【摘要】： 自從上世紀(jì)八十年代初在德國發(fā)現(xiàn)第一例產(chǎn)ESBLs(Extend-Spectrumβ-Lactamases,超廣譜β-內(nèi)酰胺酶)的克雷伯菌以來,在全球各地不斷有ESBLs報道。革蘭陰性桿菌是導(dǎo)致感染的最重要病原菌,過去的三十年由于大量使用超廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素,產(chǎn)生藥物選擇性壓力,導(dǎo)致越來越多的革蘭陰性桿菌產(chǎn)生ESBLs。ESBLs是微生物對頭孢類抗生素形成耐藥的主要原因,同時也介導(dǎo)對其他抗生素耐藥,大多數(shù)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶由廣譜TEM-1、2和SHV-1衍生而來,可以水解氧亞氨基頭孢菌素類和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素;近年來,CTX-M型逐漸成為主要流行亞型。產(chǎn)ESBLs菌株既可以發(fā)生垂直傳播,也可以通過質(zhì)�；蜣D(zhuǎn)座子等進行產(chǎn)酶基因的水平傳播,可以在細(xì)菌種內(nèi)和種間進行傳播擴散,導(dǎo)致大規(guī)模的暴發(fā)流行。目前對于腹瀉病原菌產(chǎn)ESBLs尚缺乏系統(tǒng)研究。為了了解北京地區(qū)腹瀉致病菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的革蘭陰性桿菌的耐藥情況、各基因型的分布和分子流行病學(xué)情況,我們收集了2006年北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院、大興社區(qū)、307醫(yī)院、總政門診部的腹瀉標(biāo)本,進行了產(chǎn)ESBLs菌株的檢測、基因分型和流行機制的研究。 1.為了了解腹瀉病原菌中產(chǎn)ESBLs菌株的發(fā)生率、耐藥性和流行性,我們對收集的腹瀉標(biāo)本進行分離鑒定,采用了CLSI的雙紙片法進行了產(chǎn)ESBLs菌株的檢測,使用K-B法測定了產(chǎn)ESBLs菌株對多種抗生素的耐藥性。結(jié)果顯示,407株陰性桿菌中檢出ESBLs陽性菌株37株,總的檢出率是9.09%,產(chǎn)ESBLs菌株在分離的腹瀉病原菌中以大腸桿菌為主,共24株,占64%。產(chǎn)ESBLs菌株對于大多數(shù)β-內(nèi)酰胺類和非β-內(nèi)酰胺類抗生素(如氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素、氯霉素等)耐藥性均很高,為多重耐藥菌株,尤其是對哌拉西啉、頭孢噻肟、頭孢唑啉、頭孢匹羅、奈啶酸的耐藥率達到了90%左右。這些菌株對于復(fù)合抗生素(氨芐西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉維酸)的耐藥性也呈現(xiàn)上升趨勢,分別達到了70.27%和51.35%,而對于美洛培南高度敏感,達到了100%。陽性菌主要分離自7歲和45歲免疫力較低人群中。本研究認(rèn)為ESBLs是繼喹諾酮耐藥機制后成為腹瀉病原菌的一個重要的耐藥機制。 2.腹瀉病原菌中產(chǎn)ESBLs菌株的亞型的檢測和基因型分析。為了了解分離的ESBLs菌株的基因流行情況,我們采用了TEM型、SHV型和CTX-M型ESBLs編碼基因的通用引物對產(chǎn)ESBLs菌株進行擴增,并采用PFGE技術(shù)對分離的產(chǎn)ESBLs腹瀉病原菌進行了DNA指紋圖譜分析。結(jié)果顯示,在分離的產(chǎn)ESBLs的腹瀉病原菌中,CTX-M型是最為常見的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶型別, TEM型次之,SHV型最少,CTX-M亞型中CTX-M-15最多,部分產(chǎn)ESBLs瀉病原菌同時產(chǎn)生一種以上的β內(nèi)酰胺酶,少數(shù)菌株的ESBLs基因型不屬于上述三種基因型。分離的24株產(chǎn)ESBLs的大腸桿菌有7種基因型,最多見的一種譜型有8株細(xì)菌;5株產(chǎn)ESBLs的宋內(nèi)菌有兩種基因型,變形桿菌和克雷伯菌只有一種基因型。ESBLs不僅可以存在于不同種的細(xì)菌中,也可以存在同一種細(xì)菌的不同基因型中,推測可能是耐藥基因在不同細(xì)菌或同一細(xì)菌不同基因型中平行轉(zhuǎn)移的結(jié)果。 3.產(chǎn)ESBLs菌株接合子的ESBLs表型鑒定、質(zhì)粒分析、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶型別的測定為了了解產(chǎn)ESBLs腹瀉病原菌中編碼ESBLs的基因位于染色體或是質(zhì)粒、其傳播及擴散特征,我們對分離的37株產(chǎn)ESBLs的腹瀉病原菌進行接合試驗,受體菌為E.coli.J53 FOXRLAC-;采用采用了CLSI的雙紙片法對分離菌株進行了產(chǎn)ESBLs菌株的檢測,使用K-B法測定了產(chǎn)ESBLs菌株對多種抗生素的耐藥性,采用TEM型、SHV型和CTX-M型ESBLs編碼基因的通用引物對產(chǎn)ESBLs菌株進行擴增。 結(jié)果顯示,產(chǎn)ESBLs腹瀉病原菌轉(zhuǎn)移發(fā)生率為56.76%,轉(zhuǎn)移頻率為2.5×10-5～5×10-4,所有的轉(zhuǎn)移接合子的CISL表型確證試驗檢測均為ESBLs陽性。轉(zhuǎn)移接合子對頭孢類抗生素明顯耐藥,耐藥水平與供體菌相近,克拉維酸可以明顯降低接合子對這些抗生素的耐藥性。同時與供體菌相比,接合子對頭孢他啶、安曲南、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢吡肟的耐藥性明顯降低。