本文關(guān)鍵詞： 高膽固醇血癥 降脂 血管保護 代謝組學(xué)　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的本實驗以高膽固醇血癥大鼠為研究對象,觀察益氣化瘀組方在降脂、保護肝臟及保護血管等方面的作用,并同時采用代謝組學(xué)方法,檢測大鼠肝臟中的代謝標(biāo)志物,分析所得到的實驗數(shù)據(jù),找出益氣化瘀組方降低大鼠血脂的相關(guān)作用通路,并從代謝組學(xué)角度探討益氣化瘀組方防治高膽固醇血癥的可能作用機制,為進一步的深入研究做鋪墊。方法60只大鼠在動物房適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,之后根據(jù)隨機數(shù)表法分為6組:空白組、高脂模型組、陽性藥組、益氣化瘀組方高、中、低劑量組,每組大鼠10只。正式開始實驗之后,各組大鼠均正常飲水,除飼喂基礎(chǔ)飼料外,空白組大鼠用蒸餾水灌胃,其余5組均用高脂乳劑灌胃。高脂乳劑配方為:20%豬油,5%膽固醇,5%蛋黃粉,1%丙基硫氧嘧啶,6%吐溫-80,63%蒸餾水。灌胃劑量按照1Oml/Kg,持續(xù)3周進行造模。從第4周開始,各組大鼠仍按前法飼養(yǎng)。同時,使用生理鹽水對正常對照組、模型組按照1Oml/Kg的劑量進行灌胃。益氣化疲組分別按照相應(yīng)的中藥劑量進行灌胃,高、中、低劑量分別相當(dāng)于生藥量的18g、9g、4.5g/Kg。陽性組使用立普妥混懸液進行灌胃給藥,藥量為10mg/Kg,每日灌胃劑量為10ml/Kg,每日1次,連續(xù)給藥4周。在末次給藥后各組大鼠禁食不禁水12小時,取材前稱重,采用10%的水合氯醛溶液按照0.35ml/100g的劑量,進行腹腔注射麻醉。之后進行腹主動脈取血,所取血液在室溫中靜置1小時之后,以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘后分離血清,進行分裝之后放置于-20℃冰箱中保存待測。取血之后處死各組大鼠,取出肝臟,并用肉眼觀察大鼠肝臟形態(tài),拍照留存。在生理鹽水中浸涮以洗去血漬,用濾紙吸干水分之后稱重。將稱重的結(jié)果與體重結(jié)合,用于計算大鼠肝臟指數(shù),計算方法為:肝指數(shù)=肝臟重量(g)/體重(g)×100%。摘取每只大鼠取肝臟左葉兩小塊肝臟組織(5mm×5mm×3mm),一塊放入凍存管中,并立即置于液氮中凍存,另一塊快速放置于4%的多聚甲醛溶液中固定。剖開大鼠胸腔,輕輕分離主動脈弓下大約1cm的大鼠胸主動脈組織,放入4%的多聚甲醛溶液中固定使用全自動生化分析儀檢測大鼠血脂四項及其他血清酶類指標(biāo)。對大鼠肝臟和胸主動脈進行石蠟包埋,隨后進行HE染色,在光鏡下分別觀察大鼠肝臟及胸主動脈的病理變化。使用免疫組化的方法,檢測大鼠胸主動脈sPLA2 Ⅱ a和NF-κB的表達時,并用Image Pro Plus6.0分析平均光密度值(MOD)。運用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法,檢測血清TNF-a,IL-6的水平。運用超高液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-QTOF-MS),檢測高脂灌胃誘導(dǎo)的高膽固醇血癥大鼠肝臟中的代謝標(biāo)志物。獲取數(shù)據(jù)后依次采用PCA、PLS-DA和OPLS-DA模式分析數(shù)據(jù),最后再根據(jù)VIP值,篩選有差異的生物標(biāo)志物,通過MetPA分析確定出準(zhǔn)確的生物標(biāo)志物和相關(guān)代謝通路,并對藥效及模型做出評估。結(jié)果1.血清及相關(guān)酶類檢測結(jié)果和肝臟形態(tài)變化與空白組相比,模型組大鼠TC、LDL-C水平顯著升高(P0.01);與模型組相比,益氣化瘀組方低劑量組和陽性組大鼠的TC、LDL-C水平均有所降低(PL0.01或P0.05)。