發(fā)布時間：2018-10-08 14:11

【摘要】： 研究目的 1.明確我國臨床分離的鮑曼不動桿菌對消毒劑的敏感性,尤其是亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌對消毒劑的敏感性。 2.篩選消毒劑敏感性下降菌株,揭示鮑曼不動桿菌消毒劑抗性機制。 材料和方法 第1章:收集我國16個城市25家醫(yī)院700株臨床分離的鮑曼不動桿菌(2004年12月-2005年12月),采用瓊脂稀釋法測定苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生三種消毒劑最低抑菌濃度(MIC),初步評估我國臨床分離的鮑曼不動桿菌對這三種消毒劑的敏感性,并比較三種消毒劑對亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB)和亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(ISAB)的MIC是否存在差異。 第2章:進一步根據(jù)克隆分層隨機挑選21株不同克隆的IRAB,采用懸液定量殺菌試驗測定三種消毒劑對不同克隆IRAB的殺滅效果,綜合MIC和殺菌試驗結(jié)果比較三種消毒劑對不同克隆IRAB的殺滅作用。 第3章:在第一部分研究基礎上篩選出20株三氯生敏感性下降菌株(MIC＞MIC_(90)),采用瓊脂稀釋法測定阿米卡星、左氧氟沙星、四環(huán)素、亞胺培南四種抗菌藥物MIC,比較三氯生敏感菌株和敏感性下降菌株抗菌譜有無差異;分別添加兩種外排泵抑制劑(CCCP和PAβN),測定其對三氯生和四種抗菌藥物的MIC有無影響;采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)進行同源性分析;采用PCR和雙脫氧核苷酸測序檢測fabI,基因突變;采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測fabI,基因、外排泵adeB、abeM和adeJ基因表達水平。 研究結(jié)果 第1章:(1)苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生對臨床分離的700株鮑曼不動桿菌的MIC遠遠低于消毒規(guī)范中規(guī)定的消毒劑臨床使用濃度。(2)IRAB葡萄糖醛酸氯已定和三氯生MIC幾何平均值高于ISAB,但苯扎氯銨MIC幾何平均值無差異,反映出IRAB存在對葡萄糖醛酸氯已定和三氯生耐受的潛在可能,其臨床意義有待第2章進一步采用懸液定量殺菌試驗來評估。 第2章:(1)苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生(臨床使用濃度)能夠有效殺滅不同克隆的IRAB,未發(fā)現(xiàn)臨床耐藥的情況;濃度是影響消毒劑殺滅效果的重要因素。(2)MIC結(jié)果表明,F克隆菌株對苯扎氯銨和葡萄糖醛酸氯已定敏感性有所下降,C克隆菌株對三氯生敏感性有所下降;懸液定量殺菌試驗結(jié)果表明,苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生對6個不同克隆IRAB及散發(fā)IRAB的殺滅效果均無顯著差異。 第3章:fabI基因Gly93Ser突變引起鮑曼不動桿菌對三氯生高水平耐受(MIC≥4mg/L),fabI高表達導致三氯生低水平耐受(MIC=1-2 mg/L),外排泵與三氯生耐受的關系仍待進一步研究。 結(jié)論 1.目前我國臨床分離的鮑曼不動桿菌對消毒劑敏感性較好,嚴格按照消毒規(guī)范操作能夠有效殺滅我國臨床分離的鮑曼不動桿菌。因此,合理規(guī)范的消毒隔離工作是有效控制鮑曼不動桿菌流行的必要條件之一。 2.由于IRAB(尤其是某些克隆)存在對消毒劑耐受的潛在可能,有必要對IRAB消毒劑敏感性進行監(jiān)測。 3.鮑曼不動桿菌能夠通過基因突變和高表達降低對三氯生的敏感性,有必要規(guī)范三氯生的使用,并監(jiān)測其敏感性。 研究目的 1.明確社區(qū)獲得金黃色葡萄球菌的致病基因ACME-arcA在甲氧西林耐藥溶血葡萄球菌(MRSH)中的分布情況。 2.研究ACME-arcA基因陽性菌株的表型特征和分子遺傳學特征。 研究方法 收集我院2002年4月-2003年4月住院患者臨床標本分離的88株MRSH。對ACME-arcA基因、arcA固有基因進行PCR擴增和測序,采用MEGA軟件進行系統(tǒng)進化分析。采用K-B瓊脂擴散法比較ACME-arcA基因陽性菌株和陰性菌株對10種抗菌藥物的耐藥性是否存在差異。采用PFGE對ACME-arcA基因陽性菌株進行同源性分析。采用PCR對ACME-arcA基因陽性菌株進行SCCmec分型。 結(jié)果 42株MRSH菌株ACME-arcA基因陽性,PFGE將其分為13個型。ACME-arcA基因陽性菌株和陰性菌株對抗菌藥物的耐藥性沒有差異。ACME-arcA基因、arcA固有基因系統(tǒng)進化分析顯示,MRSH的arcA固有基因和金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌的ACME-arcA基因的親緣關系更近。本研究在ACME-arcA基因陽性菌株中發(fā)現(xiàn)整合酶基因ccr的一種新亞型(ccrAB_(SHP))。42株ACME-arcA基因陽性菌株,8株攜帶V型SCCmec,8株攜帶C1型mec基因復合體和ccrAB_(SHP),剩余26株攜帶C型mec基因復合體和未分型ccr。 結(jié)論 首次在溶血葡萄球菌中發(fā)現(xiàn)ACME-arcA基因,因其有較高的陽性率、遺傳多樣性,經(jīng)系統(tǒng)進化分析,推測ACME可以在MRSH中廣泛移動,并由MRSH轉(zhuǎn)移至金黃色葡萄球菌。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R187

【參考文獻】

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本文編號：2257058