本文關(guān)鍵詞：泰興地區(qū)食管癌發(fā)病趨勢及家族聚集性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國毒理學(xué)會第四屆中青年學(xué)者科技論壇論文集》2014年

外泌體穿梭miR-21與食管癌發(fā)病關(guān)系研究

劉冉  廖娟  石亞娟  尹立紅  浦躍樸  

【摘要】：目的探討外泌體穿梭miR-21對食管癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及其與食管癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。方法 DiI染料熒光標(biāo)記食管癌細(xì)胞株EC9706培養(yǎng)上清來源的外泌體,應(yīng)用活細(xì)胞實時成像技術(shù)追蹤觀察外泌體的運(yùn)動;應(yīng)用熒光標(biāo)記的miR-21 mimic轉(zhuǎn)染EC9706,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-21 mimic在供受體細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移效率,qRT-PCR技術(shù)檢測受體細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平;將不同濃度GW4869與EC9706共培養(yǎng),qRT-PCR檢測GW4869對外泌體miR-21生成的影響;通過建立穩(wěn)定的供受體細(xì)胞培養(yǎng)模型,應(yīng)用EDU染色法、流式細(xì)胞技術(shù)、Transwell細(xì)胞體外遷移和侵襲試驗來觀察供受體細(xì)胞間非接觸性細(xì)胞交流對受體細(xì)胞生物學(xué)功能的影響;應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測與上述生物學(xué)功能相關(guān)的miR-21靶基因,采用Western Blot技術(shù)分析預(yù)測靶基因的蛋白水平。最后,通過檢測67對食管癌病人和健康對照血漿miR-21的表達(dá)水平,利用logistic回歸分析血漿miR-21表達(dá)水平與食管癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。結(jié)果活細(xì)胞實時成像技術(shù)顯示胞外的外泌體可以通過細(xì)胞膜進(jìn)入到活細(xì)胞內(nèi);外泌體穿梭miR-21在細(xì)胞間傳遞特征分析顯示外泌體來源的miR-21可以被轉(zhuǎn)移進(jìn)入受體細(xì)胞,在3h、6h、24h時轉(zhuǎn)移效率分別為85.3%、82.6%和85.0%,各時間點(diǎn)轉(zhuǎn)染組miR-21在受體細(xì)胞中平均倍數(shù)變化分別為1.49,1.41,2.08;GW4869與EC9706共培養(yǎng)實驗顯示細(xì)胞外miR-21的表達(dá)水平與外泌體的分泌抑制作用密切相關(guān)。供受體細(xì)胞共培養(yǎng)實驗表明外泌體穿梭miR-21可以促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖、抑制其凋亡,增加其體外遷移和侵襲能力;Western Blot結(jié)果顯示過表達(dá)miR-21后受體細(xì)胞中PDCD4表達(dá)較對照組降低了86.4%,提示PDCD4可能是miR-21參與食管癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲等生物學(xué)行為調(diào)控的靶標(biāo)之一。人群流行病學(xué)研究顯示miR-21在病例組血漿中的表達(dá)水平較對照組高2.96倍,條件logistic回歸分析表明miR-21表達(dá)上調(diào)可增加食管癌的發(fā)病風(fēng)險。結(jié)論胞外外泌體可通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),并能夠作為miR-21的載體實現(xiàn)細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn),從而參與食管癌的發(fā)生發(fā)展,提示血漿miR-21可能成為食管癌高危人群篩檢和診斷的候選生物標(biāo)志。

【作者單位】：
【分類號】：R735.1
【正文快照】：

外泌體穿梭miR-21與食管癌發(fā)病關(guān)系研究@劉冉$東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實驗室!南京210009 @廖娟$東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實驗室!南京210009 @石亞娟$東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實驗室!南京210009 @尹立紅$東南

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