發(fā)布時(shí)間：2017-04-15 22:08

  本文關(guān)鍵詞：青霉素耐藥肺炎鏈球菌的分子流行病學(xué)與適應(yīng)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景肺炎鏈球菌是肺炎、中耳炎、腦膜炎、血流感染的常見(jiàn)病原菌,據(jù)估算全球每年肺炎鏈球菌感染約1450萬(wàn)例次,其中中國(guó)約170萬(wàn)例次。肺炎鏈球菌的耐藥性不斷升高,而且青霉素藥敏MIC值在不斷升高,上海市肺炎鏈球菌對(duì)青霉素MIC最高值在1996-1999年1μg/ml,2004-2005年4μg/ml,2008-2009年8μg/ml,國(guó)際耐藥克隆的傳播對(duì)肺炎鏈球菌耐藥性上升有著重要影響。 目的通過(guò)對(duì)2011年分離的青霉素耐藥肺炎鏈球菌(PRSP)的血清型分型和多位點(diǎn)序列分型(MLST),分析肺炎鏈球菌耐藥克隆傳播趨勢(shì)：通過(guò)比較國(guó)際流行克隆和上海本土耐藥克隆在有無(wú)抗生素選擇壓力下適應(yīng)性差別,分析其流行的原因并推測(cè)今后可能的優(yōu)勢(shì)克隆。 方法(一)PRSP的分子流行病學(xué)：26株青霉素耐藥肺炎鏈球菌來(lái)自2011年SOAR肺炎鏈球菌耐藥監(jiān)測(cè)項(xiàng)目(上海市兒童醫(yī)院22株,浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院2株,北京協(xié)和醫(yī)院1株,江西省人民醫(yī)院1株),均來(lái)自痰標(biāo)本,符合2011年非腦膜炎分離株口服青霉素耐藥標(biāo)準(zhǔn)(敏感≤0.06μ g/ml中介0.12-1μ g/ml耐藥≥2μg/ml)。觀察菌落形態(tài)特點(diǎn)及膽汁溶解試驗(yàn)法完成菌株再鑒定,微量稀釋法復(fù)測(cè)青霉素藥敏及阿莫西林藥敏,用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法進(jìn)行血清型鑒定；利用PCR方法擴(kuò)增肺炎鏈球菌的7對(duì)管家基因,將管家基因PCR產(chǎn)物雙向測(cè)序,DNAstar軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接后通過(guò)MLST網(wǎng)站在線比對(duì),獲得等位基因編號(hào)和序列型別(STs),eBURST軟件分析獲得克隆復(fù)合體分類及菌株間的親緣關(guān)系。 (二)肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評(píng)價(jià)：從26株P(guān)RSP(中選取的Spain23F-13株、Taiwan19F-141株、上海本土耐藥株4株。阿莫西林或阿莫西林/克拉維酸是臨床治療肺炎鏈球菌感染常用藥物,尤其是兒科在治療呼吸道感染的常用口服藥物,所以本部分研究選取阿莫西林作為評(píng)價(jià)藥物選擇壓力用藥。采用菌落計(jì)數(shù)法制作殺菌曲線(包括空白對(duì)照及1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC、8MIC固定藥物濃度)。根據(jù)空白對(duì)照(無(wú)選擇壓力)及1/2MIC藥物濃度(亞抑菌濃度)擬合生長(zhǎng)曲線并計(jì)算生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)—世代時(shí)間,來(lái)評(píng)價(jià)無(wú)選擇壓力下及亞抑菌濃度下肺炎鏈球菌的適應(yīng)性差異；比較抑菌藥物濃度下(1-8倍MIC)達(dá)到99.9%的殺菌率的時(shí)間和抗生素濃度,評(píng)價(jià)在阿莫西林選擇壓力下的適應(yīng)性差異。 (三)體外藥動(dòng)學(xué)藥效學(xué)(PK/PD)模擬方法評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性探索：選取Taiwan19F-14克隆ST320及ST271各1株,上海本土耐藥克隆1株。進(jìn)行阿莫西林肉湯溶液藥物濃度檢測(cè)的HPLC-MS-MS方法學(xué)建立并驗(yàn)證,以評(píng)價(jià)藥動(dòng)學(xué)模擬效果。通過(guò)PK/PD模擬繪制動(dòng)態(tài)殺菌曲線,比較Ke、AAC等指標(biāo),分析在藥物選擇壓力下肺炎鏈球菌的適應(yīng)性差異；比較ABBC0-24h與AAC0-24h的差值評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌在無(wú)抗生素選擇壓力下的適應(yīng)性差異。 結(jié)果(一)PRSP分子流行病學(xué)：26株P(guān)RSP血清型主要為19F(26.9%)、19A(23.1%)、14(15.4%)、23F(11.5%),其他6株細(xì)菌為PCR方法不能鑒定的少見(jiàn)血清型,因此46.2%(12/26)的PRSP菌株血清型不被PCV7疫苗覆蓋。26株P(guān)RSP分屬以下10個(gè)MLST序列型：ST271、ST320、ST876、ST7964、ST81、ST2971、ST243、ST7963、ST7962、和ST1464,其中ST7962、ST7963和ST7964為新發(fā)現(xiàn)的序列型。26株P(guān)RSP中18株分屬Taiwan19F-14/CC320、Taiwan23F-15/CC242、 Spain23F-1/CC81和Netherlands15B-37/CC199等4個(gè)國(guó)際耐藥克隆。此外發(fā)現(xiàn)一個(gè)上海本土耐藥克隆(2株ST2971,4株ST7964)。 (二)肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評(píng)價(jià)：在無(wú)抗生素選擇壓力下的世代時(shí)間平均值spain23F-1克隆(0.1096h)Taiwan19F-14克隆(0.1225h)上海本土耐藥克隆(0.1599h)。在1/2MIC阿莫西林藥物濃度下的世代時(shí)間,spain23F-1克隆平均值(0.1522h)Taiwan19F-14克隆(0.1733h)上海本土耐藥克隆平均值(0.2198h)。在抗生素選擇壓力下,上海本土耐藥株均在4h或6h達(dá)到99.9%殺菌率,而國(guó)際流行耐藥克隆菌株在2h或4h達(dá)到99.9%殺菌率。 (三)體外藥動(dòng)學(xué)藥效學(xué)(PK/PD)模型方法評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性探索：以細(xì)菌清除速率常Ke為比較指標(biāo)時(shí),500mg po q8h給藥方案的細(xì)菌清除速率常數(shù)結(jié)果顯示ST2971菌株未被抑制,而ST320的Ke(0.0677/h)ST271(0.117/h)；1000mg q8h給藥方案下ST2971(0.0418/h)ST320(0.0872/h)ST271(0.0890/h)。以AAC0-24h為比較指標(biāo),AAC0-24h值在兩種給藥方式下3株菌該指標(biāo)比較結(jié)果均是：ST271ST320ST2971。以ABBC0-24h與AAC0-24h的差值比較不加藥情況下菌株的生長(zhǎng)能力,ST320ST2971ST271。 結(jié)論1.克隆傳播在肺炎鏈球菌耐藥性上升中起重要作用,在傳播的過(guò)程中耐藥克隆在不斷重組演變。19A血清型呈現(xiàn)增多趨勢(shì),青霉素耐藥肺炎鏈球菌中19A血清型比例較高,今后我國(guó)采用的肺炎鏈球菌疫苗應(yīng)考慮覆蓋19A血清型。 2.spain23F-1克隆、Taiwan19F-14克隆和上海本土耐藥克隆菌株在無(wú)抗生素選擇壓力下和阿莫西林亞抑菌濃度(1/2MIC)藥物選擇壓力下適應(yīng)性均依次降低。在2MIC濃度的阿莫西林選擇壓力下,上海本土耐藥克隆適應(yīng)性優(yōu)于spain23F-1克隆、Taiwan19F-14克隆,提示上海本土耐藥克隆的流行是在抗菌藥物選擇壓力下獲得了生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。 3.本研究建立了體外PK/PD模型,分別模擬阿莫西林口服500mg q8h和1000mgq8h給藥時(shí)中國(guó)人群血藥濃度變化,比較2種給藥方案選擇壓力下Taiwan19F-14克隆(ST320、ST271)菌株和上海本土耐藥克隆(ST2971)菌株的適應(yīng)性。以細(xì)菌清除速率和AAC0-24h值2個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià),在阿莫西林2種口服給藥方案選擇壓力下,上海本土耐藥克隆株的適應(yīng)性好于Taiwan1gF-14克隆,在Taiwan19F-14克隆中ST320適應(yīng)性好于其單突變體ST271。在阿莫西林口服500mg q8h給藥時(shí)2個(gè)克隆3株細(xì)菌的TMIC均小于30%；阿莫西林口服1000mg q8h給藥時(shí)Taiwan19F-14克隆2株細(xì)菌的TMIC可接近40%,但上海本土耐藥克隆(ST2971)菌株仍小于20%。為抑制Taiwan19F-14克隆傳播,阿莫西林口服給藥應(yīng)采取1000mgq8h給藥的大劑量給藥方案。 4.上海本土耐藥克隆均分離自兒童,對(duì)青霉素耐藥程度高(MIC值4～12μg／m1),阿莫西林口服500mg q8h和1000mg q8h2種給藥方案選擇壓力下適應(yīng)性優(yōu)于國(guó)際流行克隆spain23F-1和Taiwan19F-14,血清型均屬于少見(jiàn)型,暨有各類多糖和結(jié)合疫苗不能保護(hù)的血清型。因此在抗菌藥物和多價(jià)疫苗雙重選擇壓力下極可能獲得傳播優(yōu)勢(shì),今后應(yīng)對(duì)其密切監(jiān)控。
【關(guān)鍵詞】：青霉素耐藥肺炎鏈球菌 耐藥克隆 血清型 分子流行病學(xué) 選擇壓力 適應(yīng)性
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R181.3
【目錄】：

• 術(shù)語(yǔ)與縮略語(yǔ)中英文對(duì)照4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一部分 青霉素耐藥肺炎鏈球菌的流行病學(xué)15-30
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-27
• 討論27-30
• 第二部分 肺炎鏈球菌耐藥克隆的適應(yīng)性評(píng)價(jià)30-37
• 材料與方法30-32
• 結(jié)果32-35
• 討論35-37
• 第三部分 體外藥動(dòng)學(xué)藥效學(xué)(PK/PD)模型方法評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌耐藥克隆適應(yīng)性方法建立及耐藥克隆菌株適應(yīng)性初步評(píng)價(jià)37-58
• 材料與方法37-41
• 結(jié)果41-55
• 討論55-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 綜述 肺炎鏈球菌流行病學(xué)變遷及其適應(yīng)性64-81
• 參考文獻(xiàn)73-81
• 致謝81-82

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：309344