發(fā)布時(shí)間：2017-11-10 02:06

  本文關(guān)鍵詞：去骨瓣減壓術(shù)對(duì)CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后行為學(xué)改變及繼發(fā)性損傷的影響

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【摘要】：目的:創(chuàng)傷性腦損傷(Trauma Brain Injury,TBI)屬于神經(jīng)外科常見(jiàn)病,以高致殘率、高死亡率為特征,耗費(fèi)了極高的社會(huì)成本。根據(jù)物理?yè)p傷的性質(zhì)、組織病理類型、意識(shí)及神經(jīng)功能的損傷程度,可以將創(chuàng)傷性腦損傷進(jìn)行諸多分類。雖然專家們已經(jīng)制定了治療指南用以改善預(yù)后,但想要在發(fā)病早期進(jìn)一步提高治療效果,仍需要進(jìn)行大量的工作。去骨瓣減壓術(shù)(Decompressive Craniotomy,DC)指去除部分顱骨,剪開(kāi)硬腦膜,以緩解顱內(nèi)高壓,降低腦水腫造成的損害。一旦顱內(nèi)壓恢復(fù)至正常水平,患者病情相對(duì)平穩(wěn)(通常是去除骨瓣1月~3月后),行顱骨修補(bǔ)術(shù)。嚴(yán)重腦血管病引起的腦腫脹行去骨瓣減壓術(shù)的治療效果已經(jīng)有完善的研究得以證實(shí),但去骨瓣減壓術(shù)對(duì)于創(chuàng)傷性腦損傷的影響仍存在爭(zhēng)議。本研究應(yīng)用自由落體打擊模型建立CD1小鼠TBI模型,應(yīng)用干濕重法檢測(cè)腦水腫的程度,采用神經(jīng)行為學(xué)人工評(píng)分及一系列神經(jīng)行為學(xué)試驗(yàn)觀察TBI及DC后的行為學(xué)變化,并試圖闡明其分子機(jī)制,為臨床上治療創(chuàng)傷性腦損傷及顱骨修補(bǔ)最佳時(shí)機(jī)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用清潔級(jí)CD1小鼠75只,成年雄性,體重40g±5g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組,TBI組,TBI+DC組;采用自由落體打擊模型致小鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI);正常對(duì)照組15只,不作任何干預(yù),正常飼養(yǎng);TBI組30只,給予自由落體打擊造模:小鼠頭部皮膚剪開(kāi),暴露左側(cè)頂骨,將頭部固定于金屬硬質(zhì)板上,左側(cè)頂骨置與金屬板平行,圓柱形重物重10g,高度25cm,自直徑稍大于自身的有機(jī)玻璃管中自由落下打擊已暴露的顱骨部分,避免回彈傷,操作完成后規(guī)范縫合頭皮。TBI+DC組30只,先給予自由落體打擊造模,過(guò)程同上,4~6小時(shí)后行去骨瓣減壓術(shù),顯微鏡下用微型電鉆磨除打擊部位的顱骨;每組各取固定5只于處理完成后1小時(shí)、24小時(shí)、7天、14天、21天、28天行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(Neurological Severity Scores,NSS);除正常對(duì)照組外,各組干預(yù)前3天及干預(yù)后7天、14天、21天、28天行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn);14天、28天時(shí)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn);28天時(shí)行巴恩斯迷宮實(shí)驗(yàn)。除正常對(duì)照組外,其余每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)另取3只,分別于處理完成后12小時(shí)、1天、3天、5天、7天用干濕重法測(cè)定腦組織水分含量,放入65℃烤箱48小時(shí)后稱干重。用免疫組織化學(xué)方法觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神經(jīng)元特異性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,Neun)在各組小鼠大腦皮層中的表達(dá)情況,每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取5只,于處理完成后7天、14天、28天處死灌注取腦,進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)。用病理圖文分析系統(tǒng)圖像處理軟件Image-Pro plus 6.0分析圖像,所得數(shù)據(jù)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1一般情況:實(shí)驗(yàn)組(TBI組及TBI+DC組)麻醉清醒后食欲下降,活動(dòng)減少,嗜睡,約1周后有所恢復(fù),但較正常對(duì)照組差。正常對(duì)照組進(jìn)食水及精神狀況良好,活動(dòng)正常。2行為學(xué)實(shí)驗(yàn)2.1神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:NSS隨時(shí)間的變化趨勢(shì)三組不同,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上兩兩分組比較,TBI組與TBI+DC組無(wú)明顯差異,但NSS均高于正常對(duì)照組。均數(shù)比較1h、24h、7d、14d、21d時(shí)TBI組TBI+DC組,28d時(shí)TBI組TBI+DC組。2.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)2.2.1總體平均速度:兩組間總體平均速度總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),TBI組實(shí)驗(yàn)處理后總體平均速度明顯下降,14天后有緩慢上升;TBI+DC組實(shí)驗(yàn)處理后亦有下降,維持一段平臺(tái)期后,再次出現(xiàn)下降期。均數(shù)比較7d、14d、21d時(shí)TBI組TBI+DC組,28d時(shí)TBI組TBI+DC組。