸入100%氧或0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧1h，可顯著改變CLP后小鼠miRNA表達(dá)譜。 3．100ng/ml脂多糖刺激2h后，細(xì)胞炎癥因子水平及NF-κB的活化顯著高于對照組。100%氧或0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧處理可顯著抑制炎癥因子的異常變化及降低NF-κB的活化。 結(jié)論 綜上所述，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，0.5MAC異氟醚復(fù)合60%氧氣可能是通過miRNA調(diào)節(jié)的免疫炎性機(jī)制及抑制NF-κB的活化對膿毒癥產(chǎn)生保護(hù)作用。
[Abstract]:Sepsis (sepsis) is an infection, characterized by systemic inflammatory response syndrome (systemic inflammatoryresponse syndrome, SIRS), which confirms the presence of bacteria or a highly suspected infection, which is the main cause of death in the surgical intensive care unit (Intensive Care Unit, ICU). The study showed that about 40% of the patients in ICU were Huan Younong. In recent years, the incidence of toxosis is up to 36%., the incidence of sepsis is rising, the cost of hospitalization is very expensive, and it is still lack of effective treatment. Therefore, it is very important to find a safe, effective and economical treatment strategy. It is widely used clinically, but high concentration of oxygen long time inhalation produces oxygen free radicals, which may lead to oxygen toxicity, and anesthetic isoflurane can cause patients to be anesthetized and severe patients are intolerant. Therefore, both in clinical application will be limited by the patient's condition. Our recent study shows that 0.5 of the lowest alveoli are effective. The concentration (minimum alveolar concentration, MAC) isoflurane combined with 60% oxygen inhalation can protect the sepsis caused by yeast polysaccharide in mice. Therefore, this subject uses a clinically recognized sepsis model - cecum ligation and perforation (cecal ligation and puncture, CLP) to induce sepsis and lipopolysaccharide (lipopolysaccharide, LPS) induction in mice The sepsis model of isolated cells confirmed the protective effect of 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen inhalation on sepsis, and a chip study showed that the immune inflammatory mechanism regulated by miRNA may play an important role in it.
Materials and methods
The male Kunming mice (25-30g, without pathogens) were randomly divided into 6 groups, "sepsis + air" group, "sepsis +100% oxygen" group, "sepsis +0.5MAC isoflurane +60% oxygen" group, "sham operation + air" group, "sham operation +100% oxygen" group, "sham operation +0.5MAC isoflurane +60% oxygen" group. Animal CLP induction was given. The model of sepsis, animals simply open the abdominal cavity as the control model. Oxygen and ether treatment: after the sepsis model was made 1H, 6h was given to animals 100% oxygen inhalation or 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen inhalation of 1H, and the control group of animals inhaled air.CLP for 7 days to observe the survival rate of each group. The blood biochemical indexes were detected by whole blood separated serum, serum C The C-reactive protein (CRP), blood lactic acid, and inflammatory factors were used to measure the lung wet dry ratio, the pathological injury of the organs and the pathological scores were observed. The alveolar lavage, the pulmonary protein exudation, the leukocyte and the miRNA expression of leukocyte were detected.
RAW264.7 macrophage system, randomly divided into 6 groups, "lipopolysaccharide" group, "lipopolysaccharide +100% oxygen" group, "lipopolysaccharide +0.5MAC isoflurane +60% oxygen" group, "placebo" group, "placebo +100% oxygen" group, "placebo +0.5MAC isoflurane +60% oxygen" group. LPS stimulation induced cell sepsis model, lipopolysaccharide solvent DMED medium For the negative control. Oxygen ether treatment: the cells were treated with 100% oxygen or 0.5MAC isoflurane immediately after CLP. After treatment, the cell culture supernatant was collected, the cell of nuclear protein and / or crawling tablet were extracted, and the activation of the inflammatory factors and nuclear factor kappa B (nuclear factor-kappa B, NF- kappa B) was detected.
Result
After 1.CLP 24h, there were significant pathological changes in the heart, lung, liver and kidney of sepsis mice. Blood lactic acid and blood biochemical levels were significantly higher than those in the control group. The levels of inflammatory factors in the blood were significantly higher. The 7 day survival rate was only 100% oxygen or 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen after 1h and 6h, respectively, which could significantly reduce CLP induced sepsis. Abnormal changes in each index of the rat.
2. after modeling at different time points, the inflammatory factors in the blood of sepsis mice were significantly abnormal. After the model, 1H and 6h inhaled 100% oxygen or 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen 1H, which could significantly change the miRNA expression profiles in CLP mice.
After 3.100ng/ml lipopolysaccharide stimulated 2h, the levels of inflammatory factors and the activation of NF- kappa B were significantly higher than those of the control group of.100% oxygen or 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen treatment, which could significantly inhibit the abnormal changes of inflammatory factors and reduce the activation of NF- kappa B.
conclusion
In summary, our experimental results show that 0.5MAC isoflurane combined with 60% oxygen may be a protective effect of miRNA mediated immuno inflammatory mechanism and inhibition of activation of NF- kappa B on sepsis.

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R614

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本文編號：1801946