本文選題：高血壓　切入點(diǎn)：血管重構(gòu)　出處：《山東大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：原發(fā)性高血壓(Essential hypertension, EH)是目前最常見的心血管疾病之一,是全球范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前,高血壓對(duì)人類健康最大的危害是其造成的主動(dòng)脈、心臟、腦等重要靶器官的結(jié)構(gòu)與功能的損害。高血壓患者罹患心腦血管意外的概率遠(yuǎn)高于非高血壓患者,因此保護(hù)高血壓患者心腦等重要靶器官的功能是目前高血壓治療的關(guān)鍵。現(xiàn)已證實(shí)血管重構(gòu)(vascular remodeling, VR)與高血壓導(dǎo)致的靶器官損害有著密切關(guān)系,研究高血壓狀態(tài)下血管重構(gòu)的相關(guān)機(jī)制具有重要意義。 隨著人們對(duì)于高血壓血管重構(gòu)的深入研究,發(fā)現(xiàn)血管重構(gòu)的發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜,目前已公認(rèn)血管活性物質(zhì)、血液動(dòng)力學(xué)、遺傳和神經(jīng)體液等多種因素均參與了血管重構(gòu),但其確切發(fā)生機(jī)制尚不明確。若能確定在血管重構(gòu)中起重要作用的關(guān)鍵分子,則將為高血壓的防治提供新靶點(diǎn),蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)提供了契機(jī)。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)生命活動(dòng)的最終體現(xiàn)者,具有時(shí)空性和可調(diào)節(jié)性。高血壓模型主動(dòng)脈組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究,能夠提供主動(dòng)脈對(duì)于在高血壓狀態(tài)所作反應(yīng)的特定早期分子,通過(guò)進(jìn)一步驗(yàn)證所發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)分子的功能和其在高血壓血管重構(gòu)中的作用,可成為高血壓的早期診斷和治療提供重要靶點(diǎn)。 本研究分析了不同周齡自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR)與WYK大鼠主動(dòng)脈組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),其中前纖維蛋白(Profilin-1)引人矚目。Profilin-1是一種廣泛存在于除骨骼肌之外其他機(jī)體組織的,約15kd大小的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,其主要參與了肌動(dòng)蛋白的聚合及解聚；并與細(xì)胞的增殖、分化和運(yùn)動(dòng)過(guò)程以及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)。研究證實(shí),Profilin-1在動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等血管損傷中,尤其在高血壓血管重構(gòu)中起著重要作用。利用體內(nèi)腺病毒注射技術(shù),我們研究了體內(nèi)干擾／過(guò)表達(dá)Profilin-1后SHR大鼠和WYK大鼠的病理生理變化,進(jìn)一步探討了Profilin-1在高血壓血管重構(gòu)中的作用機(jī)制。 第一部分 不同周齡自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈組織的蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景 蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)生命活動(dòng)的最終體現(xiàn)者,蛋白質(zhì)組學(xué)即是研究組織或細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的組成、動(dòng)態(tài)變化規(guī)律等的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是一個(gè)比基因組學(xué)研究更加復(fù)雜的,新的研究領(lǐng)域。它通過(guò)分析組織、細(xì)胞內(nèi)所有蛋白質(zhì)的構(gòu)成、表達(dá)以及修飾情況,并進(jìn)一步分析他們之間的相互作用,進(jìn)而從整體上闡明生命活動(dòng)的本質(zhì)和規(guī)律。