本文關(guān)鍵詞： 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1 肝纖維化 PTEN 大鼠 Sprague Dawley　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 肝纖維化（hepatic fibrosis, HF）是一種可逆的瘢痕形成反應(yīng)，幾乎發(fā)生于所有的慢性肝損傷患者,全球具有較高的發(fā)病率和病死率。HF是一種以肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells, HSCs）的活化和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）的過度沉積為主要特征的病理過程。近年來有研究表明，肝纖維化是可逆轉(zhuǎn)的過程[2-5]，但目前尚無明確的診斷肝纖維化的方法。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1（insulin-1ike growth factor binding protein related protein1, IGFBPrP1）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種可溶性蛋白，可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附及凋亡等多種生理、病理過程。導(dǎo)師劉立新前期研究發(fā)現(xiàn)IGFBPrP1是一種新的致肝纖維化因子。第10號染色體缺失的磷酸酶張力蛋白同源物基因（Phosphatase and Tensin HomologDeleted on Chromosome Ten, PTEN）作為目前發(fā)現(xiàn)的第一個具有蛋白磷酸酶活性和脂質(zhì)磷酸酶活性雙重磷酸酶活性的抑癌基因，主要通過其脂質(zhì)磷酸酶活性發(fā)揮抑癌作用。有研究表明PTEN在肝纖維化過程中起著負(fù)性調(diào)節(jié)因子的作用。那么PTEN是否參與了IGFBPrP1所介導(dǎo)的大鼠肝纖維化的發(fā)生過程，目前尚無類似研究，因此設(shè)計了本課題。 目的 明確腺病毒攜帶的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1所介導(dǎo)的大鼠肝纖維化中PTEN的表達(dá)及意義。 方法 32只清潔級雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：正常組（8只）：尾靜脈注射生理鹽水，4x109pfu/只；陰性對照組（8只）：尾靜脈注射Ad-EGFP，4x109pfu/只；Ad-IGFBPrP12w組（8只）：尾靜脈注射Ad-IGFBPrP1，4x109pfu/只；Ad-IGFBPrP14w組（8只）：尾靜脈注射Ad-IGFBPrP1，4x109pfu/只。分別于2周末、4周末行乙醚吸入麻醉后采集、分離肝組織，部分肝左葉浸入10％中性福爾馬林中固定，剩余的肝左葉、肝右葉及肝臟其余部分分別包入鋁箔紙內(nèi)轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存。行HE染色和苦味酸-天狼猩紅特殊染色觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化及膠原纖維變化情況；免疫組織化學(xué)染色檢測大鼠肝組織中IGFBPrP1、-平滑肌肌動蛋白（-SMA）、I型膠原(Collagen I)、PTEN的表達(dá)和分布。 結(jié)果 （1）HE染色結(jié)果：正常組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；陰性對照組肝小葉周邊少數(shù)細(xì)胞發(fā)生變性，中央靜脈周圍細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；Ad-IGFBPrP12w組大鼠肝組織中肝小葉周邊出現(xiàn)大面積的肝細(xì)胞變性，細(xì)胞呈空泡狀，有點狀壞死及少量炎細(xì)胞浸潤；Ad-IGFBPrP14w組大鼠肝細(xì)胞變性壞死程度進(jìn)一步加重，伴有炎細(xì)胞的浸潤，匯管區(qū)周邊可見膠原纖維增生。 （2）苦味酸-天狼猩紅特殊染色結(jié)果：實驗組大鼠肝組織中膠原纖維的含量較正常組和陰性對照組大鼠肝組織中明顯增多。肝組織中膠原纖維含量在Ad-IGFBPrP12w組的大鼠肝組織較正常組和陰性對照組中明顯增多（0．614％ 0.057％VS0.121％0.025％，，P=0.02;0.614％0.057％VS0.178％0.034％,P=0.03），且Ad-IGFBPrP14w組的大鼠肝組織膠原纖維含量較Ad-IGFBPrP12w組的大鼠肝組織顯著增多(1.122％0.117％VS0.614％0.057％, P=0.027)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。 （3）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：在正常組和陰性對照組大鼠肝細(xì)胞中IGFBPrP1、-SMA、Collagen I表達(dá)不明顯，而在Ad-IGFBPrP1組中大鼠肝細(xì)胞中表達(dá)顯著增強。其中Ad-IGFBPrP14w組的大鼠肝組織中的表達(dá)強于Ad-IGFBPrP12w組的大鼠（0.320.03,0.350.03,1.290.08,3.440.12,F=358.89, P＜0.01;0.280.03,0.330.03,1.060.07,2.580.18, F=117.17, P＜0.01;0.320.02,0.390.02,0.900.02,1.640.13, F=78.66, P＜0.01）。在正常組和陰性對照組的大鼠肝細(xì)胞中PTEN高表達(dá)，而在Ad-IGFBPrP1組大鼠肝細(xì)胞中表達(dá)明顯弱于正常組和陰性對照組，其中Ad-IGFBPrP14w組大鼠肝組織中的表達(dá)弱于Ad-IGFBPrP12w組的大鼠。（20.90±1.56,19.36±1.50,5.10±0.33,1.52±0.18, F=80.33, P＜0.01）。 （4）免疫組織化學(xué)染色相關(guān)性分析結(jié)果：肝組織中IGFBPrP1表達(dá)的變化與-SMA（r=0.909, P＜0.01）、Collagen I（r=0.964, P＜0.01）的表達(dá)變化情況呈正相關(guān)；肝組織中IGFBPrP1表達(dá)的變化與PTEN表達(dá)變化情況呈負(fù)相關(guān)（r=-0.809, P＜0.01）。 結(jié)論 （1）Ad-IGFBPrP1可導(dǎo)致大鼠肝組織發(fā)生纖維化樣變化； （2）Ad-IGFBPrP1介導(dǎo)的大鼠肝纖維化過程中PTEN表達(dá)下調(diào)，可能在此過程中發(fā)揮著負(fù)性調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2

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本文編號：1478936