本文關(guān)鍵詞：云南部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌的分離與鑒定及其血清型、配型初步研究

  更多相關(guān)文章： 新型隱球菌 黑米瓊脂培養(yǎng)基 血清型 交配型 鴿糞

【摘要】：研究背景:1894年新型隱球菌被確認(rèn)為自然疫源性條件致病性真菌,鄉(xiāng)下農(nóng)場、蝙蝠洞、腐爛的蔬菜、瓜果、昆蟲以及健康人的口腔、體表、腸道以及鴿糞等多種基質(zhì)中可以檢出新型隱球菌,在所有基質(zhì)中鴿糞中新型隱球菌的陽性檢出率和生物量都是最高的。隨著化療藥物和皮質(zhì)類固醇廣泛應(yīng)用,導(dǎo)管插管、腹膜透析、器官移植等大量開展,特別是近年來人類免疫缺陷病毒(HIV)感染人數(shù)的增多,真菌感染成為社會關(guān)注焦點(diǎn)。其中新型隱球菌的感染尤為突出,主要侵犯人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng),導(dǎo)致致命性的腦膜腦炎和呼吸系統(tǒng)疾病,如今已引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。隱球菌病死亡率高,但目前隱球菌病系統(tǒng)流行病學(xué)資料尚缺乏,人類之間相互傳染的病例極其罕見,而隱球菌普遍存在于自然環(huán)境中,對新型隱球菌的生存環(huán)境的研究已學(xué)成為焦點(diǎn)。在我國,新型隱球菌臨床株是研究重點(diǎn),對新型隱球菌環(huán)境株的調(diào)查研究較少。2013年林麗娜等在大陸15個地域檢出80株新型隱球菌環(huán)境株,而且發(fā)現(xiàn)隱球菌臨床株與環(huán)境株之間在中國大陸范圍內(nèi)具有較高的同源性,因此為了能夠有效避免新型隱球菌的感染,易感人群不能與滋生新型隱球菌的環(huán)境接觸。研究目的:目前云南省不同地理環(huán)境新型隱球菌的分布未作系統(tǒng)調(diào)查研究,鴿糞是新型隱球菌滋生的環(huán)境之一,本研究擬對云南省部分地區(qū)鴿糞中的新型隱球菌進(jìn)行分離鑒定,并調(diào)查其帶菌率以及分析其表型特征,為隱球菌病的預(yù)防、診療及科研提供參考依據(jù)。研究方法：1.研究對象:本次研究采用黑米瓊脂培養(yǎng)基對來自云南省大理、昭通、曲靖、臨滄地區(qū)的473份鴿糞標(biāo)本培養(yǎng)、純化分離,共分離鑒定出152株新型隱球菌。2.實(shí)驗(yàn)方法:2.1兩種新型隱球菌選擇性培養(yǎng)基的比較研究:采用黑米瓊脂培養(yǎng)基(Black Rice Agar Medium)和咖啡酸玉米瓊脂培養(yǎng)基(Caffeic Acid Cornmeal Agar Medium,CACA)對鴿糞中新型隱球菌進(jìn)行分離,對兩種選擇性培養(yǎng)基分離、純化和培養(yǎng)效果進(jìn)行比較。2.2云南省部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌的分離與鑒定:采用黑米瓊脂培養(yǎng)基對云南省大理、昭通、曲靖、臨滄地區(qū)的473份鴿糞標(biāo)本進(jìn)行分離純化和培養(yǎng),并且通過新型隱球菌特異性引物CN4和CN5進(jìn)行PCR擴(kuò)增,根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物大小對其進(jìn)行鑒定,并比較各個地區(qū)鴿糞中新型隱球菌帶菌率的異同。分離獲得新型隱球菌菌株并進(jìn)行保存。2.3云南部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌血清型與配型分析:采用新型隱球菌血清型及配型的特異性引物,對分離自鴿糞的152株新型隱球菌進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(Polimerse Chain Reaction,PCR)擴(kuò)增,根據(jù)陽性或陰性的擴(kuò)增結(jié)果對新型隱球菌的血清型和配型進(jìn)行鑒定。結(jié)果：1.黑米瓊脂培養(yǎng)基中新型隱球菌菌落光滑濕潤,呈棕黃色,狀似熔化巧克力。通過黑米瓊脂培養(yǎng)基處理鴿糞樣本70份,共分離鑒定出新型隱球菌菌株23株,檢出率達(dá)為32.86%�？Х人嵊衩篆傊囵B(yǎng)基(Caffeic Acid Cornmeal Agar Medium,CACA)中新型隱球菌菌落較黑米瓊脂培養(yǎng)基(Black Rice Agar Medium)上的菌落小,褐色且干燥�？Х人嵊衩篆傊囵B(yǎng)基(Caffeic Acid Cornmeal Agar Medium,CACA)中共分離鑒定出11株新型隱球菌,檢出率為15.71%。黑米瓊脂培養(yǎng)基的檢出率與CACA培養(yǎng)基的檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且白色絲狀真菌覆蓋性生長的培養(yǎng)皿數(shù)目少于CACA培養(yǎng)基,污染程度低于CACA培養(yǎng)基。2.云南省4個地區(qū)473份鴿糞標(biāo)本中共分離鑒定出152株新型隱球菌,平均陽性檢出率為32.13%。其中大理地區(qū)檢出率為26.08%,昭通地區(qū)檢出率為30.05%,曲靖地區(qū)檢出率為81.81%,臨滄地區(qū)檢出率為37.03%。4個地區(qū)檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=41.87,P0.01)。3.云南4個地區(qū)新型隱球菌環(huán)境株血清型均為A型,交配型均為α型。結(jié)論：1.作為新型隱球菌的選擇性培養(yǎng)基,黑米瓊脂培養(yǎng)基的分離、純化與培養(yǎng)效果(檢出效果和檢出率)均優(yōu)于CACA培養(yǎng)基。2.云南部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌帶菌率較高,且不同地區(qū)帶菌率不同。3.云南4個地區(qū)新型隱球菌環(huán)境株血清型均為A型,交配型均為α型,與臨床分離菌株具有高度同源性。
【關(guān)鍵詞】：新型隱球菌 黑米瓊脂培養(yǎng)基 血清型 交配型 鴿糞
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R519.4;R181.3
【目錄】：

• 英漢縮略詞與英漢對照5-6
• 中文摘要6-9
• abstract9-12
• 第一章：兩種新型隱球菌選擇性培養(yǎng)基的比較研究12-28
• 前言12-14
• 材料和方法14-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 第二章：云南省部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌的分離與鑒定28-41
• 前言28-29
• 材料和方法29-32
• 結(jié)果32-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 第三章：云南部分地區(qū)鴿糞中新型隱球菌血清型與配型分析41-48
• 前言41-42
• 材料和方法42-43
• 結(jié)果43-44
• 討論44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 文獻(xiàn)綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 附錄57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：904030