瓊脂糖電泳顯示接合子從供體菌獲得了一個23.1Kb的質(zhì)粒,受體菌E.coliJ53 FOXRLAC-未見上述現(xiàn)象。轉(zhuǎn)移接合子中仍然是以CTX-M型為主,TEM次之,SHV編碼基因未能發(fā)生轉(zhuǎn)移。本部分的研究表明,產(chǎn)ESBLs腹瀉病原菌株能以較高頻率通過接合轉(zhuǎn)移方式水平傳播ESBLs編碼基因,受體菌獲得了產(chǎn)酶基因而出現(xiàn)ESBLs的表型;這些編碼基因由大的質(zhì)粒攜帶,這些質(zhì)粒往往同時攜帶其他非β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥基因,使得轉(zhuǎn)移接合子表現(xiàn)多重耐藥性。轉(zhuǎn)移過程中可出現(xiàn)基因分離現(xiàn)象,CTX-M型仍是最常見型。 根據(jù)以上三個部分的研究,可以得出如下結(jié)論: 1.產(chǎn)ESBLs菌株在腹瀉病原菌中的檢出率較高,主要在老人和小孩多見,在醫(yī)院和社區(qū)存在傳播和流行,ESBLs已經(jīng)成為了腹瀉病原菌的一個重要的耐藥機制。 2. ESBLs為多重耐藥菌株,對大多數(shù)常用的β-內(nèi)酰胺類抗生素和非β-內(nèi)酰胺類抗生素顯著耐藥。 3. ESBLs基因型以CTX-M(CTX-M-15)最常見,還有CTX-M-3、TEM-1較為普遍,部分腹瀉病原菌產(chǎn)一種以上的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。 4.產(chǎn)ESBLs菌株可以通過垂直方式傳播,也可以通過轉(zhuǎn)移接合方式發(fā)生產(chǎn)酶基因的水平傳播。編碼ESBLs質(zhì)粒同時攜帶非β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥基因,導(dǎo)致多重耐藥,這些非β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性可以與ESBLs表型發(fā)生共轉(zhuǎn)移。 5. ESBLs可以存在于不同種細(xì)菌,也可以存在于同種細(xì)菌的不同基因型,因此,我們在腹瀉高發(fā)期應(yīng)該需要加強產(chǎn)ESBLs菌株的檢測及其感染的防治。
[Abstract]:In order to understand the drug resistance of Gram - negative bacilli , which is the most important pathogenic bacterium in the past 30 years , most of the super - broad - spectrum 尾 - lactamase produced by broad - spectrum TEM - 1 , 2 and SHV - 1 can hydrolyze oxyimino - cephalosporin and monocyclic 尾 - lactam antibiotics . In recent years , most of the super - wide - spectrum 尾 - lactamase are derived from broad - spectrum TEM - 1 , 2 and SHV - 1 .


1 . In order to understand the incidence , drug resistance and epidemic of the strains producing strains in the pathogenic bacteria of diarrhea , the drug resistance of the isolates was detected by double - sheet method . The results showed that the drug resistance of the isolates was 9 . 09 % . The results showed that there were 37 strains of 尾 - lactam and 51 . 35 % of the isolates . The strains were mainly isolated from 7 and 45 years old .


The results showed that CTX - M was the most common type of 尾 - lactamase , TEM , SHV and CTX - M producing strains . The results showed that CTX - M was the most common type of 尾 - lactamase .


3 . In order to find out the gene located on chromosome or plasmid , its transmission and diffusion characteristics , the isolates were tested by using double - sheet method . The isolates were tested by using the double - sheet method . The strains were amplified by using the universal primers of TEM , SHV and CTX - M - producing strains .


The results showed that the incidence of pathogenic bacteria transfer was 56.76 % and the transfer frequency was 2.5 脳 10 - 5 锝，

本文編號：2131616