本文關(guān)鍵詞： 皮膚移植 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 免疫耐受 心肌梗死 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 心功能　出處：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合水凝膠對同種異體皮膚移植的作用 目的：聯(lián)合水凝膠探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對移植皮膚的作用。 方法：（1）人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的培養(yǎng)和鑒定，并經(jīng)CM-DiL染色進(jìn)行標(biāo)記。（2）選用雄性的C57BL/6小鼠作為皮膚移植的供體，雄性ICR小鼠作為皮膚移植的受體建立同種異體皮膚移植的動(dòng)物模型(3)術(shù)后將ICR小鼠（受體）隨機(jī)分為4組，每組10只，分別給予以下處理：在空白組中，單純給予300ul PBS皮下注射；在水凝膠處理組中，單純給予300ul水凝膠皮下注射；在細(xì)胞處理組中，單純給予受體人BMSCs溶液300ul移植皮下注射；在聯(lián)合處理組中，給予受體水凝膠和BMSCs的300ul混合液皮下注射。（4）觀察受體移植皮片的存活狀況,在術(shù)后第9天制作移植皮片的冰凍切片，經(jīng)熒光顯微鏡觀察體內(nèi)細(xì)胞存活數(shù)量：術(shù)后開始觀察移植皮片的存活時(shí)間和狀況；開始同時(shí)觀察的皮片中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的存活數(shù)量（5）人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在受體ICR鼠的體內(nèi)分布情況檢測：術(shù)后第5、9、14天將受體的心、肝、脾、肺、腎等主要臟器制作成冰凍切片，觀察間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移數(shù)量。（6）受體ICR小鼠外周血中炎癥因子的測定：術(shù)后第14天取外周血，應(yīng)用ELISA檢測外周血中，炎癥因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α的含量。 結(jié)果：（1）人BMSCs呈貼壁克隆樣生長，流式細(xì)胞儀顯示P3代的MSCs陽性表達(dá)CD29（細(xì)胞整合素分子，94.86%）、CD90（Thr-1分子，94.06%）、CD73（89.64%）、CD105（94.98%）和CD44（粘附分子,99.2%）；但低表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志CD34（0.84%），CD11B（1.43%）、CD31（10.86%）、CD45（1.28%）。證明本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用全骨髓差異貼壁法培養(yǎng)的細(xì)胞特異表達(dá)MSC的表面抗原。(2)移植術(shù)后觀察受體皮膚存活的情況：各組1-4d沒有明顯變化。在空白組中，第5d出現(xiàn)局部皮膚變黑，8d后皮膚結(jié)痂壞死；在水凝膠處理組中，第6d可見局部皮膚小潰瘍，9d后皮膚出現(xiàn)結(jié)痂壞死；在細(xì)胞處理組中，第8d局部皮膚出現(xiàn)小潰瘍，第9d局部皮膚變黑，11d后皮膚發(fā)生結(jié)痂壞死；在聯(lián)合處理組中，第10d出現(xiàn)局部皮膚小潰瘍，第12d出現(xiàn)局部皮膚變黑，13d后皮膚發(fā)生結(jié)痂壞死。在細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組中，皮膚移植物的存活時(shí)間均比空白組長，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；在水凝膠處理組中，皮膚存活時(shí)間的比細(xì)胞處理組短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；聯(lián)合處理組與空白組、細(xì)胞處理組和水凝膠處理組三組分別比較，皮膚移植物的存活時(shí)間均延長，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；聯(lián)合處理組的皮片存活最長可達(dá)18d。 （3）觀察各組受體小鼠皮下人BMSCs的滯留量：結(jié)果顯示：在聯(lián)合處理組中，受體皮下組織中滯留的人BMSCs最多。（4）觀察受體體內(nèi)的人BMSCs的分布情況：結(jié)果發(fā)現(xiàn)：皮下直接注射后9天后，受體的肺臟組織內(nèi)依然可以觀察到熒光顯示的核藍(lán)染胞質(zhì)紅染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，心、肝、腎內(nèi)觀察不到上述熒光顯示的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，但是脾臟內(nèi)在第5天，可以觀察到少量上述熒光顯示的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。（5）ELISA檢測受體小鼠外周血細(xì)胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α)的檢測結(jié)果： IL-2濃度(pg/ml)各組分別為：1784.16±357.86、1013.62±25.71、671.11±187.53、482.47±33.13，空白組中， IL-2的含量高于細(xì)胞處理組（3739.59±493.21）異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05),在水凝膠處理組中，IL-2的含量明顯高于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05); IL-4濃度(pg/ml)各組分別為：24.22±19.94、114.72±50.33、192.45±69.03、444.37±36.73，空白組中，IL-4含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05),在水凝膠處理組中，IL-4的含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05)，在細(xì)胞處理組中，IL-4的含量明顯低于聯(lián)合處理組（P0.05)； IL-10濃度(pg/ml)各組分別為：11.22±3.67、11.77±8.23、28.46±8.91、69.36±11.53，在空白組中，IL-10的含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05),在水凝膠處理組中，IL-10的含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05)，在細(xì)胞處理組中，IL-10的含量明顯低于聯(lián)合處理組（P0.05)；④IFN-γ濃度(pg/ml)各組分別為：6303.27±1458.59、5649.58±1117.06、3303.21±496.61、2292.68±641.48，空白組中，IFN-γ的含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05),在水凝膠處理組中，IFN-γ的含量明顯低于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05)，細(xì)胞處理組中IFN-γ的含量明顯低于聯(lián)合處理組（P0.05)；⑤IFN-γ濃度(pg/ml)各組分別為：1443.79±209.06、793.20±241.99、331.02±108.12、107.46±45.14，空白組中TNF-α的含量明顯高于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05),水凝膠處理組中TNF-α的含量明顯高于細(xì)胞處理組和聯(lián)合處理組（P0.05)，，細(xì)胞處理組中TNF-α的含量明顯高于聯(lián)合處理組（P0.05)。 結(jié)論：（1）人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠明顯延長移植物在受體上的存活時(shí)間；（2）水凝膠能提高人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在受體移植皮片中的滯留率從而提高人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的療效。 