本文選題：嗆咳反應(yīng)　切入點(diǎn)：腦損傷　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景 咳嗽是人體清除呼吸道內(nèi)的分泌物或異物的保護(hù)性呼吸反射動作。當(dāng)病人患有神經(jīng)肌肉疾病時(shí),呼吸系統(tǒng)疾病也會增加,其中原因不僅只有吸氣困難而且還包含排除異物咳嗽反射機(jī)制受損等因素�？人缘恼{(diào)控中樞主要在腦干,其中咳嗽的特點(diǎn)是巨大的胸腔內(nèi)的壓力產(chǎn)生強(qiáng)力的氣流將有害物質(zhì)逼出體外。咳嗽效應(yīng)是由呼氣的容量和最大的呼氣氣流速度決定的,簡單有效的咳嗽實(shí)施包含氣流的三個(gè)時(shí)期：吸氣時(shí)期,氣流壓縮時(shí)期,呼氣時(shí)期。當(dāng)志愿者帶上面具并且吸入200umol/L的辣椒素誘發(fā)五次咳嗽反射,其中定義第一個(gè)誘發(fā)的咳嗽為：吸氣僅跟隨聲門關(guān)閉并同時(shí)壓縮氣體,接著聲門開放氣流快速噴出。通過測量咳嗽吸氣容積和總共呼氣容量得出：呼氣的容量大于吸入容量的2到2.5倍。在嗆咳過程中呼出空氣遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于吸入的空氣。病理生理發(fā)現(xiàn)嗆咳反應(yīng)、心源性咳嗽對機(jī)體并沒有防御的作用,嗆咳時(shí)胸腔內(nèi)壓驟然增加,可引起暫時(shí)性血壓升高刺激頸動脈竇使其反應(yīng)過度引起暈厥。那么在圍顱腦手術(shù)后蘇醒期,嗆咳反應(yīng)是否會對病人造成繼發(fā)性腦損傷呢?腦損傷S100B蛋白、腦水腫相關(guān)的ICAM-1是我們本實(shí)驗(yàn)判斷腦損傷的主要指標(biāo)；由星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的S100B蛋白可以作為輕度腦損害程度的標(biāo)志物,生理濃度下S100B在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮著營養(yǎng)作用,具有神經(jīng)營養(yǎng)作用,促進(jìn)神經(jīng)的生長和修復(fù)；高濃度則具細(xì)胞毒性,抑制細(xì)胞的生長,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,甚至誘導(dǎo)神經(jīng)元的壞死。鼠腦卒中模型中腦損傷3小時(shí)后,細(xì)胞間粘附分子ICAM-1表達(dá)增加,并持續(xù)增高5天。為此,我們構(gòu)建了犬鉆顱左頂葉部分切除的顱腦手術(shù)模型,然后誘發(fā)嗆咳反射的建立嗆咳反射動物模型,分析嗆咳反應(yīng)后家犬的平均動脈壓、心率、硬膜外顱內(nèi)壓、免疫組化S100B蛋白、ICAM-1表達(dá)差異,探討嗆咳加重顱腦術(shù)后的腦出血以及繼發(fā)性腦損傷的影響。 目的 構(gòu)建家犬腦手術(shù)后蘇醒期誘發(fā)嗆咳反射的動物模型,通過抽取誘發(fā)嗆咳反應(yīng)前后的外周靜脈血,全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測嗆咳前和嗆咳后S100B蛋白的外周血濃度,觀察光鏡顱腦手術(shù)后嗆咳反射腦組織的病理、免疫組化S100B蛋白、ICAM-1(CD54)表達(dá)強(qiáng)度的差異以及顱內(nèi)壓、心血管反應(yīng)等證據(jù),充分評估嗆咳對犬腦的影響,探討嗆咳反應(yīng)與顱腦手術(shù)后繼發(fā)性腦損傷以及S100B和ICAM-1表達(dá)相關(guān)性,為減輕顱腦手術(shù)后嗆咳反應(yīng)及干預(yù)治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 選用實(shí)驗(yàn)中心的健康家犬作為動物研究對象,根據(jù)完全隨機(jī)化原則,將30只動物分為兩組,A組(n=10)接受手術(shù)后吸入辣椒素誘發(fā)嗆咳、B組(n=10)接受手術(shù)后追加肌松藥再吸入辣椒素、C組(n=10)接受手術(shù)后吸入霧化生理鹽水：體重為10.5-15kg。三組動物術(shù)前備皮、禁食禁飲8小時(shí),大隱靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg、順苯磺酸阿曲庫銨0.1mg/kg麻醉后用大號光纖維麻醉喉鏡行氣管插管,純氧機(jī)械通氣維持血氧飽和度100%,股動脈穿刺測平均動脈壓。常規(guī)安爾碘消毒。鋪無菌單于頂部,圓刀在中線切開頭皮,外側(cè)牽開皮膚、皮下組織,自顱骨表面分離顳肌,皮瓣絲線固定于左耳。