蛋白質(zhì)的表達(dá)具有時(shí)空性和可調(diào)節(jié)性,其在執(zhí)行功能時(shí)并不像基因組那樣是基本固定的,而是動(dòng)態(tài)多樣的,同時(shí)多個(gè)蛋白總是相互作用,共同參與同一生命活動(dòng)中。蛋白質(zhì)組學(xué)為生命科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究提供了新的方法和思路。 比較蛋白質(zhì)組學(xué)(comparative proteomics)是通過(guò)一定的技術(shù)和方法來(lái)比較分析蛋白質(zhì)組,從而鑒定出有表達(dá)差異的蛋白或者蛋白質(zhì)群。近年來(lái)比較蛋白質(zhì)組學(xué)被人們?cè)絹?lái)越多的用到醫(yī)學(xué)研究中。比較蛋白質(zhì)組學(xué)主要是比較正常和病理的個(gè)體的蛋白質(zhì)組,發(fā)現(xiàn)在疾病中特異表達(dá)的蛋白質(zhì),而這些特異分子即可以用于疾病的早期診斷和治療中。同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)是一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)定量研究技術(shù)。iTRAQ可以同時(shí)最多對(duì)8種不同的樣品來(lái)進(jìn)行絕對(duì)和相對(duì)定量,不需要凝膠,而是使用基于高度敏感和精確的串聯(lián)質(zhì)譜方法獲得相對(duì)定量結(jié)果和絕對(duì)定量信息。 高血壓狀態(tài)下,血管重構(gòu)發(fā)生發(fā)展的原因具有多重性和復(fù)雜性。現(xiàn)已確定,血管的內(nèi)膜、中膜和外膜等多種成分均參與了血管重構(gòu)過(guò)程,另外,血流動(dòng)力學(xué)、血管活性物質(zhì)、神經(jīng)體液因素以及炎癥和氧化應(yīng)激均參與其中。若能確定在血管重構(gòu)中起重要作用的關(guān)鍵分子,則將為高血壓的防治提供新靶點(diǎn),蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)提供了契機(jī)。本研究使用iTRAQ研究不同周齡SHR大鼠與WKY大鼠主動(dòng)脈組織中差異表達(dá)的蛋白,為高血壓防治提供了新的方向。 研究目的 1.研究SHR大鼠主動(dòng)脈病變的特點(diǎn),觀察5周齡和17周齡SHR大鼠血壓、體重及主動(dòng)脈的病變情況； 2.應(yīng)用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分別研究5周齡SHR大鼠與同周齡WKY大鼠主動(dòng)脈的差異表達(dá)蛋白,17周齡SHR大鼠與同周齡WKY大鼠主動(dòng)脈的差異表達(dá)蛋白； 3.比較17周齡差異表達(dá)蛋白并驗(yàn)證部分關(guān)鍵差異蛋白的表達(dá)情況,進(jìn)一步確定高血壓狀態(tài)下血管重構(gòu)發(fā)生發(fā)展的靶位蛋白及可能機(jī)制。 研究方法 選取5周齡和17周齡雄性SHR大鼠各6只,以及同周齡的雄性WKY大鼠各6只,分別分為4組：S5組,S17組,W5組,W17組。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,測(cè)量各組大鼠血壓和體重情況。 1.主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)研究：用乙醚麻醉動(dòng)物后,迅速分離各組大鼠主動(dòng)脈組織,置入4%多聚甲酸中固定,石蠟包埋后切片,行HE染色和天狼猩紅染色并測(cè)量血管壁厚度,管壁/管徑比,膠原含量百分比。應(yīng)用透射電鏡觀察主動(dòng)脈組織超微結(jié)構(gòu)變化。 2.蛋白質(zhì)組學(xué)研究：提取各組大鼠主動(dòng)脈總蛋白,后用trypsin消化蛋白得到肽段。用iTRAQ試劑標(biāo)記消化后的肽段：用113標(biāo)記5周齡WKY大鼠組(W5組),114標(biāo)記5周齡SHR大鼠組(S5組),115標(biāo)記17周齡WKY大鼠組(W17組),116標(biāo)記17周齡SHR大鼠組(S17組)。將標(biāo)記的肽段混合后運(yùn)用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱(strong cation exchange, SCX)和C18柱進(jìn)行分級(jí)分離,最后用MALDI-TOF/TOF和microQ-TOF進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。使用相關(guān)軟件合并并處理定量及檢測(cè)所得的結(jié)果。最后,使用Panther軟件對(duì)差異蛋白進(jìn)行分子定位,分子功能和生物過(guò)程分析。 3.