本文關(guān)鍵詞：去骨瓣減壓術(shù)對CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后行為學(xué)改變及繼發(fā)性損傷的影響

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【摘要】：目的:創(chuàng)傷性腦損傷(Trauma Brain Injury,TBI)屬于神經(jīng)外科常見病,以高致殘率、高死亡率為特征,耗費了極高的社會成本。根據(jù)物理損傷的性質(zhì)、組織病理類型、意識及神經(jīng)功能的損傷程度,可以將創(chuàng)傷性腦損傷進行諸多分類。雖然專家們已經(jīng)制定了治療指南用以改善預(yù)后,但想要在發(fā)病早期進一步提高治療效果,仍需要進行大量的工作。去骨瓣減壓術(shù)(Decompressive Craniotomy,DC)指去除部分顱骨,剪開硬腦膜,以緩解顱內(nèi)高壓,降低腦水腫造成的損害。一旦顱內(nèi)壓恢復(fù)至正常水平,患者病情相對平穩(wěn)(通常是去除骨瓣1月~3月后),行顱骨修補術(shù)。嚴重腦血管病引起的腦腫脹行去骨瓣減壓術(shù)的治療效果已經(jīng)有完善的研究得以證實,但去骨瓣減壓術(shù)對于創(chuàng)傷性腦損傷的影響仍存在爭議。本研究應(yīng)用自由落體打擊模型建立CD1小鼠TBI模型,應(yīng)用干濕重法檢測腦水腫的程度,采用神經(jīng)行為學(xué)人工評分及一系列神經(jīng)行為學(xué)試驗觀察TBI及DC后的行為學(xué)變化,并試圖闡明其分子機制,為臨床上治療創(chuàng)傷性腦損傷及顱骨修補最佳時機提供實驗依據(jù)。方法:采用清潔級CD1小鼠75只,成年雄性,體重40g±5g,隨機分為正常對照組,TBI組,TBI+DC組;采用自由落體打擊模型致小鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI);正常對照組15只,不作任何干預(yù),正常飼養(yǎng);TBI組30只,給予自由落體打擊造模:小鼠頭部皮膚剪開,暴露左側(cè)頂骨,將頭部固定于金屬硬質(zhì)板上,左側(cè)頂骨置與金屬板平行,圓柱形重物重10g,高度25cm,自直徑稍大于自身的有機玻璃管中自由落下打擊已暴露的顱骨部分,避免回彈傷,操作完成后規(guī)范縫合頭皮。TBI+DC組30只,先給予自由落體打擊造模,過程同上,4~6小時后行去骨瓣減壓術(shù),顯微鏡下用微型電鉆磨除打擊部位的顱骨;每組各取固定5只于處理完成后1小時、24小時、7天、14天、21天、28天行神經(jīng)行為學(xué)評分(Neurological Severity Scores,NSS);除正常對照組外,各組干預(yù)前3天及干預(yù)后7天、14天、21天、28天行曠場實驗;14天、28天時行高架十字迷宮實驗;28天時行巴恩斯迷宮實驗。除正常對照組外,其余每組每個時間點另取3只,分別于處理完成后12小時、1天、3天、5天、7天用干濕重法測定腦組織水分含量,放入65℃烤箱48小時后稱干重。用免疫組織化學(xué)方法觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神經(jīng)元特異性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,Neun)在各組小鼠大腦皮層中的表達情況,每組每個時間點取5只,于處理完成后7天、14天、28天處死灌注取腦,進行免疫組化試驗。用病理圖文分析系統(tǒng)圖像處理軟件Image-Pro plus 6.0分析圖像,所得數(shù)據(jù)用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1一般情況:實驗組(TBI組及TBI+DC組)麻醉清醒后食欲下降,活動減少,嗜睡,約1周后有所恢復(fù),但較正常對照組差。正常對照組進食水及精神狀況良好,活動正常。2行為學(xué)實驗2.1神經(jīng)行為學(xué)評分:NSS隨時間的變化趨勢三組不同,每個時間點上兩兩分組比較,TBI組與TBI+DC組無明顯差異,但NSS均高于正常對照組。均數(shù)比較1h、24h、7d、14d、21d時TBI組TBI+DC組,28d時TBI組TBI+DC組。2.2曠場實驗2.2.1總體平均速度:兩組間總體平均速度總體而言無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),TBI組實驗處理后總體平均速度明顯下降,14天后有緩慢上升;TBI+DC組實驗處理后亦有下降,維持一段平臺期后,再次出現(xiàn)下降期。均數(shù)比較7d、14d、21d時TBI組TBI+DC組,28d時TBI組TBI+DC組。