本文選題：骨保護(hù)素　切入點(diǎn)：椎間盤(pán)退變　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:椎間盤(pán)退變是導(dǎo)致影響人們生活質(zhì)量的眾多疾病之一,其可表現(xiàn)為下腰痛、椎間盤(pán)突出及腰椎管狹窄。其確切的病理機(jī)制還不是十分清楚,但是基因和環(huán)境因素起了很大的作用。骨保護(hù)素是腫瘤壞死因子超受體家族中的一種含有401個(gè)氨基酸殘基的細(xì)胞因子受體的糖蛋白,同時(shí)也是一種破骨細(xì)胞形成抑制因子。它主要由成骨細(xì)胞合成,但在其他的器官和組織中也有表達(dá),包括心臟、血管壁、肺臟、腎臟、骨組織。研究認(rèn)為OPG基因的調(diào)控對(duì)骨量及骨折,骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎的風(fēng)險(xiǎn)的增加具有較大的影響。但是缺乏對(duì)OPG基因與椎間盤(pán)退變之間聯(lián)系的研究。本部分研究的目的是探討OPG基因3種常見(jiàn)位點(diǎn)多態(tài)性950T/C(rs2073617)、1181G/C(rs2073618)和163A/G(rs3102735)及OPG蛋白表達(dá)水平與椎間盤(pán)退變的關(guān)聯(lián)。方法:選擇2013年1月到2014年5月于我院就診的200例椎間盤(pán)退變患者作為病例組,200例正常健康人作為對(duì)照組。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)檢測(cè)研究對(duì)象OPG基因rs2073617、rs2073618和rs3102735位點(diǎn)基因型和單倍型頻率分布情況,并運(yùn)用采用酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)檢測(cè)血清OPG水平。采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:病例組和對(duì)照組OPG基因rs2073617多態(tài)性的等位基因和基因型頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),攜帶C等位基因可能會(huì)增加椎間盤(pán)退變風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.79(1.33-2.41),P0.001)但兩組rs2073618和rs3102735多態(tài)性等位基因和基因型頻率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。攜帶OPG基因rs2073617多態(tài)性3種不同基因型(TT、TC和CC)椎間盤(pán)退變患者的血清OPG水平均明顯高于健康對(duì)照組(均P0.05)。然而,攜帶rs3102735和rs2073618多態(tài)性不同基因型患者的血清OPG水平與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。單倍型分析結(jié)果顯示,OPG基因G-T-G單倍型可能是椎間盤(pán)退變的保護(hù)性因素(OR=0.216,95%CI=0.081~0.575,P=0.008),而G-C-G單倍型可能為椎間盤(pán)退變的危險(xiǎn)因素(OR=1.862,95%CI=1.179~2.943,P=0.007)。Logistic回歸分析結(jié)果表明:高血清OPG水平與椎間盤(pán)退變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān),而T-C-A、T-G-A和T-G-G單倍型與椎間盤(pán)退變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)(均P0.05)。結(jié)論:OPG基因rs2073617多態(tài)性可能與椎間盤(pán)退變有關(guān),但rs2073618和rs3102735多態(tài)性可能不是增加椎間盤(pán)退變易感性的主要危險(xiǎn)因素。此外,OPG基因T-C-A、T-G-A和T-G-G單倍型可能是椎間盤(pán)退變的保護(hù)性因素,高血清OPG水平則可能是椎間盤(pán)退變的危險(xiǎn)因素。目的:腰椎間盤(pán)退變導(dǎo)致的腰背部疼痛或者是下肢放射痛已經(jīng)是現(xiàn)代人的一種常見(jiàn)病,嚴(yán)重的影響了患者的工作和生活,并且消耗了大量的醫(yī)療資源。椎間盤(pán)退變是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,并且是由多種因素共同參與的一個(gè)慢性過(guò)程。但是,目前對(duì)于椎間盤(pán)退變的始動(dòng)因素及確切的病理生理機(jī)制尚不清楚。所以有必要進(jìn)行更加深入的研究,目的是阻止或者延緩椎間盤(pán)退變的發(fā)生與進(jìn)展。因此,建一個(gè)理想的椎間盤(pán)退變的動(dòng)物模型,對(duì)深入研究椎間盤(pán)退變的始動(dòng)因素及確切的病理生理機(jī)制具有非常重要的作用。同時(shí),一個(gè)理想的椎間盤(pán)退變的動(dòng)物模型有利于研究者們準(zhǔn)確、有效的評(píng)價(jià)各種不同的干預(yù)方式對(duì)椎間盤(pán)退變的影響,能夠?qū)εR床上預(yù)防及治療人椎間盤(pán)退變提供有意義的基礎(chǔ)研究結(jié)果,指導(dǎo)臨床上對(duì)椎間盤(pán)退變的預(yù)防與治療。