本文關(guān)鍵詞：2010～2015年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學(xué)及亞型特性分析

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【摘要】：目的:H3N2型流感病毒常不定期的引起不同程度的爆發(fā)流行,因該病毒的高變異性,目前的疫苗株對(duì)已發(fā)生抗原突變的病毒株不能產(chǎn)生有效的保護(hù)。通過(guò)對(duì)2010～2015年杭州地區(qū)甲型流感H3N2進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查,實(shí)現(xiàn)對(duì)該病毒菌株的分子變化進(jìn)行監(jiān)測(cè),并為疾病的防控提供可靠的科學(xué)證據(jù)。方法:1.2010年1月至2015年9月浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)相關(guān)數(shù)據(jù),各年度流感樣病例分別為:2406例、995例、766例、1156例、1928例和404例。分別采用研究試劑所有病例的咽拭子均分離到H3N2流感病毒,并經(jīng)過(guò)血凝抑制實(shí)驗(yàn)和流感病毒核酸監(jiān)測(cè)證實(shí)。2.參考A/NewYork/392/2004(H3N2)毒株,設(shè)計(jì)擴(kuò)增H3N2各個(gè)片段的全編碼區(qū)序列引物,通過(guò)PCR的方法對(duì)疑似患者進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序;3.序列收集:所有 H3N2 的 HA(hemagglutinin)與 NA(neuraminidase)基因完整序列均在GISAID及NCBI上搜索查找獲取。在GISAID數(shù)據(jù)庫(kù)上搜索關(guān)鍵詞分別為:"H3N2","Asia","China","Hangzhou","HA";或"H3N2","Europe","Switzerland","HA";"H3N2","North America","United States","texas","HA";"H3N2","Oceania","Australia","Victoria","HA";在 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中的"Nucleotide"中搜索"H3N2","HA","NA",并查找"hangzhou";4.HA與NA基因序列篩選與比對(duì):依據(jù)病毒的分離地、時(shí)間、宿主為前提條件進(jìn)行整合,條件相同序列只取一條。H3N2基因序列按照地區(qū)分為杭州及WHO推薦的 2013/2015 年流行疫苗株 A/TEXAs/50/2012(H3N2)、2013/2014 年流感疫苗株 A/Victoria/361/2011 和 2015/2016 疫苗株 A/Switzerland/9715293/2013 E5 3 作為參考毒株的HA和NA兩組。分組的序列分別用軟件Clustal X(v1.8)進(jìn)行比對(duì)、分析、剪切對(duì)齊。序列比對(duì)完成后,直接運(yùn)用Mega(v5.2)軟件,采用Neighbor-joing法進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。用FigTree軟件對(duì)圖形進(jìn)行編輯。結(jié)果:1.2010～2015年杭州地區(qū)H3N2亞型的核酸陽(yáng)性人數(shù)分別為73、42、40、33、62、30,H3N2 亞型核酸陽(yáng)性率分別為 3.03%、4.22%、5.67%、2.85%、3.77%、4.34%。2.2010～2015年杭州地區(qū)H3N2感染率分析,不同年度間H3N2感染率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=26.266,P0.05),不同性別和年齡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.168,χ2=12.954,P0.05)。3.2015年HA序列分析結(jié)果表明,該年度沒有形成新的病毒。4.通過(guò)對(duì)2010～2013年的NA序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)該序列高度保守。結(jié)論:2010～2015年杭州甲型流感病毒(H3N2)占流感總陽(yáng)性的46.9%,且絕大多數(shù)的病毒株屬于3C組。每年的冬春季節(jié)為杭州市H3N2流感流行期。由于3c.2和3c.3a病毒株間很少有抗原交叉,因此分支3c.3a中疫苗株A/Switzerland/9715293/2013參考株可能無(wú)法提供針對(duì)流行組3c.2病毒所需的保護(hù)。2015年1月～9月病毒株研究結(jié)果顯示,2015年分離株抗原決定簇在A區(qū)和B區(qū)有多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了變異,雖未形成新的亞型,但其他位點(diǎn)的變異正在加強(qiáng)。本文對(duì)2010年～2013年杭州H3N2亞型流感病毒NA基因的序列進(jìn)行測(cè)定,該基因的進(jìn)化路徑主要是以一進(jìn)化主干伴隨著多側(cè)支的方式進(jìn)化。但2012～2013年的毒株在進(jìn)化樹上沒有循序漸進(jìn)的過(guò)程,進(jìn)化呈現(xiàn)跳躍的方式,同一年代毒株可分為幾個(gè)分支同時(shí)存在,這些分支在進(jìn)化樹上的位置有高有低,進(jìn)化中由于免疫壓力和病毒自身進(jìn)化因素的影響,某些分支會(huì)成為進(jìn)化的主流。以往研究表明,NA的酶活性中心氨基酸是病毒和受體相互作用的主要因素,該中心位點(diǎn)序列是高度保守的,與病毒的繁殖能力有著直接的關(guān)系。本研究也證實(shí)了NA的酶活性中心位點(diǎn)是高度保守的。作為NA抑制劑藥物作用的位點(diǎn),它的保守也意味著杭州2010～2013年間在基因序列上沒有發(fā)現(xiàn)耐藥毒株。
【關(guān)鍵詞】：流感 甲型流感病毒 H3N2亞型 突變
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R511;R181.3
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 縮略語(yǔ)11-14
• 前言14-17
• 1 H3N2亞型特征14-15
• 2 流行情況15-17
• 第一部分 杭州地區(qū)2010～2015年H3N2流感病毒的監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)研究17-30
• 1 材料17-20
• 2 方法20-24
• 3 結(jié)果24-29
• 4 討論29-30
• 第二部分 杭州地區(qū)2010～2015年H3N2亞型的HA基因變異分析30-42
• 1 材料30-31
• 2 方法31-34
• 3 結(jié)果34-40
• 4 討論40-42
• 第三部分 杭州市2010年～2013年流感病毒流行期甲型流感病毒NA氨基酸變異及耐藥性分析42-47
• 1 材料和方法42-44
• 2 結(jié)果44-46
• 3 討論46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 綜述 流感病毒H3N2的臨床撿測(cè)方法研究進(jìn)展53-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果62

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