部分差異蛋白功能驗(yàn)證：使用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組大鼠主動(dòng)脈中關(guān)鍵差異蛋白前纖維蛋白1(Profilin-1),絲切蛋白1(Cofilin-1)和極長(zhǎng)鏈�；o酶A脫氫酶(Acyl-Coenzyme A dehydrogenase, very long chain; ACADVL)的蛋白表達(dá)情況。使用PCR技術(shù)檢測(cè)Profilin-1和Cofilin-1的mRNA表達(dá)情況。 研究結(jié)果 1.各組大鼠主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化 HE染色顯示,W5組大鼠主動(dòng)脈形態(tài)大致正常,主動(dòng)脈各層分界清楚。血管內(nèi)膜光滑,血管中膜彈性纖維呈同心圓排列,中膜無(wú)增厚,平滑肌排列規(guī)則,無(wú)肥大增生。W17組和S5組大鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)輕微血管重構(gòu)情況,主動(dòng)脈內(nèi)膜增生不明顯,部分內(nèi)膜脫落；中膜彈性纖維形態(tài)不規(guī)則,部分出現(xiàn)斷裂,平滑肌細(xì)胞無(wú)增生。S17組大鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)明顯的血管重構(gòu)表現(xiàn),血管損傷較W17組和S5組均加重。發(fā)現(xiàn)與同齡WK.Y大鼠相比,SHR組大鼠管壁厚度和管壁／管徑比均增高。天狼猩紅染色顯示17周齡SHR組大鼠中膜可見膠原沉積,膠原面積顯著高于17周齡WKY組大鼠。5周齡SHR組大鼠和17周齡WKY組大鼠膠原沉積情況無(wú)明顯差異,5周齡WKY大鼠血管中膜中無(wú)膠原沉積現(xiàn)象。 透射電鏡下W5組血管平滑肌細(xì)胞核形態(tài)正常,細(xì)胞器分布及核染色質(zhì)正常。S5組平滑肌細(xì)胞無(wú)明顯異常,但平滑肌細(xì)胞與彈性膜的排列紊亂。W17組的管腔側(cè)可見凹陷,主要是由內(nèi)膜脫落造成,彈力膜不均勻,膠原成分可見。S17組可見平滑肌細(xì)胞與彈力膜的排列完全紊亂,平滑肌細(xì)胞表型改變顯著,彈力膜內(nèi)大量膠原成分的出現(xiàn)。 2. iTRAQ質(zhì)譜鑒定結(jié)果 經(jīng)質(zhì)譜鑒定,在W5組和S5組大鼠主動(dòng)脈中差異表達(dá)蛋白共92個(gè),其中1.5倍以上差異蛋白8個(gè)；W17組和S17組大鼠主動(dòng)脈中差異表達(dá)蛋白94個(gè),其中1.5倍以上差異蛋白18個(gè)。 S5組和W5組的差異蛋白中僅有2個(gè)(ACADVL和Profilin-1)在W17組和S17組中有1.5倍以上的差異表達(dá),其他蛋白差異表達(dá)均在1.5倍以下。W17組和S17組主動(dòng)脈差異表達(dá)蛋白在S5組和W5組均有差異表達(dá),但除卻上述提到了2個(gè)蛋白外,其他蛋白在5周時(shí)表達(dá)均在1.5倍以下。 3.差異蛋白的定位分析(subcellular localization) 通過(guò)Panther軟件分析差異蛋白的細(xì)胞定位,W17組和S17組的差異蛋白定位主要包括細(xì)胞內(nèi)(32.9%),細(xì)胞器內(nèi)(27.4%),細(xì)胞外部分(12.3%),細(xì)胞膜成分(8.2%),細(xì)胞外基質(zhì)(6.8%),大分子復(fù)合物(6.8%)。 4.差異蛋白的分子功能(molecular function)及參與的生物過(guò)程分析(biological process) 17周SHR大鼠和WKY大鼠的差異蛋白主要涉及催化活性(catalytic activity)、結(jié)構(gòu)分子活性(structural molecule activity)、結(jié)合功能(?)(binding)、受體活性(receptor activity)和酶調(diào)節(jié)活性(enzyme regulator activity)等分子功能。其參與的生物過(guò)程主要包括代謝過(guò)程(metabolic process)、細(xì)胞過(guò)程(cellular process)、生長(zhǎng)過(guò)程(development process)、多種細(xì)胞器過(guò)程(multicellular organismal process)和細(xì)胞定位(location)等。 5.部分差異蛋白在主動(dòng)脈組織的表達(dá)改變 為驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定出的部分差異蛋白在4組大鼠主動(dòng)脈組織中的表達(dá),本研究應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)了關(guān)鍵差異蛋白：Profilin-1, Cofilin-1和ACADVL的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示,骨架蛋白Profilin-1和Cofilin-1在同周齡的SHR大鼠中表達(dá)均高于WKY大鼠,且在17周齡大鼠中其差異表達(dá)更明顯。