本文關(guān)鍵詞：青霉素耐藥肺炎鏈球菌的分子流行病學與適應(yīng)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景肺炎鏈球菌是肺炎、中耳炎、腦膜炎、血流感染的常見病原菌,據(jù)估算全球每年肺炎鏈球菌感染約1450萬例次,其中中國約170萬例次。肺炎鏈球菌的耐藥性不斷升高,而且青霉素藥敏MIC值在不斷升高,上海市肺炎鏈球菌對青霉素MIC最高值在1996-1999年1μg/ml,2004-2005年4μg/ml,2008-2009年8μg/ml,國際耐藥克隆的傳播對肺炎鏈球菌耐藥性上升有著重要影響。 目的通過對2011年分離的青霉素耐藥肺炎鏈球菌(PRSP)的血清型分型和多位點序列分型(MLST),分析肺炎鏈球菌耐藥克隆傳播趨勢：通過比較國際流行克隆和上海本土耐藥克隆在有無抗生素選擇壓力下適應(yīng)性差別,分析其流行的原因并推測今后可能的優(yōu)勢克隆。 方法(一)PRSP的分子流行病學：26株青霉素耐藥肺炎鏈球菌來自2011年SOAR肺炎鏈球菌耐藥監(jiān)測項目(上海市兒童醫(yī)院22株,浙江大學附屬第一醫(yī)院2株,北京協(xié)和醫(yī)院1株,江西省人民醫(yī)院1株),均來自痰標本,符合2011年非腦膜炎分離株口服青霉素耐藥標準(敏感≤0.06μ g/ml中介0.12-1μ g/ml耐藥≥2μg/ml)。觀察菌落形態(tài)特點及膽汁溶解試驗法完成菌株再鑒定,微量稀釋法復測青霉素藥敏及阿莫西林藥敏,用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法進行血清型鑒定；利用PCR方法擴增肺炎鏈球菌的7對管家基因,將管家基因PCR產(chǎn)物雙向測序,DNAstar軟件對測序結(jié)果進行拼接后通過MLST網(wǎng)站在線比對,獲得等位基因編號和序列型別(STs),eBURST軟件分析獲得克隆復合體分類及菌株間的親緣關(guān)系。 (二)肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評價：從26株P(guān)RSP(中選取的Spain23F-13株、Taiwan19F-141株、上海本土耐藥株4株。阿莫西林或阿莫西林/克拉維酸是臨床治療肺炎鏈球菌感染常用藥物,尤其是兒科在治療呼吸道感染的常用口服藥物,所以本部分研究選取阿莫西林作為評價藥物選擇壓力用藥。采用菌落計數(shù)法制作殺菌曲線(包括空白對照及1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC、8MIC固定藥物濃度)。根據(jù)空白對照(無選擇壓力)及1/2MIC藥物濃度(亞抑菌濃度)擬合生長曲線并計算生長動力學參數(shù)—世代時間,來評價無選擇壓力下及亞抑菌濃度下肺炎鏈球菌的適應(yīng)性差異；比較抑菌藥物濃度下(1-8倍MIC)達到99.9%的殺菌率的時間和抗生素濃度,評價在阿莫西林選擇壓力下的適應(yīng)性差異。 (三)體外藥動學藥效學(PK/PD)模擬方法評價肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性探索：選取Taiwan19F-14克隆ST320及ST271各1株,上海本土耐藥克隆1株。進行阿莫西林肉湯溶液藥物濃度檢測的HPLC-MS-MS方法學建立并驗證,以評價藥動學模擬效果。通過PK/PD模擬繪制動態(tài)殺菌曲線,比較Ke、AAC等指標,分析在藥物選擇壓力下肺炎鏈球菌的適應(yīng)性差異；比較ABBC0-24h與AAC0-24h的差值評價肺炎鏈球菌在無抗生素選擇壓力下的適應(yīng)性差異。 結(jié)果(一)PRSP分子流行病學：26株P(guān)RSP血清型主要為19F(26.9%)、19A(23.1%)、14(15.4%)、23F(11.5%),其他6株細菌為PCR方法不能鑒定的少見血清型,因此46.2%(12/26)的PRSP菌株血清型不被PCV7疫苗覆蓋。26株P(guān)RSP分屬以下10個MLST序列型：ST271、ST320、ST876、ST7964、ST81、ST2971、ST243、ST7963、ST7962、和ST1464,其中ST7962、ST7963和ST7964為新發(fā)現(xiàn)的序列型。26株P(guān)RSP中18株分屬Taiwan19F-14/CC320、Taiwan23F-15/CC242、 Spain23F-1/CC81和Netherlands15B-37/CC199等4個國際耐藥克隆。此外發(fā)現(xiàn)一個上海本土耐藥克隆(2株ST2971,4株ST7964)。 (二)肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評價：在無抗生素選擇壓力下的世代時間平均值spain23F-1克隆(0.1096h)Taiwan19F-14克隆(0.1225h)上海本土耐藥克隆(0.1599h)。在1/2MIC阿莫西林藥物濃度下的世代時間,spain23F-1克隆平均值(0.1522h)Taiwan19F-14克隆(0.1733h)上海本土耐藥克隆平均值(0.2198h)。