2.2.2中央?yún)^(qū)活動時間:兩組間中央?yún)^(qū)活動時間總體而言無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),TBI組實驗處理后中央?yún)^(qū)活動時間明顯減少,21天后有小幅度增多;TBI+DC組實驗處理后持續(xù)減少,前期均值高于TBI組,21天左右相交,后低于TBI組。2.2.3四角活動時間:兩組間四角活動時間總體而言無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),TBI組實驗處理后四角活動時間明顯增多,14天后有所下降;TBI+DC組實驗處理后持續(xù)上升,總體低于TBI組,14天后變化不大。均數(shù)比較7d、14d、21d時TBI組TBI+DC組,28d時TBI組TBI+DC組。2.3高架十字迷宮2.3.1(1)14天時進臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與TBI+DC組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),進臂總次數(shù)均較正常對照組明顯增多。(2)14天時開臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)14天時閉臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,進入閉臂次數(shù)TBI組TBI+DC組CONTROL組。2.3.2(1)28天時進臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與TBI+DC組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),進臂總次數(shù)仍均高于正常對照組。(2)28天時開臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),進入開臂次數(shù)均高于TBI+DC組。(3)28天時閉臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,進入閉臂次數(shù)TBI+DC組TBI組CONTROL組。2.4巴恩斯迷宮錯誤次數(shù)及找到目標所需時間:三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,錯誤次數(shù)TBI+DC組TBI組CONTROL組。3干濕法:各組腦組織水分含量總體而言不同(P0.05),實驗處理完成后3天左右腦組織水分含量達最高峰,左側(cè)即創(chuàng)傷側(cè)腦組織TBI+DC組低于TBI組,右側(cè)二者差別不大。4免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)4.1神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP):各組GFAP陽性細胞數(shù)總體而言不同(P0.05),TBI組GFAP陽性細胞數(shù)7d14d28d,TBI+DC組14d左右處于低峰,對照組隨時間變化不大。4.2神經(jīng)元特異性核蛋白(Neun):各組Neun陽性細胞數(shù)總體而言不同(P0.05),TBI組及TBI+DC組Neun陽性細胞數(shù)均隨時間逐漸降低,7d時TBI+DC組TBI組,14d時二者范圍有重疊,28d時TBI組TBI+DC組;對照組隨時間變化不大。結(jié)論:1通過自由落體打擊模型可以成功建立TBI動物模型來模擬TBI的病理及行為學(xué)改變。2 TBI明顯損害CD1小鼠的認知能力及運動功能,DC在21d前能減輕上述損害,但28d時又出現(xiàn)損害加重。3 TBI使CD1小鼠的焦慮水平明顯上升,14d時DC對焦慮起緩解作用,28d時又加劇焦慮。4 28d時TBI及DC均損害CD1小鼠的空間記憶力。5 TBI引起CD1小鼠明顯腦水腫,3d左右達高峰,DC可減輕腦水腫。6 TBI引起CD1小鼠明顯大腦皮層炎癥反應(yīng)及神經(jīng)元死亡,炎癥反應(yīng)7d14d28d。DC后7d、14d時逐漸減輕炎癥反應(yīng),但28d時加重炎癥反應(yīng)。神經(jīng)元死亡數(shù)7d時TBI組TBI+DC組,14d時相差不大,28d時TBI組TBI+DC組。綜上,早期去骨瓣減壓術(shù)對于CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷有治療作用,但4周后顱骨缺損不利于神經(jīng)功能恢復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.15

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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