發(fā)布時間：2017-01-02 10:28

  本文關(guān)鍵詞：我國部分地區(qū)沙門氏菌的分子分型及流行特征分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京醫(yī)科大學(xué)》 2009年

Rep-PCR基因指紋圖微生物源追蹤方法研究與應(yīng)用

李偉偉  

【摘要】：水源性病原體危害人類健康,而糞便污染是造成水中病原體污染的最主要原因,確定糞便污染來源對于健康危害評估及對污染水體的整改和管理至關(guān)重要。傳統(tǒng)的監(jiān)測方法只能對水體做出衛(wèi)生學(xué)評價,而無法查找水體中污染物的來源。Rep-PCR基因指紋圖微生物源追蹤技術(shù)則可以通過不同來源指示菌的源特征性基因指紋圖,結(jié)合統(tǒng)計學(xué)分析來查找水體中糞便污染來源。 目的 本研究旨在建立桂五水庫地區(qū)已知源特征性rep-PCR基因指紋庫,并用正確歸類率等統(tǒng)計學(xué)方法對其進行評價,檢測桂五水庫水樣標本,追蹤其為期一年的糞便污染來源。 方法 春、夏、秋和冬四季分別采集桂五水庫周邊村落已知來源的人和動物(家禽、家畜和野生動物)新鮮糞便標本,分離并確認指示菌大腸桿菌,以BOXA1R為引物進行PCR擴增。用Bionumerics 4.0軟件對rep-PCR基因指紋圖進行判別分析和多元方差分析并計算正確歸類率,以評價該方法對不同種屬來源指示菌的區(qū)分效果。按月采集水樣標本,膜過濾法分離指示菌,進行rep-PCR擴增,將水樣中指示菌rep-PCR基因指紋圖與已知源特征性rep-PCR基因指紋庫進行 統(tǒng)計學(xué)比對,判斷桂五水庫中糞便污染來源。 結(jié)果 1.從650份已知源糞便標本中分離2705株指示菌,篩選并建立已知源特征性rep-PCR基因指紋庫。 2.將已知源庫分為10類、5類、3類和2類統(tǒng)計分析,各種屬平均正確歸類率分別為:68.13%、74.76%、82.36%和86.03%。判別分析和多元方差分析結(jié)果顯示rep-PCR基因指紋圖能將已知源不同來源指示菌區(qū)分開。 3. 84份未知源水樣分離到534株指示菌,rep-PCR實驗得到502條特征指紋圖,指其中477條(95.02%)指紋圖可判別污染來源。判別分析結(jié)果顯示:桂五水庫中糞便污染來源種類多,人、雞、牛、羊、豬、鴨、鵝、野生動物、狗和鴿各占27.88%、15.51 %、11.53%、9.22%、8.39%、8.18%、6.01%、5.66%、 4.19%和3.35%,其中人、雞和牛3類共占54.92%。 結(jié)論 篩選并建立的已知源特征性rep-PCR基因指紋庫具有宿主特異性,能較好地區(qū)分水體中指示菌的不同來源;水體標本監(jiān)測顯示桂五水庫糞便污染來源種類多,其中人、雞和牛相對較多,提示應(yīng)對桂五水庫地區(qū)加強人、家禽和家畜動物糞便的無害化管理。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R123
【目錄】：

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