雙極電凝止血后,在冠狀縫與矢狀縫交界左側(cè)顱骨處用顱骨鉆開一直徑為1cm的骨窗,繼續(xù)咬骨鉗稍微擴(kuò)大骨窗,前界離冠狀縫0.3cm,內(nèi)界離矢狀縫0.3cm,十字狀剪開硬腦膜,小圓刀切取頂葉腦組織0.1cm×0.1cm×0.1cm,無菌腦棉片止血、沖洗潔凈后,顱骨鉆孔后貼近硬腦膜將傳感器置于硬膜外。硬膜外的壓力可以傳遞到壓力換能器進(jìn)行測壓,骨蠟封窗,觀察無出血后,縫合手術(shù)切口�；謴�(fù)自主呼吸時(shí),A組經(jīng)氣管導(dǎo)管吸入含有定量霧化濃度為1000umol/L辣椒素溶液激發(fā)嗆咳反應(yīng),嗆咳次數(shù)≥5次后終止吸入；B組靜脈追加順苯磺酸阿曲庫銨0.1mg/kg再吸入等濃度辣椒素；C組吸入霧化生理鹽水。記錄時(shí)間點(diǎn)：術(shù)前1小時(shí)(T1)、吸入霧化液瞬間(T2)、吸入霧化液后1min(T3)、吸入霧化液后5min(T4)動物心率、有創(chuàng)平均動脈壓、顱內(nèi)壓等生命體征。在24h后復(fù)查頭顱CT,收集數(shù)據(jù)后三組動物全部以10%KCL15-20ml經(jīng)大隱靜脈快速推注處死。先開顱大體觀察手術(shù)創(chuàng)面有無出血及血腫,然后切取距離創(chuàng)面2cm周圍腦組織,大小為1.5cm×1.5cm×1.5cm。取標(biāo)本后浸泡在10%福爾馬林中,并以不同組別標(biāo)記的保鮮盒封存。 指標(biāo)檢測方案：靜脈血抽取時(shí)間為實(shí)驗(yàn)前抽取2m1,在吸入霧化液后5min,血清運(yùn)用全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析(cobas e601)模塊檢測。飛利浦v24E監(jiān)護(hù)儀檢測血流動力學(xué),頭顱CT掃描以16層螺旋CT拍攝,腦組織標(biāo)本以蘇木靜-尹紅(hematoxylin-eosin,HE)染色法觀察腦損傷病理改變。免疫組織化學(xué)SP法檢測大腦皮質(zhì)S100B、ICAM-1表達(dá)情況。采用OLYMPUS圖像分析儀系統(tǒng)采集并計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)。計(jì)量資料比較采用One-Way ANOVA;完全隨機(jī)設(shè)計(jì)等級計(jì)數(shù)資料用q檢驗(yàn),全部數(shù)據(jù)采用Spss13.0for windows分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：(1)臨床觀察及影像結(jié)果：A組有一只手術(shù)后出現(xiàn)寒顫、抽搐,短時(shí)間(6小時(shí))內(nèi)迅速死亡,打開切口2發(fā)現(xiàn)硬膜下血腫。三組動物手術(shù)后放置于飼養(yǎng)室內(nèi)的隔離籠子中,A組2.15±0.29自然蘇醒,B組動物為2.10±0.15h,C組為2.45±0.20h,三組蘇醒的時(shí)間比較差異無顯著性；監(jiān)護(hù)儀采集數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：A組T2時(shí)平均動脈壓153.18±8.12mmhg,心率131.90±1.30次／分；B組T2的平均動脈壓145.20±6.50mmhg、心率120.81±3.30次／分；C組123.16±4.26mmhg、心率118.60±1.40次／分。T2的平均動脈壓經(jīng)硬膜外顱內(nèi)壓檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：A組為24.81±8.91mmhg、B組為13.60±2.16mmhg, C組為12.45±1.36mmhg,家犬嗆咳時(shí)平均動脈壓和心率A組比B、C組明顯增高,顱內(nèi)壓檢測A組比B、C組高,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 影像結(jié)果： (1)16層CT(圖5)A組顯示局部手術(shù)創(chuàng)面腦組織有水腫,側(cè)腦室有輕度擴(kuò)張、B組局部創(chuàng)面水腫不明顯,側(cè)腦室無明顯擴(kuò)張。 (2)病理結(jié)果：HE染色A組大體觀察發(fā)現(xiàn)蛛網(wǎng)膜下腔有出血,創(chuàng)面外周也可見軟腦膜血管充血,創(chuàng)面標(biāo)本神經(jīng)元細(xì)胞水腫,周圍出現(xiàn)空隙,高倍鏡發(fā)現(xiàn)胞核破碎溶解,神經(jīng)元腫脹、部分壞死消失,周圍膠質(zhì)細(xì)胞增生。