ACADVL在同周齡SHR大鼠中表達(dá)較WKY大鼠均有所下降。用PCR技術(shù)檢測(cè)Profilin-1和Cofilin-1的mRNA表達(dá)情況,證實(shí)兩種蛋白的InRNA表達(dá)與上述Western blot檢測(cè)的蛋白表達(dá)水平一致。 結(jié)論 (1) iTRAQ技術(shù)是比較蛋白質(zhì)組學(xué)的新技術(shù),靈敏性高,重復(fù)度好,可用于篩選高血壓相關(guān)的差異蛋白,以尋找高血壓的蛋白標(biāo)志物,闡明其發(fā)病機(jī)制。 (2)17周齡WKY大鼠因血管老齡化出現(xiàn)血管重構(gòu)現(xiàn)象,17周齡SHR大鼠血管重構(gòu)較17周齡WKY大鼠明顯加重,其血管重構(gòu)是因?yàn)楦哐獕汉脱芾匣瘍煞矫嬖颉?(3)定位于胞漿的骨架蛋白和位于線粒體的能量代謝相關(guān)蛋白的差異蛋白在高血壓的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。 (4)部分在5周齡SHR大鼠中有差異性表達(dá)的蛋白,在17周齡中并沒有差異性表達(dá),證明某些蛋白只在高血壓早期發(fā)揮了作用。 第二部分 Profilin-1在自發(fā)性高血壓大鼠血管重構(gòu)中的作用機(jī)制研究研究背景 氧化應(yīng)激是導(dǎo)致高血壓的重要原因,高血壓狀態(tài)下可檢測(cè)到活性氧(reactive oxygen species, ROS)產(chǎn)生增多。高血壓狀態(tài)下的血管重構(gòu)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,是血管對(duì)刺激的復(fù)雜的動(dòng)態(tài)反應(yīng)過(guò)程,其主要過(guò)程不僅包括細(xì)胞增殖、凋亡和遷移,同樣包括基質(zhì)成分的合成、分解以及重新排列。氧化與抗氧化系統(tǒng)間的平衡紊亂參與了上述各個(gè)環(huán)節(jié),從而導(dǎo)致了血管重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展。 本研究第一部分用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出的差異蛋白中,前纖維蛋白(Profilin-1)尤為引人矚目。Profilin-1是一種廣泛存在于除骨骼肌之外其他機(jī)體組織的,約15kd大小的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,其主要參與了肌動(dòng)蛋白的聚合及解聚；并與細(xì)胞的增殖、分化和運(yùn)動(dòng)過(guò)程以及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)�，F(xiàn)已證實(shí)Profilin-1可促進(jìn)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、Jun氨基末端激酶(JNK)及p38MAPK的磷酸化水平增加,從而在動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等血管損傷過(guò)程中起到重要作用。此外,也有報(bào)道證實(shí)Profilin-1可以促進(jìn)血管中的氧化應(yīng)激水平,促使動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí),ROS可以促進(jìn)血管重構(gòu)。ROS參與了高血壓血管重構(gòu)的各個(gè)過(guò)程,它可以導(dǎo)致內(nèi)皮功能失調(diào)、血管中膜增厚,平滑肌細(xì)胞遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)。ROS家族中的H2O2, ONOO-和HOCL等均在高血壓血管重構(gòu)中發(fā)揮著重要作用。其中,ONOO-可以通過(guò)氧化／硝基化作用硝化酪氨酸,對(duì)血管內(nèi)皮等造成嚴(yán)重?fù)p傷。心血管系統(tǒng)中ONOO-的生成主要與NO的產(chǎn)生相關(guān),在血管中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)可以催化合成大量的NO,生成高濃度的ONOO-。 ONOO-是一個(gè)強(qiáng)氧化劑分子,它可以通過(guò)促進(jìn)氧化損傷而造成內(nèi)皮損傷,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的喪失、血小板粘附和血管調(diào)節(jié)異常,從而影響內(nèi)皮功能；此外,ONOO-還可以激活與血管重構(gòu)密切相關(guān)的JNK信號(hào)通路,ERK1/2信號(hào)通路。