本文關(guān)鍵詞： 在線柱前衍生 在線凈化-高效液相色譜 紫外和熒光檢測(cè)器 伏馬菌素B_1 伏馬菌素B_2 利多卡因 丙泊酚　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：色譜法(Chromatography)是一種對(duì)混合物進(jìn)行分離分析的方法。色譜法因其具有很強(qiáng)的分離能力,加上現(xiàn)代色譜檢測(cè)器具有很高的靈敏度,色譜法已然成為分析復(fù)雜混合物的重要手段。其中,應(yīng)用最廣泛的高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),自20世紀(jì)60年代崛起,經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展,在理論和實(shí)踐等方面都日趨完善,目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境、農(nóng)業(yè)及生命科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法相比,具有高效、高速、高靈敏度和高自動(dòng)化等特點(diǎn),與氣相色譜相比同時(shí)也具有應(yīng)用范圍廣、選擇性高、對(duì)溫度要求低以及餾分易于收集和制備等優(yōu)點(diǎn)。霉菌毒素(Mycotoxins)是一類由產(chǎn)毒絲狀真菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物,能夠在多種作物上存活,尤其常見(jiàn)于作物收獲前后。霉菌毒素可通過(guò)食品或飼料進(jìn)入人和動(dòng)物體內(nèi),引起多臟器的損傷,危害著人類和動(dòng)物的生命安全。因此,對(duì)于霉菌毒素能否進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測(cè)變得十分重要。然而,由于霉菌毒素在環(huán)境樣品中是微量存在的,且其生存的基質(zhì)成分復(fù)雜,這無(wú)疑給檢測(cè)造成了巨大的困擾。對(duì)于常見(jiàn)的黃曲霉毒素(Aflatoxins),目前已有較為成熟的檢測(cè)方法,但是對(duì)于同樣常見(jiàn)的伏馬菌素(Fumonisins),卻一直缺乏一種有效且重現(xiàn)性良好的檢測(cè)方法。針對(duì)這一問(wèn)題,本人在論文的第一部分進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)方法的探索研究,并取得了較為滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。利多卡因與丙泊酚是臨床上廣泛應(yīng)用的麻醉藥,聯(lián)合應(yīng)用于小兒手術(shù)、人工流產(chǎn)等的鎮(zhèn)痛麻醉,但目前尚無(wú)同時(shí)檢測(cè)這兩種物質(zhì)的文獻(xiàn)報(bào)道。在論文的第二部分,采用高效液相色譜-在線凈化技術(shù),在兼顧樣品檢出限與線性范圍的同時(shí),串聯(lián)使用了紫外(Ultraviolet,UV)和熒光(Fluorescence Detection,FLD)檢測(cè)器,對(duì)血液中的麻醉藥物利多卡因和丙泊酚進(jìn)行了同時(shí)檢測(cè),取得了滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥具有實(shí)際意義。第一部分高效液相色譜法在線柱前衍生檢測(cè)伏馬菌素B1和B2目的:建立測(cè)定伏馬菌素B1和B2的在線柱前衍生-高效液相色譜-熒光檢測(cè)新方法。方法:應(yīng)用高效液相色譜技術(shù),聯(lián)用高靈敏的熒光檢測(cè)器和高自動(dòng)化的在線衍生技術(shù),對(duì)玉米樣品中的伏馬菌素B1和B2進(jìn)行檢測(cè)。采集到的玉米樣品粉碎后經(jīng)過(guò)80%甲醇溶液震蕩提取兩次,離心后取上清液,經(jīng)過(guò)濾膜過(guò)濾后,用PBS緩沖液稀釋待用。而后,樣品溶液需經(jīng)過(guò)免疫親和柱(Immunoaffinity Column,IAC)除雜、濃縮,最終的洗脫液經(jīng)濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣分析。在檢測(cè)之前,樣品要先經(jīng)過(guò)在線衍生,以鄰苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)和2-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-ME)為衍生劑,而后進(jìn)入C18色譜柱分離,熒光檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。