在抗生素選擇壓力下,上海本土耐藥株均在4h或6h達到99.9%殺菌率,而國際流行耐藥克隆菌株在2h或4h達到99.9%殺菌率。 (三)體外藥動學藥效學(PK/PD)模型方法評價肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性探索：以細菌清除速率常Ke為比較指標時,500mg po q8h給藥方案的細菌清除速率常數(shù)結(jié)果顯示ST2971菌株未被抑制,而ST320的Ke(0.0677/h)ST271(0.117/h)；1000mg q8h給藥方案下ST2971(0.0418/h)ST320(0.0872/h)ST271(0.0890/h)。以AAC0-24h為比較指標,AAC0-24h值在兩種給藥方式下3株菌該指標比較結(jié)果均是：ST271ST320ST2971。以ABBC0-24h與AAC0-24h的差值比較不加藥情況下菌株的生長能力,ST320ST2971ST271。 結(jié)論1.克隆傳播在肺炎鏈球菌耐藥性上升中起重要作用,在傳播的過程中耐藥克隆在不斷重組演變。19A血清型呈現(xiàn)增多趨勢,青霉素耐藥肺炎鏈球菌中19A血清型比例較高,今后我國采用的肺炎鏈球菌疫苗應(yīng)考慮覆蓋19A血清型。 2.spain23F-1克隆、Taiwan19F-14克隆和上海本土耐藥克隆菌株在無抗生素選擇壓力下和阿莫西林亞抑菌濃度(1/2MIC)藥物選擇壓力下適應(yīng)性均依次降低。在2MIC濃度的阿莫西林選擇壓力下,上海本土耐藥克隆適應(yīng)性優(yōu)于spain23F-1克隆、Taiwan19F-14克隆,提示上海本土耐藥克隆的流行是在抗菌藥物選擇壓力下獲得了生長優(yōu)勢。 3.本研究建立了體外PK/PD模型,分別模擬阿莫西林口服500mg q8h和1000mgq8h給藥時中國人群血藥濃度變化,比較2種給藥方案選擇壓力下Taiwan19F-14克隆(ST320、ST271)菌株和上海本土耐藥克隆(ST2971)菌株的適應(yīng)性。以細菌清除速率和AAC0-24h值2個指標評價,在阿莫西林2種口服給藥方案選擇壓力下,上海本土耐藥克隆株的適應(yīng)性好于Taiwan1gF-14克隆,在Taiwan19F-14克隆中ST320適應(yīng)性好于其單突變體ST271。在阿莫西林口服500mg q8h給藥時2個克隆3株細菌的TMIC均小于30%；阿莫西林口服1000mg q8h給藥時Taiwan19F-14克隆2株細菌的TMIC可接近40%,但上海本土耐藥克隆(ST2971)菌株仍小于20%。為抑制Taiwan19F-14克隆傳播,阿莫西林口服給藥應(yīng)采取1000mgq8h給藥的大劑量給藥方案。 4.上海本土耐藥克隆均分離自兒童,對青霉素耐藥程度高(MIC值4～12μg／m1),阿莫西林口服500mg q8h和1000mg q8h2種給藥方案選擇壓力下適應(yīng)性優(yōu)于國際流行克隆spain23F-1和Taiwan19F-14,血清型均屬于少見型,暨有各類多糖和結(jié)合疫苗不能保護的血清型。因此在抗菌藥物和多價疫苗雙重選擇壓力下極可能獲得傳播優(yōu)勢,今后應(yīng)對其密切監(jiān)控。
【關(guān)鍵詞】：青霉素耐藥肺炎鏈球菌 耐藥克隆 血清型 分子流行病學 選擇壓力 適應(yīng)性
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R181.3
【目錄】：

• 術(shù)語與縮略語中英文對照4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一部分 青霉素耐藥肺炎鏈球菌的流行病學15-30
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-27
• 討論27-30
• 第二部分 肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評價30-37
• 材料與方法30-32
• 結(jié)果32-35
• 討論35-37
• 第三部分 體外藥動學藥效學(PK/PD)模型方法評價肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性方法建立及耐藥克隆菌株適應(yīng)性初步評價37-58
• 材料與方法37-41
• 結(jié)果41-55
• 討論55-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻59-64
• 綜述 肺炎鏈球菌流行病學變遷及其適應(yīng)性64-81
• 參考文獻73-81
• 致謝81-82

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：青霉素耐藥肺炎鏈球菌的分子流行病學與適應(yīng)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：309344