B、C組大體神經(jīng)元形態(tài)、結(jié)構(gòu)清晰正常,創(chuàng)面標(biāo)本神經(jīng)元細(xì)胞也有水腫,高倍鏡神經(jīng)元見部分神經(jīng)元腫脹、核淡染。 (2)電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA"測得未進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前的所有家犬的平均水平(0.10±0.05ng/ml)、A組嗆咳后5min外周血S100蛋白含量(0.54±0.31ng/ml)、B組同一時(shí)間點(diǎn)抽取的為含量(0.31±0.20ng/ml)、C組為(0.30±0.18ng/ml)。數(shù)據(jù)處理：采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的多個(gè)樣本均數(shù)比較和樣本均數(shù)間的多重比較(one-way ANOVA), S100B蛋白含量A組比B、C組明顯高(分別為P=0.0044和P=0.003),B組與C組之間無顯著差異(P=0.279)。 (3)免疫組織化學(xué)：光鏡下三組均有S100B表達(dá),陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕黃色,定位于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞膜,在A組中表達(dá)最為明顯,主要在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞膜中以及細(xì)胞間隙可見大量的S100B顆粒,S100在B、C組頂葉皮質(zhì)中也有少量表達(dá),部分見S100B顆粒,等級資料經(jīng)SNK (q檢驗(yàn))分析,S100B表達(dá)程度在三組之間存在差異,進(jìn)一步計(jì)算A組嗆咳后S100蛋白顯著高于B、C組(P0.01)給予肌松藥后B組吸入霧化辣椒素與C組吸入生理鹽水S100蛋白表達(dá)無顯著差異(P0.05) ICAM-1免疫陽性細(xì)胞呈現(xiàn)深黃色或者褐色,主要定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞上。A組可見血管內(nèi)皮細(xì)胞和少量腦皮層脈絡(luò)血管內(nèi)皮。免疫染色計(jì)數(shù)如下：q檢驗(yàn)分析,免疫組化結(jié)果A組與B、C組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),A組嗆咳后ICAM-1表達(dá)顯著高于B、C組,B、C組ICAM-1蛋白表達(dá)無顯著差異(P0.05)。 q檢驗(yàn)分析,免疫組化結(jié)果A組與B、C組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),A組嗆咳后ICAM-1表達(dá)顯著高于B、C組,B組與C組ICAM-1蛋白表達(dá)無顯著差異(P0.05)。 結(jié)論：(1)鉆顱頂葉部分切除手術(shù)制作模型及吸入霧化辣椒素嗆咳模型穩(wěn)定性好、24小時(shí)存活率高,定量霧化吸入辣椒素液可有效控制嗆咳次數(shù),適合動態(tài)觀察嗆咳后的病理生理變化。 (2)蘇醒期嗆咳反應(yīng)增加犬腦手術(shù)后血流動力學(xué)的不穩(wěn)定性和增高顱內(nèi)壓。 (3)正常時(shí)家犬皮質(zhì)中神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有少量S100B免疫陽性細(xì)胞表達(dá)、在腦損傷后腦水腫區(qū)域表達(dá)S100B蛋白以及ICAM-1更加顯著。損傷后S100B蛋白表達(dá)增加與損傷處ICAM-1的表達(dá)增加呈現(xiàn)正相關(guān)性。研究表明損傷處神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞S100B的釋放可伴隨附近血管內(nèi)皮粘附因子ICAM-1表達(dá)增加。 (4)在開顱手術(shù)24小時(shí)后,皮質(zhì)腦組織SIOOB、ICAM-1蛋白的表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)A組比B、C組更加顯著,嚴(yán)重的嗆咳反應(yīng)不利于顱腦手術(shù)后的病人腦組織修復(fù),甚至加重腦水腫、腦出血等繼發(fā)性腦損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1728837