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烏梅噴霧劑對Wistar大鼠頜下腺放射性損傷后功能影響的研究

發(fā)布時間:2018-04-11 12:16

  本文選題:放射性損傷 + 頜下腺 ; 參考:《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文


【摘要】:目的建立放射頜下腺損傷的動物模型,使用烏梅噴霧劑干預(yù)后測定其唾液流率、唾液成分以及摘取大鼠腺體,用HE染色、PCR等技術(shù)方法檢測唾液腺及唾液細(xì)胞形態(tài)和功能的變化、水通道因子AQP1和AQP5基因的表達(dá),從分子病理層面探究放射性頜下腺損傷的發(fā)病機(jī)制以及烏梅噴霧對放射頜下腺損傷的修復(fù)效果及作用機(jī)制。方法實(shí)驗(yàn)一方法:大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)(大學(xué)城)實(shí)驗(yàn)動物中心統(tǒng)一提供,SCXK(粵)2013-0034,Wistar 種類,6~7 周,180~220g,共115只,SYXK(粵)2013-0085,并通過大學(xué)動物倫理委員會批復(fù)同意。將115只大鼠隨機(jī)分為正常組(sham-irradiated control group,SIG)、模型組(irradiated group,IG),正常組(n=56)只麻醉不照射,模型組(n=59)麻醉后使用直線加速器一次性照射18Gy(射線類型:電子線,能量為9MV,劑量率為3Gy/min),將大鼠頜下腺部位暴露于照射區(qū)(暴露區(qū)域:1.5cm*1.5cm),其他部位由2cm鉛板遮檔,避免受到射線影響。照射結(jié)束后,兩組分8個時間點(diǎn)觀察大鼠飲食量、唾液流率等指標(biāo),即第1天、第3天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天,期間不限制飲食量,每組各個時間段取7~8只大鼠解剖摘取頜下腺組織做病理組織學(xué)檢查。通過對正常組和模型組大鼠飲水量、唾液量、病理組織學(xué)方法、水通道蛋白的表達(dá)觀察判斷大鼠放射性頜下腺損傷的模型建立與否。實(shí)驗(yàn)二方法:通過隨機(jī)對照實(shí)驗(yàn),將175只Wistar大鼠隨機(jī)分成5組,每組35只大鼠,分別為正常組(sham-irradiated control group,SIG)、模型組(irradiated group,IG)、生理鹽水組(normal saline group,NSG)、匹羅卡品組(pilocarpine group,PG)、烏梅噴霧組(dark plum spray group,DPSG)。正常組只麻醉不照射,其他4組麻醉后使用直線加速器一次性照射18Gy(具體照射方法同實(shí)驗(yàn)一)。造模后,各組分5個時間點(diǎn)收集唾液、摘取頜下腺腺體,即第1天、第3天、第7天、第14天、第28天,期間不限制飲食量,每組各個時間點(diǎn)取7只大鼠取樣測定唾液流率、唾液成分以及摘取大鼠腺體,用HE染色、PCR等技術(shù)方法檢測唾液腺組織形態(tài)和功能的變化以及水通道蛋白AQP1和AQP5基因的表達(dá)量。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一結(jié)果:放射后1~21天模型組大鼠飲水量為(6.42±1.91)ml、正常組飲水量為(4.82±1.20)ml,模型組飲水量明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);在放射后第1天、第3天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天模型組唾液量均低于正常組,其中第7天、第21天、第28天、第42天的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);第1天、第21天、第28天、第35天、第42天頜下腺指數(shù)比較有顯著差異(P0.05);HE病理切片顯示頜下腺腺體明顯萎縮,腺體細(xì)胞核固縮明顯,體積明顯變小,間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重,間質(zhì)明顯增寬,間質(zhì)中膠原有些增生,間質(zhì)中血管充血明顯,病理損傷程度呈漸進(jìn)性加重,放射后42天損傷最為嚴(yán)重;頜下腺組織通PCR檢測,結(jié)果顯示模型組1~42天的水通道蛋白AQP1和AQP5的表達(dá)明顯受到抑制(P0.05)。實(shí)驗(yàn)二結(jié)果:第7天、28天的模型組唾液流率明顯低于正常組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且第7天烏梅噴霧組唾液流率高于正常組和模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);生理鹽水組、匹羅卡品組和烏梅噴霧組對放射后唾液成分的改變無明顯改變;HE染色結(jié)果也顯示烏梅噴霧組與匹羅卡品組頜下腺組織的修復(fù)情況較好,在第14、28天結(jié)果中,烏梅噴霧組的腺體得到修復(fù),腺體組織恢復(fù)情況幾乎接近于正常組;匹羅卡品組和烏梅噴霧組能促進(jìn)水通道AQP1和AQP5的基因表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),烏梅噴霧劑干預(yù)兩周后,烏梅噴霧組的促進(jìn)水通道AQP1和AQP5表達(dá)的作用更為顯著。結(jié)論Wistar大鼠接受直線加速器電子線18Gy照射后,放射性頜下腺損傷的動物模型成功建立,損傷機(jī)制為放射在損傷頜下腺組織細(xì)胞的同時,位于頜下腺的水通道因子AQP1和AQP5的表達(dá)也受到抑制,由于水通道蛋白AQP1和AQP5是頜下腺調(diào)控水分泌和水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)的主要通道,因此水分泌和水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)功能受到不良影響,進(jìn)而唾液分泌減少以及頜下腺損傷進(jìn)一步加重。烏梅噴霧劑干預(yù)2周后,能促進(jìn)大鼠頜下腺水通道因子AQP1和AQP5基因的高表達(dá),從而促進(jìn)水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn),促使頜下腺組織的放射性損傷的得以修復(fù),對放射性損傷頜下腺的功能具有保護(hù)作用,但烏梅噴霧劑沒有糾正放射后唾液成分的改變。
[Abstract]:Objective To establish an animal model of mandibular gland injury , and to determine the salivary flow rate , saliva composition and the changes of morphology and function of salivary gland and salivary cells after intervention with Wumei spray . The rats were randomly divided into normal group ( sham - irradiated control group , SIG ) , model group ( irradiated group , IG ) . The rats were randomly divided into normal group ( exposed area : 1.5cm * 1.5cm ) . Methods : 175 Wistar rats were randomly divided into five groups : sham - irradiated control group ( SIG ) , model group ( irradiated group , IG ) , normal saline group ( NSG ) , pilocarpine group ( PG ) , dark plum spray group ( DPSG ) . The results showed that the amount of saliva was ( 6.42 鹵 1.91 ) ml in the model group after radiation , and the quantity of water channel protein AQP1 and AQP5 was significantly higher than that in the normal group ( P0.05 ) . The results showed that AQP1 and AQP5 expressions of AQP1 and AQP5 were significantly lower than those in normal group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】:廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:R285.5

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