2.2.2中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間:兩組間中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),TBI組實(shí)驗(yàn)處理后中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間明顯減少,21天后有小幅度增多;TBI+DC組實(shí)驗(yàn)處理后持續(xù)減少,前期均值高于TBI組,21天左右相交,后低于TBI組。2.2.3四角活動(dòng)時(shí)間:兩組間四角活動(dòng)時(shí)間總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),TBI組實(shí)驗(yàn)處理后四角活動(dòng)時(shí)間明顯增多,14天后有所下降;TBI+DC組實(shí)驗(yàn)處理后持續(xù)上升,總體低于TBI組,14天后變化不大。均數(shù)比較7d、14d、21d時(shí)TBI組TBI+DC組,28d時(shí)TBI組TBI+DC組。2.3高架十字迷宮2.3.1(1)14天時(shí)進(jìn)臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與TBI+DC組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),進(jìn)臂總次數(shù)均較正常對(duì)照組明顯增多。(2)14天時(shí)開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(3)14天時(shí)閉臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,進(jìn)入閉臂次數(shù)TBI組TBI+DC組CONTROL組。2.3.2(1)28天時(shí)進(jìn)臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與TBI+DC組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),進(jìn)臂總次數(shù)仍均高于正常對(duì)照組。(2)28天時(shí)開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較TBI組與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)均高于TBI+DC組。(3)28天時(shí)閉臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,進(jìn)入閉臂次數(shù)TBI+DC組TBI組CONTROL組。2.4巴恩斯迷宮錯(cuò)誤次數(shù)及找到目標(biāo)所需時(shí)間:三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),兩兩比較互不相同,錯(cuò)誤次數(shù)TBI+DC組TBI組CONTROL組。3干濕法:各組腦組織水分含量總體而言不同(P0.05),實(shí)驗(yàn)處理完成后3天左右腦組織水分含量達(dá)最高峰,左側(cè)即創(chuàng)傷側(cè)腦組織TBI+DC組低于TBI組,右側(cè)二者差別不大。4免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)4.1神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP):各組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)總體而言不同(P0.05),TBI組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)7d14d28d,TBI+DC組14d左右處于低峰,對(duì)照組隨時(shí)間變化不大。4.2神經(jīng)元特異性核蛋白(Neun):各組Neun陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)總體而言不同(P0.05),TBI組及TBI+DC組Neun陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均隨時(shí)間逐漸降低,7d時(shí)TBI+DC組TBI組,14d時(shí)二者范圍有重疊,28d時(shí)TBI組TBI+DC組;對(duì)照組隨時(shí)間變化不大。結(jié)論:1通過(guò)自由落體打擊模型可以成功建立TBI動(dòng)物模型來(lái)模擬TBI的病理及行為學(xué)改變。2 TBI明顯損害CD1小鼠的認(rèn)知能力及運(yùn)動(dòng)功能,DC在21d前能減輕上述損害,但28d時(shí)又出現(xiàn)損害加重。3 TBI使CD1小鼠的焦慮水平明顯上升,14d時(shí)DC對(duì)焦慮起緩解作用,28d時(shí)又加劇焦慮。4 28d時(shí)TBI及DC均損害CD1小鼠的空間記憶力。5 TBI引起CD1小鼠明顯腦水腫,3d左右達(dá)高峰,DC可減輕腦水腫。6 TBI引起CD1小鼠明顯大腦皮層炎癥反應(yīng)及神經(jīng)元死亡,炎癥反應(yīng)7d14d28d。DC后7d、14d時(shí)逐漸減輕炎癥反應(yīng),但28d時(shí)加重炎癥反應(yīng)。神經(jīng)元死亡數(shù)7d時(shí)TBI組TBI+DC組,14d時(shí)相差不大,28d時(shí)TBI組TBI+DC組。綜上,早期去骨瓣減壓術(shù)對(duì)于CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷有治療作用,但4周后顱骨缺損不利于神經(jīng)功能恢復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 高永強(qiáng);楊巧蓮;王偉;;大鼠局灶性腦缺血模型制備及取腦方法實(shí)驗(yàn)研究[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年04期

2 侯德仁;薛俐;陳坤;田怡;萬(wàn)順;;丁苯酞對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬GFAP和VEGF的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

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本文編號(hào)：1164575