第二部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合水凝膠對心肌梗死的作用 目的：驗(yàn)證水凝膠促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對心肌梗死的作用。 方法：（1）SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定(2)大鼠心梗模型的建立：取20只雄性SD大鼠，分為假開胸組（n=4）,空白組（n=4），水凝膠處理組(n=4)，細(xì)胞處理組(n=4)，聯(lián)合處理組(n=4)，常規(guī)麻醉，固定大鼠，氣管切開插管，開胸，找到前降支，結(jié)扎，心梗建立成功，逐層關(guān)胸后拔氣管插管。比較結(jié)扎前后心電圖，心超變化。 結(jié)果：（1）大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型鑒定結(jié)果：CD29、CD90陽性，CD34、CD45、CD106陰性。(2)各組大鼠心功能的觀察：在空白組，大鼠的射血分?jǐn)?shù)（EF）和縮短分?jǐn)?shù)（FS）在注射后持續(xù)降低，其它三組，EF和FS在注射后前7天降低，但是28天后，都有升高，尤其是聯(lián)合處理組有明顯地升高（P0.05）。 結(jié)論：水凝膠能提高大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在心肌梗死中的療效。
[Abstract]:The first part : The effect of bone marrow mesenchymal stem cells combined with hydrogel on allogeneic skin transplantation Objective : To investigate the effect of bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) on skin graft . Methods : ( 1 ) The bone marrow mesenchymal stem cells were cultured and identified and marked by CM - DiL staining . ( 2 ) Male C57BL / 6 mice were randomly divided into 4 groups . Results : ( 1 ) The expression of CD29 ( integrin molecule , 94.86 % ) , CD90 ( Thr - 1 ) , CD105 ( 94.06 % ) , CD73 ( 89.64 % ) , CD105 ( 94.98 % ) and CD44 ( 99 . 2 % ) were detected by flow cytometry . ( 2 ) The survival time of skin grafts was observed after transplantation : 1 - 4 days in each group were not significantly changed . In the blank group , the skin became dark after day 8 , and the skin became necrotic after 8 days . In the treatment group , the survival time of skin grafts was longer than that of the blank group , and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . The survival time of skin grafts was prolonged and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . The results showed that the content of IL - 2 was significantly lower in the treated group than that in the treatment group and the combined treatment group ( P0.05 ) . The levels of IL - 4 in the treated group were significantly lower than those in the treatment group and the combined treatment group ( P0.05 ) . Conclusion : ( 1 ) Human bone marrow mesenchymal stem cells can obviously prolong the survival time of the graft on the recipient ; ( 2 ) the hydrogel can improve the retention rate of human bone marrow mesenchymal stem cells in the receptor graft skin , so as to improve the curative effect of human bone marrow mesenchymal stem cells . Part Two : Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Combined with Hydrogel on Myocardial Infarction Objective : To verify the effect of hydrogel on bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) on myocardial infarction . Methods : ( 1 ) The rat bone marrow mesenchymal stem cells were cultured and identified ( 2 ) establishment of rat heart stem model : 20 male SD rats were divided into sham open chest group ( n = 4 ) , blank group ( n = 4 ) , hydrogel treatment group ( n = 4 ) , cell treatment group ( n = 4 ) , combined treatment group ( n = 4 ) , general anesthesia , fixed rat , trachea incision and intubation , open chest , anterior descending branch , ligation and myocardial infarction . Results : ( 1 ) The phenotypic identification results of bone marrow mesenchymal stem cells in rats were as follows : CD29 , CD90 , CD34 , CD106 and CD106 were negative . ( 2 ) In the blank group , the ejection fraction ( EF ) and shortening fraction ( FS ) of the rats decreased continuously after injection , while the other three groups , EF and FS decreased 7 days before injection , but after 28 days , there was an increase , especially in the combined treatment group ( P0.05 ) . Conclusion : hydrogel can improve the curative effect of bone marrow mesenchymal stem cells in myocardial infarction .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R622.1;R542.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1450777