但是目前許多建立椎間盤(pán)退變的動(dòng)物模型的方法都存在如創(chuàng)傷較大、感染率高、可重復(fù)性差等等問(wèn)題。本研究的目的是尋找一種簡(jiǎn)單、有效、重復(fù)性高的建立椎間盤(pán)退變的動(dòng)物模型的方法。方法:健康成年新西蘭大白兔24只,全身麻醉后采用18G、20G、22G大小穿刺針在C型臂X線機(jī)的輔助下經(jīng)皮分別穿刺L3/4、L4/5、L5/6椎間盤(pán),L6/7椎間盤(pán)作為對(duì)照組不進(jìn)行穿刺。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穿刺術(shù)前完成腰椎X線及MRI檢查,穿刺術(shù)后4周復(fù)查腰椎X線及MRI。在X線檢查結(jié)果上比較穿刺術(shù)前與術(shù)后的目標(biāo)椎間盤(pán)高度指數(shù)的變化,MRI結(jié)果采用改良后的Piffimann椎間盤(pán)評(píng)分評(píng)估穿刺術(shù)前與術(shù)后目標(biāo)椎間盤(pán)信號(hào)的改變情況。術(shù)后4周時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取各組椎間盤(pán)分別采用HE染色、Masson染色、Safranin O染色觀察各組椎間盤(pán)組織的變化。Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察各組髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原的表達(dá)。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件22.0進(jìn)行單因素方差分析和雙向有序卡方檢驗(yàn)。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:24只新西蘭大白兔均順利完成手術(shù),術(shù)中、術(shù)后未出現(xiàn)死亡、癱瘓及傷口感染的情況。術(shù)前及術(shù)后X線片結(jié)果顯示術(shù)后4周時(shí)對(duì)照組、18G穿刺組、20G穿刺組、22G穿刺組各組間DHI%無(wú)顯著性差異(P0.05)。術(shù)前及術(shù)后4周時(shí)腰椎MRI檢查結(jié)果顯示術(shù)前兔腰椎MRI T2加權(quán)像各個(gè)腰椎間盤(pán)均呈高信號(hào),術(shù)后4周兔腰椎間盤(pán)MRI T2加權(quán)像顯示18G穿刺針穿刺后的L3/4椎間盤(pán)呈現(xiàn)明顯低信號(hào)改變,而20G穿刺針穿刺后的L4/5椎間盤(pán)、22G穿刺針穿刺后的L5/6椎間盤(pán)及對(duì)照L6/7椎間盤(pán)仍然呈現(xiàn)高信號(hào)。改良后的Piffimann椎間盤(pán)分級(jí)法將各組結(jié)果進(jìn)行分級(jí),采用雙向有序行×列表的x2檢驗(yàn)計(jì)算出各組分級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明椎間盤(pán)退變程度與穿刺針的大小存在線性相關(guān)關(guān)系。HE染色顯示18G組髓核細(xì)胞數(shù)量明顯減少,20G組髓核細(xì)胞數(shù)量稍減少,22G組和對(duì)照組髓核細(xì)胞數(shù)量均較多。Masson染色顯示18G組纖維環(huán)各層間的裂隙明顯增多,20G組纖維環(huán)各層間裂隙稍有增多,對(duì)照組和22G組纖維環(huán)各層排列均勻,縫隙少。Safranin O染色顯示對(duì)照組和22G組髓核內(nèi)蛋白多糖表達(dá)較20G組和18G組多,20G組次之,18G組表達(dá)最少。Ⅱ型膠原免疫組化染色顯示18G和20G組兔髓核細(xì)胞合成分泌Ⅱ型膠原能力較22G組和對(duì)照組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤(pán)制作椎間盤(pán)退變動(dòng)物模型是安全的、可重復(fù)性高。使用18G和20G的穿刺針經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤(pán)能夠造成椎間盤(pán)的退變,并且18G的穿刺針經(jīng)皮穿刺造成椎間盤(pán)退變的程度更嚴(yán)重。22G的穿刺針經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤(pán)沒(méi)有造成椎間盤(pán)的退變。本研究為椎間盤(pán)退變機(jī)制和再生的研究提供一種理想的動(dòng)物椎間盤(pán)退變模型。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between OPG gene and intervertebral disc degeneration by using polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism ( PCR - RFLP ) . The results showed that the model of lumbar disc degeneration in 18G and G G groups was higher than that of 22G group and 18G group .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.53;R-332

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4 劉q，

本文編號(hào)：1728871