本研究采用SHR大鼠模型證實(shí),ONOO-與高血壓狀態(tài)下血管重構(gòu)有著密切的關(guān)系。 研究目的 1.實(shí)現(xiàn)SHR大鼠Profilin-1過(guò)表達(dá)腺病毒載體和Profilin-1干擾腺病毒載體的體內(nèi)轉(zhuǎn)染,觀察Profilin-1對(duì)SHR大鼠血管重構(gòu)的影響； 2.檢測(cè)SHR大鼠體內(nèi)炎癥和氧化應(yīng)激水平的變化,并探討Profilin-1對(duì)于氧化應(yīng)激的作用及其在血管重構(gòu)中的作用機(jī)制； 3.在分子水平闡述Profilin-1對(duì)于高血壓血管重構(gòu)的作用機(jī)制。 研究方法 5周齡雄性SHR大鼠75只,同周齡雄性WKY大鼠20只,適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。SHR隨機(jī)分為3組：過(guò)表達(dá)組(SHR-E組)25只,干擾組(SHR-I組)25只,對(duì)照組(SHR-C組)25只。各組大鼠通過(guò)尾靜脈注射分別給予3*109單位相應(yīng)病毒載體兩次,兩次之間相隔6周。第一次注射3周后,分別處死各SHR組大鼠中每組5只大鼠。第二次注射6周后,處死其余大鼠。SHR-E組給予Profilin-1過(guò)表達(dá)腺病毒載體注射；SHR-I組給予Profilin-1干擾腺病毒載體注射；SHR-C組和WKY組給予陰性對(duì)照腺病毒載體注射。 1.實(shí)驗(yàn)開始前及實(shí)驗(yàn)中每周均測(cè)量大鼠體重各1次,并使用大鼠尾動(dòng)脈間接測(cè)量法(尾套法)測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。 2.留取轉(zhuǎn)染3周的15只SHR大鼠的主動(dòng)脈組織,檢測(cè)血管重構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化,以及profilin-1, iNOS, p-p38的蛋白表達(dá)情況,并測(cè)定硝基酪氨酸含量。 3.第二次注射6周后處死大鼠,制作主動(dòng)脈冰凍切片,于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá),以確定轉(zhuǎn)染效率；并檢測(cè)主動(dòng)脈組織中Profilin-1蛋白質(zhì)和]mRNA表達(dá)情況,確定轉(zhuǎn)染效率。 4.留取血清進(jìn)行NO,IL-6檢查。制作主動(dòng)脈石蠟切片進(jìn)行HE染色、天狼猩紅飽-苦味酸染色觀察主動(dòng)脈形態(tài)。進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)相關(guān)蛋白在主動(dòng)脈中的定位表達(dá)情況。并留取組織凍存,進(jìn)行Western Blot和Real-time PCR檢測(cè)。 研究結(jié)果 1.血壓和體重情況 12周實(shí)驗(yàn)期間,各組大鼠體重之間差異不大。各SHR組大鼠的血壓隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行逐漸升高,而WKY大鼠血壓變化不大,但各組SHR大鼠血壓之間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.腺病毒在大鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率 制作各組大鼠主動(dòng)脈冰凍切片,并在熒光顯微鏡下觀察大鼠主動(dòng)脈壁綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表達(dá)情況。接受腺病毒載體注射大鼠,其主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞內(nèi)均有GFP的表達(dá)；而生理鹽水組主動(dòng)脈內(nèi)未見GFP的表達(dá),證明體內(nèi)轉(zhuǎn)染有效。 檢測(cè)各組大鼠主動(dòng)脈Profilin-1蛋白及mRNA表達(dá)情況,結(jié)果顯示,與SHR-C組相比,Profilin-1蛋白及mRNA表達(dá)在SHR-E組均明顯升高(P0.05),而在SHR-I組則降低(P0.05),進(jìn)一步證明profilin-1過(guò)表達(dá)／干擾腺病毒體內(nèi)轉(zhuǎn)染有效。 3. Profilin-1轉(zhuǎn)染3周對(duì)大鼠主動(dòng)脈的影響 第一次腺病毒注射3周后,從SHR-E、SHR-C、SHR-I三組大鼠中,每組處死5只大鼠,觀察profilin-1過(guò)表達(dá)／干擾腺病毒轉(zhuǎn)染對(duì)于大鼠主動(dòng)脈的影響。