本文選題：骨保護素　切入點：椎間盤退變　出處：《廣西醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:椎間盤退變是導致影響人們生活質(zhì)量的眾多疾病之一,其可表現(xiàn)為下腰痛、椎間盤突出及腰椎管狹窄。其確切的病理機制還不是十分清楚,但是基因和環(huán)境因素起了很大的作用。骨保護素是腫瘤壞死因子超受體家族中的一種含有401個氨基酸殘基的細胞因子受體的糖蛋白,同時也是一種破骨細胞形成抑制因子。它主要由成骨細胞合成,但在其他的器官和組織中也有表達,包括心臟、血管壁、肺臟、腎臟、骨組織。研究認為OPG基因的調(diào)控對骨量及骨折,骨質(zhì)疏松癥和骨關節(jié)炎的風險的增加具有較大的影響。但是缺乏對OPG基因與椎間盤退變之間聯(lián)系的研究。本部分研究的目的是探討OPG基因3種常見位點多態(tài)性950T/C(rs2073617)、1181G/C(rs2073618)和163A/G(rs3102735)及OPG蛋白表達水平與椎間盤退變的關聯(lián)。方法:選擇2013年1月到2014年5月于我院就診的200例椎間盤退變患者作為病例組,200例正常健康人作為對照組。采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)檢測研究對象OPG基因rs2073617、rs2073618和rs3102735位點基因型和單倍型頻率分布情況,并運用采用酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)檢測血清OPG水平。采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。結果:病例組和對照組OPG基因rs2073617多態(tài)性的等位基因和基因型頻率差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),攜帶C等位基因可能會增加椎間盤退變風險(OR=1.79(1.33-2.41),P0.001)但兩組rs2073618和rs3102735多態(tài)性等位基因和基因型頻率均無統(tǒng)計學差異(均P0.05)。攜帶OPG基因rs2073617多態(tài)性3種不同基因型(TT、TC和CC)椎間盤退變患者的血清OPG水平均明顯高于健康對照組(均P0.05)。然而,攜帶rs3102735和rs2073618多態(tài)性不同基因型患者的血清OPG水平與對照組相比均無統(tǒng)計學差異(均P0.05)。單倍型分析結果顯示,OPG基因G-T-G單倍型可能是椎間盤退變的保護性因素(OR=0.216,95%CI=0.081~0.575,P=0.008),而G-C-G單倍型可能為椎間盤退變的危險因素(OR=1.862,95%CI=1.179~2.943,P=0.007)。Logistic回歸分析結果表明:高血清OPG水平與椎間盤退變發(fā)生風險呈正相關,而T-C-A、T-G-A和T-G-G單倍型與椎間盤退變發(fā)生風險呈負相關(均P0.05)。結論:OPG基因rs2073617多態(tài)性可能與椎間盤退變有關,但rs2073618和rs3102735多態(tài)性可能不是增加椎間盤退變易感性的主要危險因素。此外,OPG基因T-C-A、T-G-A和T-G-G單倍型可能是椎間盤退變的保護性因素,高血清OPG水平則可能是椎間盤退變的危險因素。目的:腰椎間盤退變導致的腰背部疼痛或者是下肢放射痛已經(jīng)是現(xiàn)代人的一種常見病,嚴重的影響了患者的工作和生活,并且消耗了大量的醫(yī)療資源。椎間盤退變是一個非常復雜的過程,并且是由多種因素共同參與的一個慢性過程。但是,目前對于椎間盤退變的始動因素及確切的病理生理機制尚不清楚。所以有必要進行更加深入的研究,目的是阻止或者延緩椎間盤退變的發(fā)生與進展。因此,建一個理想的椎間盤退變的動物模型,對深入研究椎間盤退變的始動因素及確切的病理生理機制具有非常重要的作用。同時,一個理想的椎間盤退變的動物模型有利于研究者們準確、有效的評價各種不同的干預方式對椎間盤退變的影響,能夠?qū)εR床上預防及治療人椎間盤退變提供有意義的基礎研究結果,指導臨床上對椎間盤退變的預防與治療。但是目前許多建立椎間盤退變的動物模型的方法都存在如創(chuàng)傷較大、感染率高、可重復性差等等問題。本研究的目的是尋找一種簡單、有效、重復性高的建立椎間盤退變的動物模型的方法。方法:健康成年新西蘭大白兔24只,全身麻醉后采用18G、20G、22G大小穿刺針在C型臂X線機的輔助下經(jīng)皮分別穿刺L3/4、L4/5、L5/6椎間盤,L6/7椎間盤作為對照組不進行穿刺。所有實驗動物穿刺術前完成腰椎X線及MRI檢查,穿刺術后4周復查腰椎X線及MRI。在X線檢查結果上比較穿刺術前與術后的目標椎間盤高度指數(shù)的變化,MRI結果采用改良后的Piffimann椎間盤評分評估穿刺術前與術后目標椎間盤信號的改變情況。術后4周時處死實驗動物取各組椎間盤分別采用HE染色、Masson染色、Safranin O染色觀察各組椎間盤組織的變化。Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察各組髓核細胞Ⅱ型膠原的表達。采用統(tǒng)計學軟件22.0進行單因素方差分析和雙向有序卡方檢驗。P0.05被認為有統(tǒng)計學意義。結果:24只新西蘭大白兔均順利完成手術,術中、術后未出現(xiàn)死亡、癱瘓及傷口感染的情況。術前及術后X線片結果顯示術后4周時對照組、18G穿刺組、20G穿刺組、22G穿刺組各組間DHI%無顯著性差異(P0.05)。術前及術后4周時腰椎MRI檢查結果顯示術前兔腰椎MRI T2加權像各個腰椎間盤均呈高信號,術后4周兔腰椎間盤MRI T2加權像顯示18G穿刺針穿刺后的L3/4椎間盤呈現(xiàn)明顯低信號改變,而20G穿刺針穿刺后的L4/5椎間盤、22G穿刺針穿刺后的L5/6椎間盤及對照L6/7椎間盤仍然呈現(xiàn)高信號。改良后的Piffimann椎間盤分級法將各組結果進行分級,采用雙向有序行×列表的x2檢驗計算出各組分級差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明椎間盤退變程度與穿刺針的大小存在線性相關關系。HE染色顯示18G組髓核細胞數(shù)量明顯減少,20G組髓核細胞數(shù)量稍減少,22G組和對照組髓核細胞數(shù)量均較多。Masson染色顯示18G組纖維環(huán)各層間的裂隙明顯增多,20G組纖維環(huán)各層間裂隙稍有增多,對照組和22G組纖維環(huán)各層排列均勻,縫隙少。Safranin O染色顯示對照組和22G組髓核內(nèi)蛋白多糖表達較20G組和18G組多,20G組次之,18G組表達最少。Ⅱ型膠原免疫組化染色顯示18G和20G組兔髓核細胞合成分泌Ⅱ型膠原能力較22G組和對照組明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤制作椎間盤退變動物模型是安全的、可重復性高。使用18G和20G的穿刺針經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤能夠造成椎間盤的退變,并且18G的穿刺針經(jīng)皮穿刺造成椎間盤退變的程度更嚴重。22G的穿刺針經(jīng)皮微創(chuàng)穿刺兔腰椎間盤沒有造成椎間盤的退變。本研究為椎間盤退變機制和再生的研究提供一種理想的動物椎間盤退變模型。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between OPG gene and intervertebral disc degeneration by using polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism ( PCR - RFLP ) . The results showed that the model of lumbar disc degeneration in 18G and G G groups was higher than that of 22G group and 18G group .

【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R681.53;R-332

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本文編號：1728871