結(jié)果:在優(yōu)化的條件下測(cè)得伏馬菌素B1和B2的線性范圍分別為0.1~5.0μg/m L(FB1)以及0.06~2.5μg/m L(FB2),線性回歸方程分別為Y=7832.79+116714.74X(FB1),Y=4499.88+53501.98X(FB2),線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9999和0.9992,最低檢出限分別為0.10和0.26 mg/kg。分別對(duì)1.0μg/m L的FB1和0.5μg/m L的FB2每天連續(xù)進(jìn)行7次平行測(cè)定,并連續(xù)測(cè)定7天,測(cè)得FB1的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.38%(日內(nèi))和6.90%(日間);FB2的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.15%(日內(nèi))和8.50%(日間)。對(duì)玉米樣品中的伏馬菌素B1和B2進(jìn)行檢測(cè),其加標(biāo)回收率在85.6%~119.2%之間。結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便快速,自動(dòng)化程度高,免去了人工衍生過(guò)程中的操作誤差,檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好。第二部分在線凈化-高效液相色譜雙檢測(cè)器法同時(shí)測(cè)定麻醉藥物利多卡因和丙泊酚目的:建立同時(shí)檢測(cè)血漿中麻醉藥物利多卡因和丙泊酚的在線凈化-雙檢測(cè)器-高效液相色譜新方法。方法:本實(shí)驗(yàn)基于高效液相色譜法,聯(lián)用在線凈化以及串聯(lián)檢測(cè)器技術(shù),對(duì)利多卡因和丙泊酚進(jìn)行了聯(lián)合檢測(cè)。對(duì)實(shí)驗(yàn)的色譜條件以及在線凈化條件進(jìn)行了優(yōu)化。最終,血液樣品經(jīng)12000 r/min離心10 min,取上清,用甲醇沉淀蛋白后直接進(jìn)樣,經(jīng)在線固相萃取柱在線凈化,梯度洗脫經(jīng)反相C18色譜柱分離,紫外檢測(cè)器(UV)串聯(lián)熒光檢測(cè)器(FLD)檢測(cè),外標(biāo)法定量。而后,對(duì)wistar大鼠注射待測(cè)藥物并對(duì)其血液進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果:在優(yōu)化的條件下測(cè)得利多卡因的線性范圍為0.08~80 mg/L,線性回歸方程Y=-0.2263+0.8281X,相關(guān)系數(shù)r=0.9999,最低檢出限為24μg/L。分別對(duì)0.2,2.0,20 mg/L的利多卡因連續(xù)進(jìn)行6次平行測(cè)定,獲得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2~5.0%。對(duì)血液中的利多卡因進(jìn)行凈化檢測(cè),其加標(biāo)回收率在95.4%~108.9%之間。在優(yōu)化的條件下測(cè)得丙泊酚的線性范圍為0.0025~20 mg/L,線性回歸方程為UV:Y=-0.4053+0.8262X,r=0.9999,FLD:Y=-731.3385+1999852.5522X,r=0.9999,最低檢出限為0.75μg/L。分別對(duì)0.05,0.5,5.0mg/L的丙泊酚連續(xù)進(jìn)行6次平行測(cè)定,獲得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9~3.5%。同樣,對(duì)血液中的丙泊酚進(jìn)行凈化檢測(cè),其加標(biāo)回收率在96.9%~98.6%之間。結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便快速,易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,可用于利多卡因和丙泊酚血藥濃度的監(jiān)測(cè)。
[Abstract]:High performance liquid chromatography ( HPLC ) has been widely used in many fields such as medicine , food , environment , agriculture and life science . The results showed that the linear range of FB1 and B2 was 0 . 1 - 5.0 渭g / ml ( FB1 ) and 0 . 06 - 2.5 渭g / ml ( FB2 ) . The results showed that the linear regression equation was 0 . 08 锝，

本文編號(hào)：1471851