與空白組相比,模型組大鼠血清ALT、AST、CRE、UREA、CK、LDH水平顯著升高(P0.01);與模型組相比,益氣化瘀組方各劑量組和陽性組大鼠血清的上述指標(biāo)水平均有所降低(P0.01或P0.05)。肝臟病理切片顯示,模型組大鼠肝細(xì)胞有脂肪顆粒浸潤,而益氣化瘀組方各劑量組和陽性組大鼠肝臟表現(xiàn)基本正常。2.大鼠胸主動脈相關(guān)炎癥因子表達胸主動脈切片顯示,與空白組相比,模型組大鼠胸主動脈平滑肌層排列紊亂,而益氣化瘀組方各劑量組和陽性組大鼠胸主動脈結(jié)構(gòu)基本正常。在抑制炎癥因子表達上面,與空白組相比,模型組大鼠胸主動脈sPLA2Ⅱa和NF-κB的表達水平均顯著升高(P0.01),血清TNF-a和IL-6的表達水平也顯著升高(P0.01)。與模型組相比,陽性組和益氣化瘀各劑量組大鼠胸主動脈sPLA2Ⅱa和NF-κB的表達水平均顯著降低(P0.01或P0.05),血清TNF-a和IL-6的表達水平也有顯著差異性(P0.01或P0.05)。3.肝臟組織中差異代謝物的測定通過對正負(fù)離子差異代謝產(chǎn)物的MetPA分析發(fā)現(xiàn):模型組與空白組之間高脂乳劑造模導(dǎo)致的大鼠血清TC和LDL-C的升高,可能與包括葉酸一碳代謝和甘油磷脂代謝在內(nèi)的代謝通路有關(guān);益氣化瘀組方低劑量組的降脂作用可能與葉酸一碳代謝通路、戊糖和葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)換通路這兩條通路有關(guān)。結(jié)論益氣化瘀組方能夠顯著降低模型組大鼠血清的膽固醇水平,同時對于高脂造成的大鼠肝腎功能的損害,也具有一定的調(diào)節(jié)作用。益氣化瘀組方能夠顯著抑制脂肪對肝臟的浸潤作用,改善大鼠胸主動脈的形態(tài)學(xué)變化,通過抑制相關(guān)炎癥因子的作用,發(fā)揮較好的保護血管的作用。通過對肝臟代謝物的UHPLC-QTOF-MS檢測及相關(guān)數(shù)據(jù)分析后發(fā)現(xiàn),通過高脂乳劑灌胃建立的高脂模型可能與包括葉酸一碳代謝和甘油磷脂代謝在內(nèi)的代謝通路有關(guān),而益氣化瘀組方低劑量組降脂作用的發(fā)揮可能與葉酸一碳代謝通路、戊糖和葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)換通路這兩條通路有關(guān)。
[Abstract]:The rats were divided into 6 groups : blank group , high fat model group , 5 % yolk powder , 1 % propylthiourazine , 6 % tween - 80 and 63 % distilled water . After the experiment , the rats were divided into 6 groups : blank group , high fat model group , 5 % yolk powder , 1 % propylthiourumin , 6 % tween - 80 and 63 % distilled water . The levels of serum TC and LDL - C in rat thoracic aorta were significantly decreased ( P0.01 or P0.05 ) . Compared with blank group , the levels of serum TC and LDL - C in rat thoracic aorta were significantly decreased ( P0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：1513427