三組大鼠主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),三組大鼠主動(dòng)脈形態(tài)、血管內(nèi)徑、血管壁厚度以及血管壁／管腔比值沒有顯著性差異。血管形態(tài)大致正常。 Western blot檢測(cè)三組大鼠主動(dòng)脈profilin-1, iNOS, p-p38的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示,三種蛋白在各組大鼠之間表達(dá)趨勢(shì)一致,即SHR-E組大鼠三種蛋白表達(dá)均高于SHR-C組,而SHR-I組大鼠中三種蛋白表達(dá)降低。iNOS免疫組化染色所顯示趨勢(shì)同Western blot結(jié)果一致。 通過(guò)進(jìn)行硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)染色來(lái)評(píng)價(jià)血管內(nèi)過(guò)亞硝酸根(Peroxynitrite, ONOO-)含量,SHR-E組的染色面積和H評(píng)分較SHR-C組明顯增加,但SHR-I組則表現(xiàn)出顯著的下降(P0.05)。 4. Profilin-1轉(zhuǎn)染12周對(duì)大鼠主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)影響 WKY組為正常主動(dòng)脈形態(tài)。各SHR組大鼠主動(dòng)脈均出現(xiàn)明顯的血管重構(gòu)改變,血管損害程度、管壁厚度都較3周時(shí)更為嚴(yán)重。SHR-C組大鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)明顯的血管損害：內(nèi)膜局部有隆起,部分內(nèi)皮細(xì)胞脫落；中膜彈性纖維部分?jǐn)嗔?中膜增厚明顯,平滑肌細(xì)胞增生肥大。SHR-E組大鼠主動(dòng)脈損害較SHR-C組更為嚴(yán)重,SHR-I組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的損害較SHR-C組輕。 WKY組大鼠中膜未見膠原沉積,而SHR-C組大鼠中膜可見部分膠原沉積,SHR-E組大鼠血管膠原沉積明顯,但在SHR-I組大鼠血管中,沒有明顯膠原沉積。 5. Profilin-1轉(zhuǎn)染12周對(duì)大鼠主動(dòng)脈的影響 Western blot檢測(cè)三組大鼠主動(dòng)脈iNOS, p-p38的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示,兩蛋白在各組大鼠之間表達(dá)趨勢(shì)一致,且同Profilin-1趨勢(shì)相同,即SHR-E組大鼠兩種蛋白表達(dá)均高于SHR-C組,而SHR-I組大鼠中兩種蛋白表達(dá)降低。iNOS免疫組化染色所顯示趨勢(shì)同Western blot結(jié)果一致。 硝基酪氨酸染色結(jié)果趨勢(shì)同3周時(shí)一致,染色程度、面積及H評(píng)分均較3周增加。 6. Profilin-1轉(zhuǎn)染12周對(duì)大鼠NO，IL-6的變化。 利用硝酸還原酶法分別檢測(cè)腺病毒轉(zhuǎn)染12周后各組大鼠血清及主動(dòng)脈中的NO含量,結(jié)果顯示,四組大鼠血清中NO含量沒有顯著性差異(P0.05)。對(duì)于大鼠主動(dòng)脈局部NO的檢測(cè)顯示,各組大鼠主動(dòng)脈中NO趨勢(shì)同Profilin-1趨勢(shì)相反。而各組中炎性因子IL-6的表達(dá)趨勢(shì)同Profilin-1趨勢(shì)相同。 結(jié)論 (1)SHR大鼠的血管重構(gòu)伴隨著體內(nèi)氧化/抗氧化平衡紊亂及Profilin-1的過(guò)表達(dá)。 (2) Profilin-1過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平和血管重構(gòu),干擾Profilin-1表達(dá)則可逆轉(zhuǎn)上述變化。(3) Profilin-1對(duì)于大鼠血管重構(gòu)的作用與p38/iNOS/ONOO-通路相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R544.11

【共引文獻(xiàn)】

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1 馮曉靖,袁蘭,茍寶迪,王和平,張?zhí)焖{(lán),許善錦,王夔;羥自由基、低密度脂蛋白和膽固醇對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣響應(yīng)能力的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年06期

2 劉瀚e，

本文編號(hào)：1654992