【摘要】： 二十世紀(jì)八十年代以來我國(guó)性傳播疾病的發(fā)病率一直處于上升趨勢(shì)。淋病一直是我國(guó)發(fā)病率最高的性病之一，，近年來其發(fā)病率在各性病病種中居第二位。淋病奈瑟菌的耐藥性問題在過去的三十年中一直是淋菌感染治療所面臨的主要問題之一。耐青霉素淋球菌(PPNG)和質(zhì)粒介導(dǎo)的高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)分別與1976年與1985年被首先發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)。此后，耐藥菌株在世界范圍內(nèi)廣為流傳，尤其是在在一些亞洲及非洲國(guó)家。近年來，喹諾酮敏感性降低淋球菌菌株(QRNG)在東南亞國(guó)家及太平洋沿岸地區(qū)出現(xiàn)，其流行率非常之高，致使此類藥物在這一地區(qū)已經(jīng)退出了淋病治療的陣線，QRNG還蔓延到一些歐洲國(guó)家。大觀霉素和頭孢曲松的耐藥在世界范圍內(nèi)也有零星報(bào)道。為了監(jiān)測(cè)中國(guó)淋球菌對(duì)抗生素的耐藥性并發(fā)現(xiàn)其流行趨勢(shì)及特征，全國(guó)性病控制中心自1987年以來就在中國(guó)部分地區(qū)開展了耐藥淋球菌的監(jiān)測(cè)工作。 淋球菌分型有助于我們對(duì)淋病傳播以及耐藥菌株流行狀況的了解，為性傳播疾病預(yù)防和控制措施的制定提供依據(jù)。傳統(tǒng)的基因分型方法如營(yíng)養(yǎng)分型和血清分型曾用于淋病的流行病學(xué)研究，但由于這兩種分型方法存在其內(nèi)在缺陷，如費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、需要活的菌株、分型能力有限等，這些缺點(diǎn)限制了這些分型方法的進(jìn)一步運(yùn)用。近年來一大批基于基因水平的分型方法不斷涌現(xiàn)，這其中包括基于PCR-RFLP技術(shù)的opa基因分型方法，這種方法不僅簡(jiǎn)單易行，而且有著比傳統(tǒng)方法更強(qiáng)的分型能力。 全文總共分三章，各章的主要內(nèi)容簡(jiǎn)述如下： 第一章：淋病耐藥監(jiān)測(cè) 我們采用紙片酸度法測(cè)定菌株是否產(chǎn)β—內(nèi)酰胺酶，采用瓊脂稀釋法測(cè)定四環(huán)素、環(huán)丙沙星、大觀霉素和頭孢曲松對(duì)淋球菌的最小抑菌濃度(MIC)。對(duì)濟(jì)南、福州、南寧地區(qū)2005年收集到的379株淋球菌進(jìn)行了檢測(cè)，其中濟(jì)南99株，福州200株，南寧80株。在379株淋球菌中，產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)的陽(yáng)性率為26.6％；質(zhì)粒介導(dǎo)的耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)陽(yáng)性率為28.2％；耐環(huán)丙沙星淋球菌的陽(yáng)性率為98.4％，僅有6株為中度敏感；未檢測(cè)出對(duì)大觀霉素耐藥的淋球菌，對(duì)頭孢曲松耐藥的淋球菌也未檢出，但敏感株陽(yáng)性率僅為60.7％、中度敏感株陽(yáng)性率為39.3％。由此可見，三個(gè)地區(qū)分離的淋球菌中質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性(包括PPNG和TRNG)所占比例較大，頭孢曲松和大觀霉素為治療淋病的有效藥物，但頭孢曲松敏感性下降明顯，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)測(cè)。 第二章淋病奈瑟菌opa基因分型方法的建立與評(píng)估 建立了淋病奈瑟菌opa基因分型方法，并對(duì)這種方法的可行性做了評(píng)估。方法的建立主要分以下幾個(gè)步驟：1．淋球菌基因組DNA模板的制備；2．淋球菌opa基因的擴(kuò)增及擴(kuò)增片斷檢測(cè)；3．opa基因擴(kuò)增片斷的限制性酶切：包括分別進(jìn)行的TaqⅠ酶切和HpaⅡ酶切；4．聚丙烯酰胺凝膠電泳酶切基因片斷的分離；5．凝膠成像及成像后圖像的輸出與保存；6．用GelComparⅡ?qū)I(yè)分型軟件對(duì)所建立的方法進(jìn)行評(píng)估。方法的建立評(píng)估中我們選取淋病患者26例，17例來自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所性病科，這其中有4例來自2對(duì)兩兩之間有性接觸的性伴，剩余13例未承認(rèn)他們之間有任何性接觸；9例來自山東省皮防所，這其中也有2例來自1對(duì)兩兩之間有性接觸的性伴，剩余7例也未承認(rèn)他們之間有任何性接觸。26株淋球菌經(jīng)過兩種限制性內(nèi)切酶的分別酶切后，我們發(fā)現(xiàn)無(wú)論是用限制性內(nèi)切酶TaqⅠ還是限制性內(nèi)切酶HpaⅡ，存在性聯(lián)系的菌株之間opa基因被酶切后具有相同(100％)的長(zhǎng)度多態(tài)性，而無(wú)任何性聯(lián)系的菌株之間它們的opa基因被酶切后未發(fā)現(xiàn)具有類似相同的長(zhǎng)度多態(tài)性。試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)室結(jié)果與患者所提供的性接觸信息完全吻合，相互印證。 第三章淋病奈瑟菌opa基因分型方法的流行病學(xué)應(yīng)用 淋病在中國(guó)是最為常見的性傳播疾病之一，了解淋病的傳播路線及方式有助于制定淋病的控制措施。本章的目的是調(diào)查中國(guó)四個(gè)不同城市opa基因型的分布狀況并考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床資料之間的一致性問題。我們對(duì)從南京、濟(jì)南、福州、南寧四個(gè)城市收集來的330株淋球菌進(jìn)行opa基因分型，同時(shí)收集相應(yīng)的臨床和流行病學(xué)資料。結(jié)果在這330株淋球菌中產(chǎn)生了309個(gè)opa type，其中292個(gè)opa type各包含一株淋球菌，17個(gè)opa type各包含兩株或以上的淋球菌。Opa基因分型方法印證了臨床資料顯示的9對(duì)性伴侶之間的接觸，另外還進(jìn)一步揭示了9個(gè)opa cluster和8個(gè)similar pair，他們之間也存在著或近或遠(yuǎn)的性聯(lián)系。Opa分型是一種效率極高的淋球菌基因分型方法，能夠很好的應(yīng)用于淋球菌感染的流行病學(xué)調(diào)查研究中。用這種技術(shù)所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比患者提供的性接觸信息更貼近實(shí)際情況，并能讓我們更好的了解淋球菌的傳播狀況。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R759.2;R181.3

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